《健康人（异体）免疫细胞CIK的制备和临床技术规程》征求意见稿

2健康人（异体）免疫细胞（CIK）的制备和应用技术规程1.适用范围本文件适用于在有资质的医师指导下，在正规的医疗机构内，对肿瘤患者，特别是常规治疗失败后，复发转移的晚期肿瘤患者的治疗；以及肿瘤患者常规治疗后预防肿瘤复发和转移。2.规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。《中华人民共和国药品管理法》-2019年8月26日修订国家卫健委科教司《体细胞临床研究工作指引（试行）》的通知-2023-08-18T/CGCPU019—2022《免疫细胞产品供者材料管理要求》3.术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1免疫细胞产品immunecellproduct,经过体外分离、培养、扩增后制成的，应用于临床研究的人源活免疫细胞3.2供者donor,用于免疫细胞产品（3.1）采集、制备,收获细胞的源是健康人.3.3供者材料donormaterials,从符合筛查标准的供者（3.2）获得的用于免疫细胞产品（3.1）生产的免疫细胞。3.4生物安全biosafety,人类生命健康和生态系统相对处于没有危险和不受生物因子及相关因素威胁的状态.4.细胞培养常规技术资料4.1清洗与消毒4.1.1玻璃器皿的清洗清水浸泡——洗衣粉刷洗——自来水冲洗——晾干，浸酸过夜——自来水冲洗10次以上——蒸馏水洗2-3次——烘干，包装——灭菌，贮存备用。4.1.2培养板的清洗3用后立即浸入水中——洗衣粉清洗——自来水冲洗——晾干，浸酸(强酸)过夜——自来水冲洗10次以上——蒸馏水洗2-3次——烘干，浸入70%乙醇（盖盖以防乙醇挥发。临用前取出，在空气中干燥，置干净盒内备用。*注不宜用毛刷刷洗，如残留有附着物，可用脱脂棉蘸水拭掉，流水冲洗干净。4.1.3载玻片的洗涤新玻片：自来水冲洗——晾干，洗液中浸泡数小时——流水冲洗数小时——蒸馏水冲洗数遍——浸入70%乙醇（盖盖以防乙醇挥发）。临用前取出，在空气中干燥，置盒内备用。旧玻片：肥皂水煮沸——温肥皂水洗——流水冲洗——晾干，洗液中浸泡数小时——流水冲洗——蒸馏水冲洗数遍——浸入70%乙醇（盖盖以防乙醇挥发）。临用前取出，在空气中干燥，置盒内备用。*注意不要彼此紧贴在一起4.1.4胶塞的清洗自来水浸泡——2%NaOH煮沸10~20分钟——自来水冲洗——1%稀HCl浸泡30分钟——自来水冲洗——蒸馏水冲洗2~3次——晾干，备用。4.2灭菌[原理]使用电热手提式压力蒸汽灭菌器，利用在密闭容器内加热，水就能生成压力蒸汽，蒸汽的温度随着压力的增高而上升，具有良好的穿透性，能使容器内的物品迅速潮润和加热的原理，使微生物迅速被杀灭，最终达到灭菌的效果。4.2.1使用前，先检查主体内水位是否超过电热管。4.2.2在加热开始时，放气阀垂直，使空气随加热由桶内逸出。待有较急的蒸汽喷出时，即将放气阀拨回水平位置。4.2.3瓶皿121-126℃15min;器械121-126℃10min;橡胶121℃15min;溶液121-126℃20-40min4.2.4当压力到达所需的范围时，开始计算时间。124-126℃灭菌时，安全阀能使之维持恒压；低于124℃时，则应在蒸汽压力到达所需范围时，适当调节开关使之维持恒压。4.2.5灭菌完，要迅速使之干燥者，将灭菌器内的蒸汽通过放气阀迅速排出。等压力为0时，再稍等1-2分钟，然后将盖打开，继续加热10-15分钟，使物品上残留的水蒸汽得到蒸发，随后关掉；灭菌液体时，应将液体灌装在玻璃瓶中，以不超过3/4体积为好，瓶口用棉花纱布塞好，并用绳子扎在瓶颈上，使瓶内的空气能自然泄出，而又不致使4瓶塞落入瓶内。灭菌完，先关电源，等压力为0时，再稍等几分钟，打开放气阀，排出余气后，才能将盖开启。