组织学与胚胎学HistologyandEmbryology课件

组织学与胚胎学

HistologyandEmbryology组织学与胚胎学

HistologyandEmbry

第一章组织学绪论

一、组织学的定义及其研究内容

1、组织学（Histology）的定义研究正常机体的微细结构及其相关功能的学科第一章组织学绪论细胞（cell）组织（tissue）器官（organ）系统（system）2、组织学研究内容细胞（cell）组织（tissue）器官（organ）系统（（1）系统system:

若干功能相关的器官构成，并能完成某一连续生理功能。（2）器官organ:

不同的组织按一定的比例、数量及方式组合成，具有一定的形态结构和特定生理功能。（1）系统system:若干功能相关的器官构成，并能完成

基本组织Primarytissue

结缔组织connectivetissue上皮组织epithelialtissue

肌组织muscletissue神经组织nervoustissue（3）组织Tissue:细胞，细胞外基质基本组织结缔组织connectivetissue上皮组织

（4）细胞cell：是组成人体的结构和功能的基本单位。细胞膜、质、核

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个、200余种细胞外基质：由细胞产生（4）细胞cell：组织学与胚胎学HistologyandEmbryology课件图心脏上:肌丝结构电镜图下:肌丝蛋白质构成模式图肌动蛋白原肌球蛋白肌钙蛋白细肌丝粗肌丝肌球蛋白杆肌球蛋白头图心脏肌动蛋白原肌球蛋白肌钙二、组织学发展简史（一）光学显微镜的问世、细胞水平的研究（二）电子显微镜问世、亚细胞水平研究（三）现代组织学的发展二、组织学发展简史三、组织学学习方法1、形态与功能：组织→细胞→亚细胞→分子→功能2、动态与静态：3、平面与立体：4、理论与实践：三、组织学学习方法四、组织学技术简介（一）光镜技术（lightmicroscope,LM）

1000-1500倍，0.2µm

光镜结构四、组织学技术简介1、石蜡切片术（paraffinsectioning）：取材固定（甲醛、乙醇、丙酮等）脱水（不同浓度乙醇梯度脱水）透明（二甲苯，置换出酒精）1、石蜡切片术（paraffinsectioning）：1、石蜡切片术（paraffinsectioning）：取材固定（甲醛、乙醇、丙酮等）脱水（乙醇梯度脱水）透明（二甲苯，置换出酒精）包埋（石蜡）切片（4～10µm厚）染色封片1、石蜡切片术（paraffinsectioning）：*HE染色法（苏木精-伊红染色法，hematoxylin-eosinstaining）：苏木精为碱性染料，使核内染色质和胞质中核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，使胞质和细胞外基质着红色。**嗜碱性（basophilia)；嗜酸性（acidophilia);

中性（neutrophilia)

染色法（HE）*HE染色法（苏木精-伊红染色法，hematoxylin特殊染色：银染：硝酸银→亲银性（argenttaffin）;

嗜银性（argyrophilia）：+还原剂

其他染色：醛复红→肥大细胞、弹性纤维→紫色甲苯胺蓝→肥大细胞→紫红色→异染性（metachromasia）活体染色（vitalstaining)：台盼蓝特殊染色：镀银染色特殊染色镀银染色特殊染色

火棉胶包埋、树脂包埋

冰冻切片2、其它物质包埋和切片技术火棉胶包埋、树脂包埋2、其它物质包埋和切片技术3、非切片法涂片、铺片、磨片3、非切片法（二）特殊光学显微镜技术1、荧光显微镜技术2、倒置显微镜技术3、相差显微镜技术4、激光共聚焦显微镜技术（二）特殊光学显微镜技术组织学与胚胎学HistologyandEmbryology课件组织学与胚胎学HistologyandEmbryology课件组织学与胚胎学HistologyandEmbryology课件（三）电镜技术（electronmicroscope,EM)0.2nm，近百万倍，超微结构

