猫血压法多组分生化药降压物质检查时值分析

猫血压法多组分生化药降压物质检查时值分析

多组生物化学是指从人体和动物组织或体液中提取的药物，或由发酵而来的非单一成分引起的药物。近年来,由于对药品安全性的逐渐重视,生化药注射剂不良反应的报道逐渐增加,其中报道较多而且反应严重的过敏反应,在部分生化药注射剂目前执行的质量标准中却未规定与此相关的降压物质检查项。为此,本文采用猫血压法考察了脑苷肌肽注射液、曲克芦丁脑蛋白水解物注射液、脾多肽注射液等几种多组分生化药降压物质项,为其注射剂质量标准提高提供了科学依据。1材料表面1.1动物猫,2.0~4.0kg,雌者无孕(北京市兴旺动物养殖场)。1.2药代动力学用量脑苷肌肽注射液(2个药厂13批样品,见表1,人用剂量为0.33mL·kg-1);曲克芦丁脑蛋白水解物注射液(1个药厂6批样品,见表2,人用剂量为0.17mL·kg-1);脾多肽注射液(1个药厂8批样品,见表4,人用剂量为0.17mL·kg-1);鹿瓜多肽注射液(规格:2mL∶4mg,批号:050718、070328、050309,E厂家,人用剂量为0.2mL·kg-1);注射用鹿瓜多肽(规格:4mg·支-1,批号:20060915,F厂家,人用剂量为0.4mg·kg-1);骨瓜提取物注射液(共2个药厂6批样品,见表6,人用剂量为0.33mL·kg-1)。供试药物以生理盐水稀释成不同浓度的供试品溶液。1.3对照品和试剂MPA2000多道生物信号分析系统(上海奥尔科特生物科技有限公司);磷酸组胺对照品(中国药品生物制品检定所,批号:150510-200412);戊巴比妥钠(国药集团化学试剂有限公司,批号:WS20051129);肝素钠(规格:160U·mg-1,北京欣经科生物技术有限公司分装,批号:H040730)。2方法和结果2.1保温手术台上把气管关关用4%戊巴比妥钠(40~50mg·kg-1)ip麻醉猫后,固定于保温手术台上,分离气管及颈动脉、股静脉,在一侧颈动脉插入另端连接至多道生物信号分析系统的动脉插管,管内充满肝素钠生理盐水,以记录血压;在一侧股静脉内插入静脉插管,供给药用。待血压稳定后即可进行敏感度测定。2.2重复给药次数自股静脉依次注入组胺对照品稀释液,剂量按动物体重每kg0.05、0.1、0.15μg,重复给药2次。如0.1μg剂量所致的血压下降值均不小于20mmHg,同时相应各剂量所致反应的平均值有差别,可认为该动物的灵敏度符合规定。2.3血压下降值测定取灵敏度符合规定的实验用猫,分别依次组织胺标准溶液(ds)→供试品溶液(dT)→供试品溶液(dT)→组织胺标准溶液(ds)从股静脉注入相应浓度的供试品溶液或组织胺标准溶液(0.1μg·kg-1),记录血压下降值。供试品溶液(dT)与组织胺标准溶液(ds)的注入体积应相等。2.4按相同方法添加不同剂量时的反应以第一与第三、第二与第四剂量所致的反应分别比较,如dT所致的反应值均不大于ds所致的反应值的一半,即认为供试品降压物质检查符合规定;否则按上述次序继续注射一组4个剂量,并按相同方法分别比较2组内各对ds、dT剂量所致反应值;如dT所致的反应值均不大于ds所致的反应值,仍认为供试品的降压物质检查符合规定;如dT所致的反应值均大于ds所致的反应值,即认为供试品的降压物质检查不符合规定;否则,应另取动物复试。如复试的结果仍有dT所致的反应值大于ds所致的反应值,即认为供试品的降压物质检查不符合规定。2.5降压物质含量测定本法系通过静脉注射限值剂量的供试品,观察对麻醉猫血压下降的程度,以判定供试品中所含降压物质的量是否符合规定。