4.3溶液配制4.3.1洗液的配制重铬酸钾先溶于水中，然后，将浓硫酸缓慢加入。[强液]重铬酸钾63g浓硫酸1000ml蒸馏水200ml「常用」重铬酸钾63g溶于800ml蒸馏水,再缓慢加入浓硫酸1000ml.「本室」重铬酸钾120g：浓硫酸200ml：蒸馏水1000ml4.3.2培养液的配制（1）.把干粉加入15-30℃（室温）三蒸水中，缓慢搅拌令之溶解，并将袋中微量粉末冲下。（2）.加NaHCO32.0g/L1640培养液或3.7g/LDMEM培养液。稀释至1L。（3）.用1NHCl或1NNaOH将pH调低于正常pH*7.2—7.3。（在正常情况下，培养液pH介于7.2-7.4间，呈桃红色。（4）.立即除菌过滤。（通常过滤后pH升高0.1-0.3）4.3.3消化液的配制（0.25%胰蛋白酶）（1）.将pH7.2的PBS液高压消毒灭菌。(2).称取胰蛋白酶粉末0.25g，先用少许消毒的盐溶液调成糊状，然后再补足盐溶液，搅拌混匀，置室温4小时或冰箱内过夜，并不时搅拌振荡。(3).除菌过滤，分装入瓶，-20℃冰箱保存。4.3.4BSS的配制(PBS克/升）(1).准确称量试剂。(含有水份的水化物，与不含水份者的称量不同，应加以换算)。KCl0.2KH2PO40.2NaCl8.0Na2HPO4·7H2O.56.(2).依次溶解在750ml水中，待前一种试剂完全溶解后，再溶解下一种成分。（3）.补足水分至1000ml。除菌过滤或高压灭菌10min，分装瓶中，4℃保存。4.4细胞培养操作技术4.4.1细胞计数法（1）.悬液制备：取待测细胞，向培养瓶内加1ml0.25%胰蛋白酶液，37℃温箱中消化，至细胞接近脱离瓶壁前吸出消化液，加新的培养液5.0ml，轻轻吹打制备成细胞悬液。（2）.染色：取吸管1支，伸入培养瓶中，轻轻反复吹打细胞悬液使细胞重悬均匀后，立即吸细胞悬液少许，向离心管中滴入9滴，再滴入0.4%的台盘蓝染料1滴，混匀，置2-3min。（3）.镜检：把计数板平放在显微镜台上，从边缘滴1-2滴已染色的细胞悬液。镜下观察可见细胞5分散各处，健康细胞胞体完整，透明不着色，凡着色细胞均为不健康者。（4）.计数：细胞数/ml悬液=（4大格细胞总数/4）*104*毫升数.（5）接种：一般接种量在105-106细胞/ml范围.4.4.2细胞传代⑴.将瓶中的培养液倒出，镜检，离心重悬细胞，用吸管将瓶壁上的细胞吹打均匀。⑵.培养中的细胞分瓶，并加入培养液8-10ml，置培养箱中培养。⑶.悬浮细胞传代时，只需吸出少量细胞转入新瓶，并补足营养液即可。5健康人(异体)CIK细胞制备规程5.1仪器设备条件5.1.1场地条件1）GMP千级净化室（细胞制备）100-300m22）普通实验室（质量检测）50-100m23）洗涮、准备间2-500m25.1.2大型设备1）血细胞分离机（单采机）1台2）流式细胞仪1台,（3）酶标分析仪1台,（4）内毒素检测仪1台5.1.3普通设备:（实验室具备，数量随意）5.2供者条件(1)、年龄18-30岁，男、女不限，血型不限。患者的亲属和朋友更好,(2)、血象WBC在5000/mm3以上，淋巴细胞20%以上。(3)、无传染病：甲、乙、丙病原检测合格、艾滋病毒（HIV）、梅毒阴性。(4)、流式细胞仪(FCM)测：CD45+细胞大于2000/mm3,(5)、对K562的自然杀伤活性大于80%。供者的体检结果应符合国家卫生部颁布的《献血体检标准》。无菌条件下采集的单核细胞，收集于CPD抗凝血袋内。4℃保存待用，24小时内处理。5.3制备程序5.3.1包被培养瓶1）取50ml离心管，分别移入10mlD-PBS。（2）每管加入专用试剂若干，CD3Ab50μl，混匀后移入T75培养瓶，标记。(3).将培养瓶平放在4℃冰箱内，避光过夜。5.3.2分离培养PBMC:(1).供者条件符合要求。单采机采取分离出相应数量单个核细胞）。