动物微生物细菌病的实验室诊断方法

细菌病的实验室诊断方法1.学习目标知识目标掌握细菌病实验室诊断的方法理解利用各种诊断方法的进行鉴定的意义能力目标具备结合临床病例设计实验室诊断方案的能力2.主要内容病料的采集、保存和运送细菌的形态学检查细菌的别离培养生化试验动物接种血清学试验分子生物学技术3.重点与难点重点细菌病实验室诊断的方法难点设计实验方案4.细菌病的实验室诊断初诊：根据流行病学、病症、病变等方面的疾病特征，做出初步诊断通过实验室诊断，确定病原是否是细菌以及病原菌的类型实验室诊断是在临床诊断的根底上进行的5.细菌病实验室诊断方法病料的采集、保存和运送细菌的形态学检查细菌的别离培养生化试验动物接种血清学试验分子生物学技术6.病料的采集、保存和运送病料采集遵循的原那么防止污染无菌采样适时采样适当部位病料采集方法〔不同病料不同方法〕实质脏器液体材料其他病料病料的保存和送检7.防止污染动物剖检个人防护和消毒动物尸体处理废弃物处理8.动物剖检剖检场所：应选择便于消毒、不渗水的解剖地点，最好有专门的剖检场所和剖检台。剖检前，动物尸体应浸泡消毒。9.个人防护和消毒做好个人防护：剖检过程中，注意个人防护。剖检后的器械浸泡消毒后洗刷。10.动物尸体焚烧炉深埋（投入消毒药）动物尸体处理燃烧或深埋：剖检后动物尸体和病料燃烧灭菌或消毒深埋。11.垃圾直接洗刷处理不当会引起人和动物疫病的散播动物或人的传染病废弃物处理12.无菌采样目的防止病料被污染方法所用器械和器皿必须灭菌点燃酒精灯注意无菌操作13.适时采样细菌丰富增殖时期、病料应该新鲜：取濒死动物或刚死亡的动物。死亡动物采集病料夏天不宜迟于6～8h，冬天不迟于24h。14.适当部位选择病料的部位可采用两个原那么第一原那么：根据疾病的类型和表现采集病变最典型的部位第二原那么：一般采集正常无菌的部位15.典型采样心包积液脑部病变16.实质脏器的采集剖开体腔后，立即采集，置于无菌容器内。污染或剖开过久的被检器官：先烧烙外表，然后在烧烙的深部取一块实质脏器，放在灭菌容器内。如有细菌检验条件，可在剖检后直接做病料的触片染色和细菌的别离培养。17.液体病料的采集脓汁、胸水一般用灭菌的棉棒或吸管吸取放入试管内，塞好棉塞送检。血液可无菌操作从静脉或心脏采血，然后加抗凝剂〔每1ml血液加3.8%枸橼酸钠0.1ml〕。假设需别离血清，那么采血后放在灭菌的容器中，摆成斜面，待血液凝固析出血清后，再将血清吸出，置于另一灭菌试管中送检。18.其他病料的采集皮肤要取有病变且带有一局部正常皮肤的部位。被毛或羽毛取病变明显部位，并带毛根放平皿。胎儿可将流产胎儿送往实验室，也可用吸管或注射器吸取胎儿胃内容物放入试管送检。肠道及内容物需选择病变最明显的局部，将其中内容物去掉，用灭菌水轻轻冲洗后放平皿内。19.细菌性病料的保存和送检低温保存尽快送检做好记录畜主姓名、动物种类、地址、发病情况、欲检部位及检验工程、采集时间等20.细菌的形态学检查方法光学显微镜检查电子显微镜检查意义观察病料中有无细菌以及细菌的形态、数量、分布、结构、种类等，进行初步判断21.细菌的别离培养方法：用分区划线法在适宜培养基上培养意义看培养基中有无细菌生长推断是否为细菌病依据菌落的特征判断细菌种类用菌落中的细菌进一步作形态学鉴定可进一步作生化鉴定、血清学鉴定及动物试验可进一步作药敏试验22.别离培养通常选用适合目标菌生长的平板培养基对细菌进行别离培养。不同细菌的菌落大小、形态、色泽、外表特征、边缘状态、隆起度、透明度等特征不同。有的细菌在鲜血琼脂平板上形成溶血环。也可采用选择培养基或鉴别培养基，以起到抑制杂菌或快速鉴别的效果。比方肠道杆菌科可选择麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂。23.分区划线法24.不同细菌的菌落大小、形态、色泽、表面特征、边缘状态、隆起度、透明度等特征不同不同细菌的菌落25.溶血环有的细菌在鲜血培养基上有β-溶血现象26.伊红美蓝培养基、麦康凯培养基上大肠杆菌菌落27.细菌的生化试验进行生化试验的细菌必须是纯培养物。检验时，根据可疑细菌的生化特性选择特定的一组生化试验，将结果与标准进行比照，以确定病原菌的种类。例：不同种沙门氏菌的生化鉴定28.鸡白痢沙门氏菌鸡伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌不同种沙门氏菌的生化鉴定29.意义将待检细菌液接种到动物体内，观察动物发病情况，进一步确认可疑细菌的致病作用和类型。接种对象本动物试验动物接种途径动物接种30.灌口肌肉注射腹腔注射皮下注射脑内接种静脉注射常用的动物接种途径31.血清学试验临床诊断中，可用于细菌的血清分型、快速诊断或大群检疫。用抗体检测动物体内的病原菌用的病原菌抗原检测动物血清中的抗体例：鸡白痢的检疫32.1、加一滴抗原2、加一滴鸡的全血3、将抗原和血液混匀4、静置2min,观察结果鸡白痢检疫—全血平板凝集试验33.鸡白痢检疫结果34.分子生物学方法分子生物学技术对病原菌的快速诊断和不能人工培养的细菌的探索发挥巨大的作用。

PCR技术、核酸分子杂交技术等。35.大肠杆菌病实验室诊断方案病料中细菌的形态学检查病料中细菌的别离培养18小时后动物致病性试验涂片革兰氏染色生化试验H2S试验糖发酵试验MR试验10日龄小鸡，皮下注射0.2ml/只病料纯培养36.大肠杆菌病实验室诊断结果剖检〔采集病料〕纤维素渗出物的涂片染色别离培养〔麦康