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文档简介
乔赛亚.赞内尔(JosiahZayner)——超级人类CRISPR技术所有的重组体都会转化成功吗?例如:在实际操作过程中,转化一微克pUC18共需2ml感受态细胞,大约含有2×1010个大肠杆菌细胞,也就是说,每200个细胞只有一个细胞能接纳pUC18 DNA 转化成功的重组体都会顺利表达吗?重组体的鉴定重组体的鉴定返回报告基因的检测法转基因生物的PCR鉴定目的基因分子杂交检测方法返回报告基因的筛选法定义:报告基因指一类在细胞、组织/器官或个体处于特定情况下会表达并使得他们产生易于检测、且实验材料原本不会产生的性状的基因。条件:①报告基因和目的基因一起被转入受体细胞;②表达产物在受体细胞中本不存在,即无背景,在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物;③具有易于检验的表型,其表达产物能进行定量测定。返回植物基因工程中常用报告基因GUS基因NPTⅡ基因CAT基因NOS基因和OCS基因LUC基因和GFP基因NOS基因和OCS基因
①报告基因和目的基因一起被转入受体细胞;②表达产物在受体细胞中本不存在,即无背景,在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物;
③具有易于检验的表型,其表达产物能进行定量测定。GUS基因属水解酶类,相当稳定而不易降解。GUS基因是植物基因工程中使用最多的报告基因。NPTⅡ基因(失活)CAT基因氯霉素的结构式2,2-二氯-N-(1R,2R)-1,3二羟基-1-(4硝基苯基)丙-2-基乙酰胺氯霉素催化的反应及检测方法CATCATLUC基因和GFP基因LUC基因:荧光素酶基因LUC基因发光目的基因+GFP基因GFP基因:绿色荧光蛋白基因GFP绿色荧光紫外光照钱永健关于报告基因,以下分析不合理的是()D.使用NOS基因核酸检测试剂盒检测植物样品,经过纸层析,紫外线下发现未见荧光,因此该样品为非转基因植物。A.由于GUS基因的反应灵敏度高,易于检测,是目前植物基因工程中使用最多的报告基因;B.NPTⅡ基因既可以使新霉素失活,也可使宿主具有卡那霉素抗性;C.检测氯霉素乙酰化,并放射自显影,可以知道CAT基因是否表达,甚至可以粗略估计CAT基因表达程度;重组体的筛选与外源基因的鉴定返回基于核酸分子杂交筛选碱性磷酸酶显示系统辣根过氧化物酶显示系统ABC显示系统非放射
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