(2)取上述单核细胞液50ml，平均移入两个50ml离心管中，加入全血体积20%（每管5ml的羟乙基淀粉，垂直静置30-60分钟。（一般降到1/2体积）,(3)将两管中的上层（血浆+淋巴细胞）移入新的离心管，350g/10min离心,(4).取上清（血浆）移入新的离心管，56℃水浴/30min灭活,(5)水浴灭活后的血浆，室温800g/20min离心，取上清（即自体血浆）留6用,(6)取10mlFicoll移入新的50ml离心管,(7)细胞沉淀用20mlD-PBS重悬，细胞悬液缓慢加入Ficoll层，室温，380g/20min离心,(8)吸取PBMC层，加D-PBS至40ml洗涤，室温，350g/8min离心,(9)弃上清，细胞沉淀加培养基至40ml洗涤，取样计数，室温，300g/8min离心,(10)计数细胞，测定细胞活度,(11)取包被的培养瓶，弃包被液，用D-PBS和培养基分别洗一次,(12)调制细胞悬液，分别加入培养瓶。接种细胞数3×107(106/ml)/30ml/瓶,(13)每瓶加入IL-230μl（1000U/μl），IFN-γ15μl(1000U/ml)，自体血浆1.5ml(即血浆浓度为5%)。显微观察，置于5%CO2，37℃培养,(14)显微观察细胞状态，理论上，若第2天细胞状态好，可不加血浆，并且转袋前尽量减少移动细胞，使细胞与包被液试剂充分接触。5.3.3细胞转移至培养袋，在接种的4天（1）用巴氏吸管吹打贴附在培养瓶上的细胞，细胞悬液转移至50ml离心管中，取样计数2）吹打后，显微镜下观察贴壁细胞情况，如仍较多，每培养瓶加入5—10ml培养液继续吹打。（此时细胞一般不用酶来消化，以免损伤细胞3）计数细胞，检测细胞活度，杀伤活性，流式细胞仪测定等4）分离细胞通过注射器套筒转移至培养袋，培养液调至200ml（1×105/ml），添加IL-2100μl，自体血浆6mlIL-2为500U/ml，补救措施为将血浆含量提高到3%，细胞浓度一般不可低于0.4×105/ml5）每天显微观察细胞状态6）隔天等量添加培养液并取样计数细胞等。同时添加IL-2,500U/ml，自体血浆1%及8万U/2ml庆大霉素一支所加培养液已加入白蛋白，含量为0.3%，即1000ml培养液加入20%白蛋白15ml）。5.3.4回收细胞1）在培养袋三次加液后（分离接种细胞的第12天袋中培养液体积为1200-1800ml(初转袋时150或200ml),收集细胞2）用50ml离心管分离细胞，D-PBS洗涤2次，取样进行质量检测。5.4质量检测和标准5.4.1显微观察细胞状态，取样计数。①肉眼观察，培养袋或培养瓶中培养液清澈，无混浊，②显微观察细胞状态良好，大小基本均匀，反光度好，如有集落形成，证明生长良好。取样计数备用。具体方法看第二章：细胞计数法。5.4.2细胞活度：方法为第三章第九节“台盼兰拒染细胞活度鉴定法”，细胞活度达90%以上为合格。5.4.3杀伤活性：效应细胞为CIK细胞，靶细胞为K562细胞。效：靶=20:1,杀伤活性达80%以上为合格。5.4.4流式细胞仪检测CIK细胞表型：CD3CD56双阳性细胞达20%或以上为合格。具体方法7见：第三章（十一）流式细胞仪检测CIK细胞表型具体方法介绍。安全检测：热源，病毒,支原体，细菌（霉菌）检测合格。5.4.5（A）热源检测-定性检测法：取CIK细胞培养上清液用鲎试剂凝胶法检测：结果阴性（-）为合格。定量法测定：原理:热源又叫内毒素，是革兰氏阴性细菌的细胞壁组成部分。医学工业普遍接受的观点---控制内毒素污染，就等于控制了热源（细菌）污染。鲎试剂内含有被微量内毒素激活的凝固酶可和鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。据此可判断热源（细菌）污染与否。