微生物限度检查微生物总数检查

微生物总数检验提要一、试验前准备二、操作过程三、成果判断四、有关要求1.取样

一、试验前准备取样量检验量3-5倍的检验量10g或10ml或100cm2；2个以上独立包装2.无菌室的清洁与消毒

消毒剂：0.2%苯扎溴铵、75%乙醇等消毒流程：自上而下、先里后外；开启紫外灯与空气过滤装置30分钟以上3.试验物品的准备

（1）设备（2）器材（3）培养基（4）稀释液微生物总数检验采用的措施：涉及微生物计数法，涉及平皿法、薄膜过滤法和最可能数法，操作过程涉及：●计数培养基合用性检验●计数措施合用性试验●供试品的检验二、操作过程1.计数培养基合用性检验金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉菌胰酪大豆胨琼脂培养基胰酪大豆胨液体培养基30-35℃18-24h沙氏葡萄糖琼脂培养基沙氏葡萄糖液体培养基20-25℃2-3d沙氏葡萄糖琼脂培养基马铃薯葡萄糖琼脂培养基20-25℃5-7d新鲜培养物胰酪大豆胨琼脂培养基胰酪大豆胨液体培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基沙氏葡萄糖液体培养基分别接种上述不不小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的菌液至胰酪大豆胨液体培养基管和无菌平皿中，平皿中立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，混匀，凝固，置30～35℃培养不超出3天，每株试验菌平行制备2管或2个平皿；分别接种不不小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉注入无菌平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基，分别置30～35℃与20～25℃培养不超出5天，每株试验菌、每种培养基均平行制备2个平皿。同步，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。

被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5～2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。2.计数措施合用性试验检验目的：确认所采用措施适合产品微生物计数（产品的抑菌性）●合用范围：新产品或生产工艺变更的旧产品●检验措施：微生物回收试验法●检验操作涉及：供试液的制备、阳性对照菌液制备、回收试验。3.供试品检验（1）平皿法平皿法涉及倾注法和涂布法。除另有要求外，取要求量供试品，按措施合用性试验确认的措施进行供试液制备和菌数测定，每稀释级每种培养基至少制备2个平板。培养和计数：除另有要求外，胰酪大豆胨琼脂培养基平板在30～35℃培养箱中培养3～5天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在20～25℃培养箱中培养5～7天，观察菌落生长情况，点计平板上生长的全部菌落数，计数并报告。菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。若同稀释级两个平板的菌落数平均值不不不小于15，则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。菌数报告规则：需氧菌总数测定宜选用平均菌落数不不小于300cfu的稀释级、霉菌和酵母菌总数测定宜选用平均菌落数不不小于100cfu的稀释级，作为菌数报告的根据。取最髙的平均菌落数，计算lg、lml或10cm2供试品中所含的微生物数，取4位有效数字报告。如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数不不小于1时，以＜1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。（2）薄膜过滤法除另有要求外，按计数措施合用性试验确认的措施进行供试液制备。取相当于lg、lml或10cm2供试品的供试液，若供试品所含的菌数较多时，可取合适稀释级的供试液，照措施合用性试验确认的措施加至适量稀释液中，立即过滤，冲洗，冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基上培养。培养和计数：培养条件和计数措施同平皿法，每张滤膜上的菌落数应不超出100cfu。

菌数报告规则：以相当于lg、lml或10cm2供试品的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以＜1报告菌数（每张滤膜过滤lg、lml或10cm2供试品），或＜1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。（3）MPN法取要求量供试品，按措施合用性试验确认的措施进行供试液制备和供试品接种，全部试验管在30～35℃培养3～5天，假如需要确认是否有微生物生长，按措施合用性试验确认的措施进行。统计每一稀释级微生物生长的管数，从“微生物最可能数检索表”查每1g或每1ml供试品中需氧菌总数的最可能数。三、成果判断各品种项下要求的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数原则的解释如下：101cfu：可接受的最大菌数为20；102cfu：可接受的最大菌数为200；103cfu：可接受的最大菌数为2023，依此类推。若供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的检査成果均符合该品种项下的要求，判供试品符合要求；若其中任何一项不符合该品种项下的要求，判供试品不符合要求。四、有关要求1．药物在检验前，应置阴凉干燥处保存，不得开启原包装，预防微生物污染，影响检验成果。2．供试品检验全过程必须符合无菌技术要求，使用灭菌用具时，不能接触可能污染