大肠癌中gs-pi、opo和pgp耐药基因的表达及生物学意义

大肠癌中gs-pi、opo和pgp耐药基因的表达及生物学意义

癌症的发病率是肿瘤的第三种，其次是癌症和胃癌。在全世界范围内，超过500万人患有肺癌和癌。我国大肠癌发病率占恶性肿瘤的第4位或第5位。近年来,上海地区大肠癌的发病率呈上升趋势。目前,大肠癌的治疗主要是手术切除及化疗,临床对大肠癌多采用联合方案或凭临床医师的主观判断进行用药。近年研究发现,某些癌耐药蛋白往往是导致临床化疗失败的主要原因之一。本文通过检测大肠癌化疗前肿瘤细胞的耐药性,旨在为防止多种耐药性的诱导方面提供一定的临床病理依据。材料和方法一、一般临床数据收集2000年5月～2002年6月我院外科手术切除的大肠癌标本98例。患者的年龄为39～89岁,平均66.7岁。二、免疫组织化学染色(一)多药耐药分析胎盘型谷胱甘肽-S-转移酶(GST-Pi),为单克隆抗体,克隆号353-10,标记阳性者提示肿瘤细胞对GST-Pi所介导的抗癌药物顺铂有耐药倾向;多药耐药(MDR)基因产物P-糖蛋白(PgP),为单克隆抗体,克隆号JSBI,标记阳性者提示肿瘤细胞对长春新硷类和阿霉素有耐药倾向;拓朴异构酶-Ⅱ(TOPO-Ⅱ),为单克隆抗体,克隆号JH2.7,标记阳性者提示肿瘤细胞对拓朴异构酶抑制剂有耐药倾向。抗体稀释度:GST-Pi为1∶50,PgP和TOPO-Ⅱ均为1∶25。试剂均为DAKO公司产品(上海中达医学应用研究所提供)。(二)方法采用免疫组织化学二步法进行染色,四盐酸二氨基联苯胺(DAB)显色。(三)肿瘤细胞阳性细胞表达的检测阳性细胞呈棕褐色细颗粒状,GST-Pi定位于细胞核或细胞质内,TOPO-Ⅱ定位于细胞核内,PgP定位于细胞质和细胞膜上。根据肿瘤细胞的阳性数及其染色反应的深浅进行判定,采用高倍视野随机计数500个肿瘤细胞中的阳性细胞所占的比例,定为3级,未见阳性表达或阳性细胞数<5%为阴性(-),阳性细胞数≥5%至<30%为弱阳性(+),≥30%至<60%为中度阳性(++),≥60%为强阳性(+++)。以GST-Pi、TOPO-Ⅱ和PgP阳性表达胃癌标本为阳性对照组。三、统计处理采用相关分析。结果一、脱硫废水发病年龄本组中80～89岁10例(10.20%);以70～79岁病例数最多,为33例(33.67%);60～69岁26例(26.53%);50～59岁17例(17.35%);40～49岁11例(11.22%);30～39岁1例(1.02%)。文献示大肠癌的发病年龄高峰在我国为30～50岁,国外为50～60岁。本组60～79岁的病例占60.20%。二、病例责任分类本组98例大肠癌标本中,92例为单个癌灶,5例为2个癌灶,1例为3个癌灶。对多个癌灶者仅对其中1个癌灶进行病理分类、免疫组织化学标记及分析。参照参考文献进行病理和组织学分类。病理学分类:早期大肠癌5例(5.10%),其中3例为息肉隆起型,2例为扁平隆起型;进展期大肠癌93例(94.90%),其中14例为隆起型(14.29%),13例为局限溃疡型(13.27%),56例为浸润溃疡型(57.14%),2例为浸润型(2.04%),8例为胶样型(8.16%)。