5.4.5(B)热源检测-定量检测法：仪器名称：动态试管检测仪ATL/LIK产地：英国(莱伯金耐特)LabKineticsLtd型号：ATi320采购厂商：湛江安度斯生物有限公司光度法细菌内毒素检测盒，规格：10样本/盒检测流程：仪器及软件准备：试验前开启动态试管检测仪，温度在37oC.（1）样品阳性对照液制备，每个样品取已制备的样品溶液0.4ml加入到细菌内毒素工作标准品中，放置漩涡混合器上混合1min,得到样品阳性对照液2）样品溶液制备：用配套的采样瓶采集样品，每种样品分别取0.1ml加入到0.9ml样品稀释瓶里，混匀，即得样品溶液,(3).鲎试剂复溶:开启鲎试剂和试剂复溶液，取0.25ml试剂复溶液加入鲎试剂瓶中，摇匀，放置1min,得鲎试剂溶液，取若干反应试管，每管加0.05ml鲎试剂,(4)加样及反应：4.1阴性对照项：取0.1ml样品稀释瓶中的溶液加入到0.05ml鲎试剂溶液的反应试管，平行两管，轻轻混匀立即插入动态试管仪中反应。4..2阳性对照项：取0.1ml阳性对照液加入到0.05ml鲎试剂溶液的反应试管，平行两管，轻轻混匀立即插入动态试管仪中反应。4.3样品检测项及样品阳性对照项：每个样品取0.1ml样品溶液及样品阳性对照溶液加入到0.05ml鲎试剂溶液的反应试管，各平行两管，轻轻混匀后立即插入动态试管仪中反应。结果分析：(1)试验有效性条件：阴性对照项检测值应小于标准曲线最低点的检测值。(2)试验准确性判断：阳性对照项回收率应在50－200%之间。(3)样品无干扰的判断：样品阳性对照项的回收率应在50－200%之间。检测结果判断标准1）细胞培养液等，细菌内毒素不大于0.5EU/mL，执行标准《中国药典》;（2）、透析用水中的内毒素含量应不超过0.25EU/mL，执行标准YY0572-2015《血液透析及相关治疗用水》3）、透析液，细菌内毒素不大于0.5EU/mL，执行标准YY0598-2006《血液透析及相关治疗用浓缩物》；依据：《中国药典》为强制性标准。85.4.6病毒检测：HIV、HBV、HCV、TP检测全部合格---全部阴性：方法按检测试剂盒说明书进行。5.5分装输注（1）检测合格细胞分装在150-200ml的生理盐水中，则细胞总数为30-50×108(每瓶细胞加入庆大霉素4万U，20%白蛋白5ml，专用试剂20ml)2）输注前混匀，用输血器静脉滴注。程序和输血一样。速度60滴/分。（亦可视情而定），（3）输注每天或隔天一次，6次一疗程（细胞总数为200-300X108），每年2-3个疗程，亦可据具体情况而定，每疗程最好换个供者3）预防不良反应，输注前三天使用较好：①雷尼替丁0.15gbid,②苯海拉明1片qd,③消炎痛1片qd晚上服，④地塞米松5mg(1支)，输注前静脉推注。⑤非那根25mg输注前肌注，⑥亦可视情况灵活决定。5.6不良反应及处理措施，在没有采取预防措施的情况下：最常见的不良反应是寒战和发热。发生率5-10%左右。一般在输注结束前5-10分钟或结束后1-3小时内开始，个体差异，反应情况不一。第一种情况比较轻微，只有寒战，自觉有发冷感5-10分钟即自行消退，无不适。第二种情况是中等反应，先寒战，后发热，发热一般在38-39℃之间，可持续3-5小时，不用处理自行缓解。亦有在39-40℃,若持续不退，影响入眠，可用常规退烧针降温或地塞米松5mg(一支)静脉推注。第三种情况：又叫异体细胞反应，主要表现在治疗后1周皮肤包括面部皮肤骚痒、发红，有百针同刺的刺痛感，有牛皮癣样或硬皮样改变。三天后有皮肤“干裂”现象，一周后脱皮，脱皮后，皮肤变白，变细，无后遗症，有美容之效。此种现象发生极少，我们10多年来，仅见一例。有关专家认为这种反应重，说明异体细胞对肿瘤攻击效果更佳。为了安全起见,健康人免疫细胞治疗的患者最好住院治疗。6CIK细胞临床治疗方案和疗效评价6.1临床治疗方案6.1.1病例选择病例入选标准：①经病理证实、诊断明确的各种恶性肿瘤。②患者年龄、性别不限。