一般可以按临床单次静脉注射公斤体重剂量的1/5~5倍作为降压物质检查剂量限值。若静脉注射原液1.0mL·kg-1剂量未见降压反应,该剂量可作为限值。2.5.1静脉原液用量选择A-6(批号:20060805)和B-13(批号:20060402)2批脑苷肌肽注射液样品,根据临床用量,从1.0mL·kg-1开始进行预试验。静脉注射本品原液0.4~1.0mL·kg-1时,猫血压有所下降但反应值均小于对照品组织胺(0.1μg·kg-1)所致的反应值一半,表明本品未见降压反应。因此,将本品的降压物质的限值确定为静脉注射原液1.0mL·kg-1。按照确定的限值,依法进行了脑苷肌肽注射液2厂家13批次样品的验证实验,结果见表1。2.5.2静脉原液用量根据临床用量,对曲克芦丁脑蛋白水解注射液C-6(批号:20060601)从1.0mL·kg-1开始进行预试验。静脉注射本品原液0.4~1.0mL·kg-1时,猫血压有所下降但反应值均小于对照品组织胺(0.1μg·kg-1)所致的反应值一半,表明本品未见降压反应。因此,将本品的降压物质的限值确定为静脉注射原液1.0mL·kg-1。按照确定的限值,依法进行了曲克芦丁脑蛋白水解物注射液1厂家6批次样品的验证实验,结果见表2。2.5.3降压物质的限值的确定根据临床用量,我们对D-8(批号:20060503)从1.0mL·kg-1开始进行预试验,预试验结果见表3。预试验结果表明本品有降压作用,静脉注射本品1∶5稀释液0.2mL·kg-1~原液1.0mL·kg-1时,样品的血压下降值超过对照品组织胺(0.1μg·kg-1)所致的反应值;当静脉注射本品1∶20稀释液0.2mL·kg-1时猫血压下降反应值小于对照品组织胺(0.1μg·kg-1)所致的反应值一半。因此,将本品的降压物质的限值确定为静脉注射本品1∶20稀释液0.2mL·kg-1。按照确定的限值,依法进行了脾多肽注射液1厂家8批次样品的验证实验,结果见表4。2.5.4产品的质量关以临床用药剂量0.4mg·kg-1作为本品降压物质检查剂量限值,依法进行了鹿瓜多肽注射液1厂家3批次样品和注射用鹿瓜多肽1厂家1批次样品的验证实验,结果见表5。2.5.5骨瓜提取物注射液2厂家3批样品的验证实验以临床用药剂量0.33mL·kg-1作为本品降压物质检查剂量限值,依法进行了骨瓜提取物注射液2厂家3批样品的验证实验,结果见表6。从表6可以看出,2厂家样品存在着差异,G厂家2批样品均不符合规定,提示G厂家的生产工艺有待改进。3降压物质检查多组分生化药大多来自动物脏器的提取物,来源复杂,存在组分不明、结构不清或有可能因脏器离体后组织出现自溶现象混入组胺、类组胺样具有降压作用的活性物质,从而影响药物的治疗和产生意外不良反应。因此,在多组分生化药注射剂质量标准中检查降压物质是确保临床安全用药的重要措施。鹿瓜多肽注射剂和骨瓜提取物注射液分别从梅花鹿骨和甜瓜籽、猪骨和甜瓜籽提取精制后制成,药物成分复杂,原标准中均有降压物质检查项,但未设剂量限值,说明该类品种质量标准不完善,本研究根据《中国药典》2005年版一部附录确定了临床用药剂量作为降压物质的检查限值,对原有标准进行了补充修改。脑苷肌肽注射液和曲克芦丁脑蛋白水解物注射液本研究虽未发现有降压反应,但在我国,GMP尚处于初级阶段,药品质量尚处于中低水平,在药品生产过程中由于可变因素多而不可避免地产生影响安全性、有效性的质量问题,此类产品增订降压物质检查项对其药品的质量控制是必要