组织学分类:高分化管状腺癌63例(64.29%),中分化管状腺癌14例(14.29%),低分化管状腺癌6例(6.12%),黏液腺癌14例(14.29%),印戒细胞癌1例(1.02%)。Dukes分期:A期15例,B期33例,C期47例,D期3例。三、阳性表达率本组大肠癌标本中,GST-Pi阳性表达率为45.92%,以强阳性表达居多;TOPO-Ⅱ阳性表达率为26.53%,以弱阳性表达居多;PgP阳性表达率为11.22%,也以弱阳性表达居多。见表1。四、耐药基因表达本组大肠癌标本中以高分化管状腺癌多见。大肠癌对GST-Pi、TOPO-Ⅱ和PgP3种耐药基因均有不同程度的阳性表达。不同组织学类型大肠癌与GST-Pi、TOPO-Ⅱ和PgP的阳性表达相关(r值分别为0.993、0.998和0.966,P均<0.001)。见表2。五、耐药基因表达本组大肠癌患者各年龄段对GST-Pi、TOPO-Ⅱ和Pgp3种耐药基因均有不同程度的阳性表达。年龄与GST-Pi的阳性表达呈正相关(r=0.92,P<0.005),而与TOPO-Ⅱ和Pgp的阳性表达不相关(r值分别为0.40和0.17,P>0.05)。见表3。六、pgp和-的表达差异大肠癌的Dukes分期与GST-Pi和TOPO-Ⅱ的阳性表达呈正相关(r值分别为0.995和0.984,P<0.01),但与PgP的阳性表达不相关(r=0.775,P>0.05)。见表4。七、gst-pi阳性检测对98例大肠癌标本中的33例进行LRP(广谱耐药基因检测项目,阳性表明肿瘤对多种化疗药物均不敏感)检测,阳性26例,阴性7例,其中GST-Pi阳性13例,GST-Pi阴性20例,从理论上讲,这20例对顺铂无耐药倾向。此外,有11例LRP阳性者的GST-Pi、TOPO-Ⅱ和PgP均为阴性,提示这些患者用顺铂、长春新碱类、阿霉素和拓扑异构酶抑制剂治疗可能仍有效。因此,LRP的作用还有待于进一步探讨。gst-pi和pgp表达情况自1946年Gillman和Phillip报道氮芥类药物治疗造血系统肿瘤以来,化学治疗已取得很大的进步,已使绒毛膜细胞癌、恶性淋巴瘤、睾丸精原细胞瘤、小细胞肺癌等多种恶性肿瘤获得治愈的机会,大多数恶性肿瘤得到缓解,所以化疗仍是目前临床治疗恶性肿瘤的一种有效的辅助治疗手段。但许多肿瘤在化疗前即有耐药基因MDR1mRNA水平的增高,在治疗后更高。因此,在用药前筛选出肿瘤细胞无明显耐药性的抗癌药物进行化疗,可进一步提高疗效,延长患者的生存期。本组大肠癌标本GST-Pi阳性表达率为45.92%,强阳性高达44.44%,表明近一半大肠癌对GST-Pi所介导的主要抗癌药物顺铂产生耐药倾向,并且大多有强耐药性,提示大肠癌组合用药化疗时,对顺铂的选择应慎重考虑。同时本组资料还显示,TOPO-Ⅱ和PgP阳性表达率分别为26.53%和11.22%,表明部分大肠癌对TOPO-Ⅱ和PgP所介导的主要抗癌药拓扑异构酶抑制剂和长春新碱、阿霉素等有耐药倾向。也表明部分大肠癌在抗癌药物治疗前癌细胞内可原发地存在对上述抗癌药物的耐药倾向,或部分大肠癌患者体内存在多向耐药基因,这可能是化疗有时难以达到预期效果的重要因素之一。因此,测定GST-Pi、TOPO-Ⅱ和PgP对指导制定化疗方案有重要临床价值。根据对抗肿瘤药物的研究表明,不同组织学类型的肿瘤采用相同的用药方案,效果不尽相同。本组资料显示,大肠癌