③手术、放疗和化疗后病情稳定或有复发转移的患者。病例排除标准1）有严重过敏体质的病人。（2）严重心，肝，肾功能衰竭的病人。（3）临床医生认为不适应的病人。96.1.2治疗方案参照2021年2月国家药品监督管理局药品评审中心公布的《细胞治疗产品临床试验技术指导原则（试行）》中的“剂量探索和剂量递增”原则，每例患者至少二个疗程；每疗程输注6次，CIK细胞总数为150-300X108个。采用输血器静脉输注细胞，可考虑采用药物，如地塞米松5mg，于CIK输注前静推，预防不良反应，常规情况下可不用，有过敏史者，应提前预防。静脉输注：每次30-50×108细胞悬于150-200ml生理盐水中，每分钟60滴左右滴注。每天或隔天一次。6次一疗程：第一年以2-3个疗程，第二年半年重复一疗程，以后每年做一疗程，五年后视情况再定。肝动脉灌注：每周一次，每次10-20×108细胞悬于50-60ml生理盐水中，3次一疗程。不良反应及其处理本研究采用的健康人CIK细胞是异体免疫细胞，因专利技术处理，治疗相当安全。有部分病人（3-5%）在细胞回输后2-10小时内出现体温升高。中度发热（38.50C以下）一般2-6小时内可自行缓解。超过390C者可用药物或物理疗法对症处理。6.2临床疗效评价6.2.1一般临床症状治疗前后变化：包括：精神状况、睡眠情况、体重、食欲、痛疼等（详见观察表格）6.2.2实验室检查指标：癌标记物原发性肝癌治疗前后查AFP，CA19-9等非小细胞肺癌治疗前后查CEA和CA125等结直肠癌治疗前后查CEACA724等具体各种癌症病人治疗前后均查AFP、CEA、CA125、CEA。收集资料可综合分析不同癌标记物在不同肿瘤中的临床意义。患者自身外周血淋巴细胞亚群测定治疗前、后分别采取病人静脉全血1ml通过流式细胞仪（FCM）测定其细胞亚群、B淋巴细胞、NK细胞的绝对数量变化。（见附表）患者自身免疫能力（NK活性）测定治疗前、后分别采取病人外静脉血10ml，检测患者自身外周血免疫细胞对K562细胞的杀伤活性，即NK活性。临床影像学指标疗效评价标准参照1979年WHO确定的实体瘤疗效评价标准拟订：完全缓解(completeremission，CR)：所有病灶完全消失，至少维持4周；部分缓解(partianremiddion，PR)：双径可测病灶，各病灶最大径乘积之和缩小50％以上，至少维持4周；单径可测病灶，各病灶最大径之和减少50至少维持4周。无变化(nochange，NC)：双径可测病灶，各病灶最大垂径乘积之和缩小不足50％以上，或增大不超过25至少维持4周。进展(progressivedisease，PD)，一个或多个病灶增大超过25％。包括：CT、B超、PET等，同时参照【实体肿瘤应答评估方案】。完全缓解（CR）所有病变完全消失并维持4周以上部分缓解（PR）肿瘤最大横径与最大垂直径的乘积减少50%以上，并维持4周以上好转（MP）肿瘤病灶二径乘积缩小25%以上，但不足50%，无新病灶出现维持4周以上。稳定（SD）肿瘤病灶二径乘积缩小或增大均<25%，4周无新病灶出现。进展（PD）肿瘤病灶乘积增大25%以上，并有新病灶出现。有效率（%）=（CR+PR）例数/治疗总例数×100%存活时间病人的带瘤生存和无瘤生存时间应是疗效评估的重要指标。本研究拟采用1、2、3、5年生存时间作为CIK疗效评价标准。时间：从病人确诊之日计起，至去世之日止。治疗组：用CIK生物治疗二个疗程以上的病例。对照组：和临床应用单位同时期内，只用三大常规疗法，不用CIK生物治疗的同种病例相比较。7有关表格CIK细胞临床应用研究观察表一患者治疗前后一般状况姓名性别年龄诊断病区床位病历号症状体征治疗前治疗后结论备注精神状况睡眠情况体重食欲疼痛经治医生填表人年月日CIK细胞临床应用研究观察表二．