可见分光光度计3

实验一

紫外－可见分光光度计

的性能检验

一、实验目的1、掌握紫外－可见分光光度计性能的检验方法2、学会UV1100型紫外－可见分光光度计的使用方法

二、实验原理对分光光度计进行性能检查，以保证测定结果的准确。三、仪器与试剂UV－1100型紫外－可见分光光度仪石英比色皿（一对）擦镜纸蒸馏水6mg/100mlK2Cr2O7溶液0.002mol/molKMnO4溶液

四、实验内容及操作步骤1、比色皿的配对性注入蒸馏水两个比色皿分别λ＝440nm以一个比色皿为空白（T1＝100％）测定另一个比色皿的T2ΔT=T1-T2ΔT<0.5%ΔT>0.5%两个比色皿配对两个比色不配对，应进行校正2、波长精度的检查以蒸馏水为空白

测定KMnO4溶液的吸收曲线若测得的最大吸收波长在525±1nm以内说明仪器波长精度符合使用要求5008000.40.2λ(nm)A0

3、重复性的检查以0.02mol/L的H2SO4为空白在257nm处同一K2Cr2O7溶液的T，连续测定7次测定求出极差若极差<0.5%仪器的重复性符合使用要求

4.吸收值准确度的检查λ＝235nm、257nm分别测定K2Cr2O7溶液吸光度并计算吸收系数以0.02mol/L的H2SO4为空白(T＝100%）313nm、350nm与下表规定的吸收系数比较若相对偏差在1%以内说明仪器符合使用要求波长/nm

吸收系数235123.0～126.0257142.8～146.231347.0～50.3350105.5～108.5五、思考题1、同种比色皿透光度的差异对测定有何影响？2、检查分光光度计的重复性对测定有什么实际意义？实验二

吸收曲线的测绘及

吸收系数的测定

一、实验目的

1、掌握测绘吸收曲线的方法

2、学会测定吸收系数二、实验原理

1、若溶剂固定不变，化合物吸收曲线所出现的λmax、λmin或λ(S)为一定值，且数目也一定，为鉴别化合物提供了有力的证据。

2、百分吸收系数是指当溶液浓度为1%，液层厚度为1cm时的吸光度。即三、仪器与试剂

UV－1100型紫外－可见分光光度计石英比色皿（一对）

95%乙醇（A.R）

0.005%丹皮酚对照品溶液四、实验内容及操作步骤丹皮酚对照品10mg95％乙醇溶解定容至10ml摇匀精密吸取5ml置100ml量瓶95％乙醇定容作为母液备用母液中丹皮酚的含量为0.005%1、吸收曲线的测绘精密吸取母液1ml置10ml量瓶95％乙醇定容以95％乙醇为空白，进行光谱扫描，得到吸收曲线图。2、吸收曲线的测绘利用上述溶液，在274nm波长处测定其吸光度并计算百分吸收系数。实验三

分光光度法测定槐花中总黄酮的含量一、实验目的

1、掌握用标准曲线法测定槐花中总黄酮含量的方法

2、巩固紫外－可见分光光度计的操作方法二、实验原理黄酮类化合物分子中的羰基、羟基等结构可与金属盐类试剂如铝盐、铅盐等生成有色配合物，可用于定量分析。三、仪器与试剂

UV－1100型紫外－可见分光光度仪石英比色皿（一对）

5%NaNO2溶液

10%Al(NO3)3溶液

NaOH试液

芦丁对照品

槐花药材

其余试剂均为分析纯；

四、实验内容及操作步骤1、对照品溶液的制备加甲醇，水浴使溶解芦丁对照品50mg置25ml量瓶中放冷，加甲醇至刻度，摇匀精密吸取10ml置100ml量瓶中加水至刻度，摇匀即得（每1ml中含无水芦丁0.2mg）2、标准曲线的制备精密量取对照品溶液0、1、2、3、4、5ml分别置25ml量瓶中各加H2O加5%NaNO21ml摇匀放置6min10%Al(NO3)31ml摇匀放置6min加加NaOH试液

