蓝莓种苗组织培养技术规程（征求意见稿）

1T/GDSMMXXXX—2023蓝莓种苗组织培养技术规程本文件规定了蓝莓组织培养快速繁殖过程中的术语和定义、培养基制备、组培室消毒灭菌、组培苗生产等方面的技术。本文件适用于蓝莓组织培养繁殖苗木。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。DB15/T1939—2020文冠果组织培养育苗技术规程NY/T391绿色食品产地环境质量3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1外植体explant植物组织培养中作为离体培养材料的器官或组织的片段。外植体通常选择生长健壮的无病虫的植株上的正常器官或组织。3.2接种inoculation在无菌条件下将表面灭菌后的外植体或继代、生根组培材料接入培养基的过程。4培养基配制4.1培养基配方4.1.1基础培养基选择WPAP培养基作为蓝莓组织培养的基础培养基，具体成分见附录A中的表A.1。4.1.2不定芽诱导培养基制备用于不定芽诱导的培养基，配方为：在所述WPA培养基上添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）和萘乙酸（NAA）；在不定芽诱导培养基中6-苄氨基嘌呤（6-BA）的浓度为1.0mg/L，萘乙酸（NAA）的浓度2T/GDSMMXXXX—2023为0.2mg/L。4.1.3继代增殖培养基制备用于继代增殖的培养基，配方为：在所述WPA培养基的基础上添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）和萘乙酸（NAA在继代增殖培养基中6-苄氨基嘌呤（6-BA）的浓度为1.0mg/L～3.0mg/L，萘乙酸（NAA）的浓度为0.2mg/L。4.1.4无菌生根培养基制备用于无菌生根的培养基，配方为：在所述WPA培养基的基础上添加吲哚丁酸（IBA）4.2培养基母液及培养基配制按照DB15/T1939—2020执行。4.3环境与器具消毒灭菌按照DB15/T1939—2020执行。5组织培养5.1外植体及其消毒5.1.1选取生长健康的蓝莓幼嫩的球茎作为外植体，用中性洗涤剂洗涤球茎，以去除表面的污垢。5.1.2去除多余的叶片，干净纸巾吸干表面水分，在超净工作台上，先用70%酒精浸泡30s，再用无菌水冲洗3次，每次3min。5.1.3转入0.1%的升汞溶液中消毒8min～12min，最后用无菌水洗涤3次～5次，每次5min，得到消毒外植体。5.2不定芽诱导5.2.1在超净工作台内，将消毒外植体切割成0.4cm×0.5cm的单芽。5.2.2将茎段接种于用于不定芽诱导的培养基；每瓶接1个外植体，分布均匀，封好瓶口后，注明品种代号、接种人员及日期等，放至培养室培养，诱导培养18d～22d，得到蓝莓不定芽。5.2.3诱导培养条件如下：温度为26℃±3℃,湿度为80%～90%，光照时间为14h/d，光照强度为8001ux～12001ux。5.3继代增殖5.3.1将不定芽诱切除叶片和顶芽，接入继代培养基，置于培养室培养，继代培养20d～25d，得到蓝莓丛芽。5.3.2接种数量根据培养容器的大小决定，要求材料摆布均匀，间距1.0cm～2.0cm。5.3.3继代增殖培养条件如下：温度为26℃±3℃,湿度为50%～65%，光照时间为14h/d，光照强度为8001ux～12001ux。5.4无菌生根3T/GDSMMXXXX—20235.4.1当继代增殖培养的蓝莓无菌苗生长到3.0cm～5.0cm时，进行切繁，并保持每株均有一个不定芽，接入用于无菌生根的培养基中进行生根培养15d～20d，得到蓝莓幼苗。5.4.2接种数量根据培养容器的大小决定，要求材料摆布均匀，间距1.0cm～2.0cm。无菌苗在培养基中的插入深度为5mm～8mm，保持壮苗直立。5.4.3生根培养条件如下：温度为28℃±3℃,湿度为70%～85%，光照时间为14h/d，光照强度为8001ux～12001ux。5.5炼苗蓝莓幼苗生长至根长0.3cm、苗高5cm后，将培养瓶瓶盖打开，室内炼苗培养5d～7d。4T/GDSMMXXXX—2023（资料性附录）WPA培养基给出WPA培养基的成分和配制方法。表A.1MS培养基混合母液配制表母液名称编号化试名称mg/L扩大倍数扩大后称mg母液定容体积mL配置培养基吸取量mL/L大量元素ANH4NO34066000KNO340760003704014800BCaCl22O44044000CKH2PO417000铁盐DFeSO42O27.82780Na2EDTA·2H2O37.23720微量元素E22.32230ZnSO42O8.6860H