实验室检查及免疫指标姓名性别年龄诊断病区床位病历号检测项目AFPCEACA125总T淋巴细胞Th淋巴细胞Ts淋巴细胞B淋巴细胞NK细胞经治医生填表人年月日CIK细胞的质量和安全检测结果1．台盼蓝染色计数活细胞，CIK细胞的活度是：%。2．MTT法检测细胞的活性，CIK细胞的活性是：%。3．检查产品细菌霉菌结果：第一次菌落第二次菌落。4．血球计数板计数细胞的数目，CIK细胞的总数是：()×108。制备者：检测者：生物治疗记录单（内部资料，妥善保管）编号姓名性别年龄诊断细胞类型第次脐血CIK健康CIK干细胞其它备注.备注：PBMCNK活性检测表姓名诊断性别年龄科室住院号科室备注一．制备效靶细胞时分()抽静脉血ml，时分得PBMC个（/ml）。取PBMCml（/ml）加稀释液ml，调浓度为/ml，共ml取K562ml（/ml）加稀释液ml，调浓度为/ml。共ml二．NK活性检测：1.实验分组（每组三个平行孔）实验组：效应细胞µl+靶细胞靶细胞组：靶细胞µl+1640液效细胞组：效细胞µl+1640液2.孵育月日时分(µl/孔（E：T=:)µl/孔µl/孔)放入37℃CO2培养箱。3.加MTT月日时分加MTT10µl/孔。4.酸性异丙醇月日时分加酸性异丙醇100µl/孔。5.MK3酶标仪（650nm）测OD值。三．结果：NK活性=靶细胞组OD值实验组OD值－效应细胞组OD值）靶细胞组OD值=检验者核对者年月日细胞质量检测登记表细胞类型：CIK+DC供者姓名：性别：年龄：资料编号：项目结果检验者核对者正常参考值细胞活度大于85%杀伤活性80%-88%流式检测CD3CD56大于20%HIVHBVHCV梅毒霉菌热源结论：备注：CIK：X108；DC：X107共ml.主任：年月日7.1生物治疗知情同意书（中，英文）生物治疗知情同意书患者姓名性别男女年龄岁诊断住院号病区床号联系电话主管医师姓名联系电话医生已向我们解释了生物治疗的有关事项。我们明白生物治疗是一种新的肿瘤治疗方法——通过调节自体的抗肿瘤免疫能力达到治疗肿瘤的目的。常规的三大疗法本人已接受过，目前这三大疗法对本人意义有限，采用肿瘤生物疗法是我们的自愿选择。医生告诉我们目前常用的细胞免疫治疗是采用外周血单个核细胞（主要是淋巴细胞）进行体外培养，制备成细胞量大，杀伤肿瘤活力强的抗肿瘤免疫细胞，再回输病人。医生还告诉我们，肿瘤生物治疗有包括但不限于如下的不良反应：单个核细胞是用单采机分离，需循环2000-3000ml外周血液，最终收集40-60ml单个核细胞。在采集过程中，被采者会有头晕、恶心、手足麻木和采后的一段时间（2-4h）疲劳乏力感觉，有些还会出现枸椽酸中毒，药物过敏，虚脱等症状。医生还告诉我们：采出的细胞在体外培养时，由于种种原因，如化疗后细胞数量较少，且活性差等，制备CIK细胞不能成功，失败可能性有5%左右。我们同意，如果本次不成功，可选择时机再采血补救。医生还告诉我们，CIK细胞回输时，会有一些副作用，如寒战、发热等（约有5%），温度一般不超过38.5℃,而且输液治疗后2-4h会自动缓解。有时还有一过性的疲劳，过度兴奋或全身不适等，我们可以理解和接受。医生还告诉我们，CIK细胞免疫治疗是一种较新的方法。临床有效率有50-80%。有些病人疗效特别好，甚至可以治愈肿瘤，有些病人可能没有任何疗效。我们完全可以理解和接受。本人知道参与这项治疗需支付以下费用：生物治疗的成本费，实验室检查费，护理费等。本人已经完全理解肿瘤生物治疗的上述情况，参与生物治疗是自愿的，可以选择不参加，也知道我可以自由地取消和在任何中止参与，中止参与不妨碍现在和将来的生物治疗。本人同意接受生物治疗，若违背了治疗要求，或由于管理方面的原因，或本人确实存在（发生）其它不适继续参与的事由，医生可无需考虑我的意见，随时中止本人的参与。