消毒与灭菌专业知识讲座

无菌操作基本技术灭菌接种8/22/20231消毒与灭菌专业知识讲座第1页灭菌(sterilization)：杀灭或去除物体上全部微生物方法，包含芽胞。消毒(disinfection)：指杀死物体上病原微生物方法，芽胞或非病原微生物可能仍存活。用于消毒药品称为消毒剂(disinfectant)。防腐(antisepsis)：体外预防或抑制细菌生长繁殖方法。细菌普通不死亡。用于防腐药品称为防腐剂(antiseptics)。第一节惯用术语和概念8/22/20232消毒与灭菌专业知识讲座第2页抑菌(bacteriostasis):抑制细菌和真菌生长繁殖方法。惯用抑菌剂（bacteriostat）是一些抗生素，能可逆性抑制细菌繁殖，但不直接杀死细菌无菌(asepsis):指没有活菌意思。

无菌操作(antiseptictechnique)：指预防细菌进入人体或其它物品操作技术。清洁和净化：降低微生物数量或活性方法。8/22/20233消毒与灭菌专业知识讲座第3页

第二节消毒灭菌方式

一、物理消毒灭菌法

热力灭菌法干热灭菌法湿热灭菌法光线与射线过滤除菌超声波消毒法干燥与低温抑菌法8/22/20234消毒与灭菌专业知识讲座第4页干热灭菌法：使微生物脱水干燥和大分子变性死亡焚烧烧灼干烤：通常加温160～180℃保持2h红外线灭菌8/22/20235消毒与灭菌专业知识讲座第5页湿热灭菌法在同一温度下湿热杀菌效果比干热好，因为：温热灭菌时菌体蛋白质易变性；湿热穿透力大；湿热蒸汽有潜热存在。8/22/20236消毒与灭菌专业知识讲座第6页巴氏消毒法（pasteurization）61.1～62.8℃30min71.7℃15～30秒杀死液体中病原菌或一些特定微生物。消毒牛奶、酒类等食品。8/22/20237消毒与灭菌专业知识讲座第7页煮沸消毒法煮沸100℃经5min可杀死一切细菌繁殖体，普通消毒以煮沸10min为宜。芽胞需1~2小时才能杀死。用于普通外科器械、胶管和注射器、饮水和食具消毒。8/22/20238消毒与灭菌专业知识讲座第8页流通蒸汽灭菌法细菌繁殖体需15-30min才能杀死，但芽胞不会被全部杀死。间歇灭菌法本法是利用重复屡次流通蒸汽灭菌，以到达灭菌目标。只适合用于不耐热（100℃以内）营养物质如一些培养基灭菌。8/22/20239消毒与灭菌专业知识讲座第9页高压蒸汽法Autoclaving压力：1.05kg/cm2温度：121.3℃时间：15～30min效果杀死一切微生物，包含芽胞耐高热、不怕潮湿物品8/22/202310消毒与灭菌专业知识讲座第10页燃料加热压力锅式高压灭菌器8/22/202311消毒与灭菌专业知识讲座第11页光线与射线日光和紫外线杀菌波长：240～280nm，最适：260nm杀菌机制：破坏核酸结构用于物体表面和空气消毒电离射线和微波γ射线、高能量电子束（阴极射线）不升高温度且穿透力强适于忌热物品灭菌或消毒8/22/202312消毒与灭菌专业知识讲座第12页滤过除菌（filter）惯用不能加热灭菌血清或液体不能除去病毒、支原体和Ｌ型细菌惯用除菌滤器蔡氏（Seitz）滤器玻璃滤器薄膜滤器8/22/202313消毒与灭菌专业知识讲座第13页超声波消毒法：杀菌不彻底，主要用于破碎细菌，提取菌体组分。腌制干燥与低温抑菌法：主要用于保留食品、保留菌种。真空干燥法8/22/202314消毒与灭菌专业知识讲座第14页