（三）电镜技术（electronmicroscope,E1、透射电镜术（transmissionelectronmicroscope,TEM）

取材迅速：数分钟内固定：戊二醛，锇酸包埋：环氧树脂切片：超薄切片机，50-80nm

染色：醋酸铀，柠檬酸铅观察：被染成黑色的（深色）称电子密度高electron-dense,

染色浅的叫电子密度低electron-lucent。目的：观察组织和细胞内部的超微结构（亚细胞结构）1、透射电镜术（transmissionelectron

（1）这种技术不用超薄切片，（2）在标本表面喷镀一层碳膜或合金膜（3）对标本进行逐点扫描，显示的是被观察标本的表面结构，具有很强的立体感。观察各种结构表面的立体构象2、扫描电镜术（scanningelectronmicroscope,SEM）（1）这种技术不用超薄切片，2、扫描电镜术（scannin组织学与胚胎学HistologyandEmbryology课件（四）组织化学术组织化学术（histochemistry）和细胞化学术（cytochemistry)是应用化学、物理原理和技术，与组织学技术结合而产生，使组织细胞内某化学成分形成有色沉淀，在组织切片显示某种物质的存在和分布状态。（四）组织化学术

（1）糖类：

PAS（PeriodicaciSchiffreaction,过碘酸希夫）反应，显示多糖和糖蛋白，呈紫红色。过碘酸紫红色反应产物糖多醛品红硫酸复合物（希夫试剂，无色）1、一般组织化学术（1）糖类：PAS（PeriodicaciSchifPAS染色PAS染色（2）脂类：锇酸固定染色，呈黑色；油红O呈红色（3）核酸：福尔根反应显示DNA，甲基绿－派若宁反应同时显示DNA与RNA

（4）酶类：酶与特异性底物的反应产物、再与捕捉剂反应，形成有色的沉淀物（2）脂类：锇酸固定染色，呈黑色；油红O呈红色油红O染色油红O染色2、免疫组织化学术（immunohistochemistry，IHC）

根据抗原、抗体特异性结合原理，检测组织切片中的肽和蛋白质。用标记的抗体与组织中的抗原结合，标记物可于显微镜下观察。标记物有荧光素（荧光显微镜观察）、辣根过氧化物酶（光镜或电镜观察）、胶体金（多用于电镜观察）Ag+AbAg-Ab**2、免疫组织化学术（immunohistochemistry免疫组织化学原理模式图

抗原抗体荧光素辣根过氧化物酶胶体金免疫组织化学原理模式图抗原抗组织学与胚胎学HistologyandEmbryology课件大鼠肝脏，免疫组织化学法大鼠肝脏，免疫组织化学法3、原位杂交术（insituhybridization，ISH）即核酸分子杂交组织化学术，检测基因（DNA片段）的有无、基因的表达活性（mRNA）原理：用带标记物的已知碱基顺序的核酸探针与细胞内待测核酸按碱基配对原则进行特异性原位结合（杂交），并通过对标记物的显示而获知待测核酸的有无及相对量。3、原位杂交术（insituhybridization，原位杂交脐静脉内皮细胞呈心房钠尿肽阳性原位杂交脐静脉内皮细胞呈心房钠尿肽阳性

（五）图像分析术（imageanalysis）又称形态计量术（morphometry）：应用数学和统计学原理对组织切片提供的平面图像进行分析，从而获得立体的组织细胞内有形成分的数量、体积、表面积等参数，从量的角度显示结构与功能的关系。体视学（stereology）：根据连续的组织切片应用计算机进行三维重建，以获得微细结构的立体模型。（五）图像分析术（imageanalysis）（六）细胞培养术（cellculture）把从机体取得的细胞在体外模拟体内的条件下进行培养；培养组织块或器官则称组织培养术或器官培养术。用于研究细胞、组织的代谢、增殖、分化、形态和功能变化，各种理化因子对活细胞的影响。培养条件：营养、生长因子、pH值、渗透压、O2和CO2浓度、温度，控制污染。（六）细胞培养术（cellculture）组织工程（tissueengineering）用细胞培养术在体外模拟构建机体组织或器官的技术。正在构建的有皮肤、软骨、骨、肌腱、骨骼肌、血管、角膜等；其中以组织工程皮肤较为成功，已成为商品用于治疗烧伤、皮肤静脉性溃疡等疾病。研究包括四个方面：①种子细胞，即增殖旺