患者或家属：经治医师：GUANGZHOUMADICALCOLLEGEAFFILIATEDTUMORHASPITALInformedConsentFormForBiotherapyPatientname:Sex：M/FAge:Diagnosis:No.hospitalized:medicalservice:BedNo.TEL:AttendingPhysician:TEL：Thedoctorhasexplainedtoustherelevantmattersaboutbiotherapy.Weunderstoodthatbiotherapyisanewtreatmentforcancer,whichcanbeachievedbyregulatingthecapacityofautologousanti-tumorimmunity.AtpresentIhavereceivedthreeroutinetreatments,buttheseareoflittlesignificancetome.Mychoiceofusingbiotherapyiscompletelyvoluntary.Thedoctorhasexplainedtousthefollowing：1.Thecellularimmunotherapyisthatusingmononuclearcells(mainlylymphocytes)fromperipheralbloodtocultureinvitro;beingmadeofanti-tumorimmunecells,whichhavealargeamountofpopulationandstrongactivitiestokilltumors;andthentransfusingthembacktothepatientsincommon.2.Mononuclearcellsareseparatedbysinglecollectionmachine,whichrequirescirculating2000-3000mlperipheralblood,andcollect40-60mlmononuclearcellsfinally.Inthecollectionprocess,thedonormayhavethesenseofdizziness,nausea,handsandfeetnumbnessandfatigue2-4hoursafterthecollection,sometimeswillappearintoxicationcitricacid,drugallergies,andanyothersymptoms.3.Thepossibilityoffailureisabout5%whenculturingcellsinvitro，bythereasonsofsmallamountofcellsafterchemotherapy,pooractivity,unsuccessfulwithCIKcellspreparationetc.Weagreewiththat,thistimeifnotsuccess,chooseanothertimeavailableanddrawbloodagaintomakeretrieval.4.TherewillbesomesideeffectswhentransfusingCIKcellstothepatients,suchaschills,fever,etc.(about5%).butgenerallythetemperaturedoesnotexceed38.5℃,andthesideeffectswillrelieveautomatically2-4hafterinfusion.Sometimestherewillappeartransientfatigue,excessiveexcitements,ormalaiseofwholebody,etc，wecanallunderstandandaccept.5.CIKcellsi