10ml加水至刻度摇匀，放置15min至5mlλ=500nm以相应试剂为空白测定吸光度（A）以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线吸光度浓度（mg/ml）3、供试品溶液的制备槐花粗粉1g精密称定置索氏提取器中加乙醚加热回流至提取液无色放冷弃乙醚液加甲醇90ml加热回流至提取液无色移至100ml量瓶中甲醇少量多次洗涤容器洗液并入量瓶中加甲醇至刻度摇匀精密吸取10ml置100ml量瓶中加水至刻度，摇匀即得4、样品的测定精密吸取供试品溶液3ml置25ml量瓶中照标准曲线制备项下的方法自“加水至5ml”起从标准曲线上求出供试品溶液中芦丁的重量，即得依法测定吸光度槐花中含总黄酮以无水芦丁（C27H30O16）计，不得少于8.0%。五、注意事项

1、对照品和样品应同时显色

2、显色剂加入的顺序、加入量和显色时间要正确六、思考题

1.分光光度法有哪些影响因素？

2.试述标准曲线法的优点。实验四、薄层板的制备一、实验目的掌握薄层板的制板方法。二、仪器与试剂天平（0.1g）研钵玻璃板10cm×20cmCMC-Na水溶液（3‰）蒸馏水薄层层析用硅胶GF254（青岛海洋化工厂）三、实验内容及操作步骤

1.洗板选取板面平整的玻璃板，洗净后放置在干净、平整的台面上，阴干备用。2．匀浆将吸附剂1份（3.0g）和水3份在研钵中向同一方向研磨混合均匀。

3．铺制将已调制好的吸附剂匀浆倒至玻璃板的一端，用研棒将匀浆引到玻板的各个边缘，轻轻震动，使吸附剂均匀铺开成一薄层。置水平台上阴干。4．活化将阴干的薄层板至于110℃烘箱中活化30分钟，置于有干燥器中备用。四、思考题

1．薄层板的铺制过程中应注意哪些问题？

实验五薄层色谱定性分析

（五味子的定性鉴别）

一、实验目的1.掌握薄层色谱的定性分析方法。2.熟悉薄层板的点样方法。二、实验原理

中药五味子中，五味子甲素为其主要有效成分之一，为了更好的进行定性鉴别，选用五味子甲素对照品和五味子对照药材进行对照，根据相同的组分在相同的条件下，应该有相同的颜色和比移值来作为定性鉴别的依据。五味子植株五味子药材三、仪器与试剂定量毛细管已制备好的薄层板（硅胶GF254）展开缸所用试剂均为分析纯五味子粉末定量毛细管双槽展开缸对照品四、实验内容及操作步骤1.供试品液的制备：取五味子粉末1g，加三氯甲烷20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品液。2.对照药材溶液的制备：取五味子对照药材1g，同法制成对照药材溶液。3.对照品溶液的制备：取五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成每ml含1mg的对照品溶液。

4.吸取上述三种溶液各2μl，点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚（30～60℃）－甲酸乙酯－甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。五、思考题

1．如何克服薄层展开过程中的边缘效应？引起边缘效应的因素有哪些？

实验六、高效液相色谱仪的使用一、实验目的掌握高效液相色谱仪的使用方法了解高效液相色谱仪的结构高效液相流程图1溶剂贮器,2泵,3流量与速度检测装置,4进样阀,5预柱(保护柱),6分离柱(色谱柱),7检测器,8数据记录及处理系统,9废液瓶二、仪器与试剂

L-2000液相色谱仪（L-2400紫外检测器）C18反相键合色谱柱（250mm×4.6mm）微量进样器（25μl）过滤器（0.45μm）及脱气装置苯、甲苯、萘甲醇（色谱纯）重蒸馏水三、实验内容与步骤

（一）流动相的预处理1．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。2．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。（二）安装色谱柱按色谱柱标示意流液方向安装好色谱