微核预习报告

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利用花露水对蚕豆(Viciafaba)根尖细胞微核的诱导和观测

（焦锦花1020232128生物技术1011班）

组员名单：葛笑、孙晓玮、周晓杰、徐中洋、李亚峰、程石、蒋沈琳、焦锦花一、试验目的

1、了解微核测试的原理和毒理遗传学在实际生活中的应用范围及意义2、学习蚕豆根尖的微核测试技术并把握其操作方法3、探究花露水对微核的诱导作用

4、进行小组合作，把握设计试验基本能力二、试验原理

微核简称MCN，是真核生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生。在细胞间期微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外、大小应在主核1／3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的断片产生的，但有些试验也证明整条的染色体或多条染色体也能形成微核。这些断片或染色体在细胞分裂末期被两个子细胞核所排斥便形成了第三个核块。已经证明微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈正相关。

利用蚕豆根尖作为试验材料进行微核测试，可确凿的显示各种处理诱发畸变的效果，并可用于污染程度的监测

花露水包含少量劣质香精和75%左右的酒精，还有一种叫“伊默宁〞的成分，而花露水馥郁剂成分部分有毒。

本试验即运用蚕豆根尖微核试验检测，研究花露水对蚕豆根尖微核诱导的作用，进而为花露水对人体以及环境的影响提供一定的理论参考。三、试验材料

蚕豆种子、花露水：用蒸馏水配制成25％、50％、75％梯度的溶液及原液、卡诺固定液（无水酒精：醋酸=3：1）、改良石炭酸品红、重铬酸钾溶液四、试验步骤

1．浸种催芽将试验用蚕豆种子按需要量放入盛有蒸馏水的烧杯中，在25℃下浸泡24小时。种子吸胀后，放入培养皿中，用棉花保持湿度，在25℃温箱中催芽三天。（具体的按蚕豆发芽状况确定实际天数）

预习报告

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2．花露水处理每一处理选取3粒初生根良好、根长较一致的种子。将蚕豆根置于不同浓度（25％、50％、75％溶液及原液）的花露水培养6小时，其次组分别用自来水（或蒸馏水）以及重铬酸钾溶液处理作对照。

3．根尖细胞恢复培养处理后的根尖用蒸馏水浸洗三次，每次2～3分钟。洗净后置入培养皿，25℃下恢复培养24小时。

4．根尖细胞固定剪取0．5～lcm长根尖，蒸馏水清洗后，放人卡诺固定液中固定8h

5．制片（解离、染色、压片）用蒸馏水浸洗固定好的幼根两至三次，每次3分钟，吸去蒸馏水，参与1mol/L盐酸将幼根浸没，于60℃水浴解离10分钟，使幼根软化。然后吸去盐酸，用蒸馏水浸没清洗幼根三次，每次1～2分钟。在凹面玻片内滴加改良石炭酸品红染液，染色10分钟，制片前取出置载玻片上，截下1～2mm左右长的根尖，滴改良石炭酸品红染液，加上盖玻片，覆一层吸水纸，用解剖针或镊子垂直敲打，然后以拇指垂直紧压盖片（注意勿使盖片搓动），使材料分散压平，便于观测。

6.镜检及微核识别标准常规制片后，将玻片标本放在显微镜的低倍镜下观测，找到分生组织区细胞分散良好、核膨大、分裂相多的部分转到高倍镜下进行观测。

五、微核识别标准

（1）在主核大小的1/3以下，并与主核分开的小核。（2）小核着色与主核相当或稍浅。（3）小核形态为圆形、椭圆形或不规则型。

每一组处理观测3个根尖，每个根尖计数333个细胞中的微核数并进行记录，并且计算出各个组处理的蚕豆根尖微核千分率（MCN‰）并与蒸馏水及重铬酸钾对照组相对比。六、本卷须知和存在疑问

1、为什么选用蚕豆根尖作为试验材料？

2、在蚕豆根尖细胞的微核