二、化学消毒灭菌法类别作用机制惯用种类酚类蛋白变性，细胞膜损伤石炭酸醇类蛋白变性乙醇氧化剂氧化、蛋白沉淀高锰酸钾、过氧乙酸、碘酒重金属盐氧化、蛋白酶变性红汞、硫柳汞表面活性剂蛋白变性，细胞膜损伤新洁而灭染料干扰氧化、抑制繁殖龙胆紫酸碱类破坏膜、壁，蛋白凝固醋酸、生石灰烷化剂蛋白质、核酸烷基化环氧乙烷8/22/202315消毒与灭菌专业知识讲座第15页

消毒剂作用机理

使细胞膜通透性受损；使菌体蛋白变性和凝固，失去生物活性，造成细菌死亡；破坏或改变蛋白质与核酸功效基团，使菌体酶蛋白失去酶活性。8/22/202316消毒与灭菌专业知识讲座第16页二、化学消毒灭菌法（一）高效消毒剂（high-leveldisinfectants）

1.含氯消毒剂；2.过氧化物消毒剂；3.醛类消毒剂；4.环氧乙烷（二）中效消毒剂（intermediate-leveldisinfectants）

1.含碘消毒剂；2.醇类消毒剂（三）低效消毒剂（low-leveldisinfectants）

1.季铵盐类；2.氯已定；3.高锰酸钾8/22/202317消毒与灭菌专业知识讲座第17页固体二氧化氯消毒剂8/22/202318消毒与灭菌专业知识讲座第18页第三节消毒灭菌利用（一）高危器械物品用时需进入无菌组织物品。全部这些物品都应该灭菌。（二）中危器械物品用时不进入无菌组织但接触黏膜器械。采取消毒即可。（三）低危器械物品只接触未损伤皮肤但不进入无菌组织和不接触黏膜物品。普通用后清洗、消毒即可。（四）快速周转医疗器械

一、医疗器械物品消毒灭菌8/22/202319消毒与灭菌专业知识讲座第19页（二）室内空气消毒灭菌

1.物理消毒法

①紫外线照射（1.5W/m3，1h）最惯用；②滤过除菌：空气经过孔径小于0.2μm高效过滤装置以除去细菌和带菌尘埃。

2．化学消毒法包含化学消毒剂喷雾和熏蒸：①过氧乙酸喷雾、熏蒸；②过氧化氢喷雾；③二氧化氯溶液喷洒；④中草药点燃烟熏。（三）手和皮肤消毒

用肥皂和流动水经常并正确洗手病原微生物污染时应用消毒剂消毒。8/22/202320消毒与灭菌专业知识讲座第20页（四）黏膜消毒

（五）病人排泄物与分泌物消毒灭菌

（六）病人污染物品消毒

（七）饮水消毒

（八）环境消毒

8/22/202321消毒与灭菌专业知识讲座第21页酚类作用机制惯用消毒剂用途蛋白质变性损伤细胞膜灭活酶类3%—5%石炭酸2%来苏0.01%—0.05%洗必泰地面、器具表面消毒;皮肤消毒术前洗手8/22/202322消毒与灭菌专业知识讲座第22页醇类作用机制惯用消毒剂用途蛋白质变性凝固干扰细胞代谢70%—75%乙醇50%—70%异丙醇皮肤消毒体温计消毒8/22/202323消毒与灭菌专业知识讲座第23页重金属盐类作用机制惯用消毒剂用途氧化作用蛋白质变性凝固灭活酶类0.05%—0.1%升汞2%红汞0.1%硫柳汞1%硝酸银1%—5%蛋白银非金属器皿消毒皮肤、粘膜、小创伤消毒皮肤消毒、手术部位消毒新生儿滴眼，预防淋球菌感染8/22/202324消毒与灭菌专业知识讲座第24页作用机制惯用消毒剂用途氧化作用蛋白质沉淀0.1%高锰酸钾3%过氧化氢0.2%过氧乙酸2%碘伏0.5ppm氯10%—20%漂白粉皮肤、尿道消毒、水果消毒创口、皮肤、粘膜消毒器材消毒皮肤消毒饮用水消毒地面、厕所、排泄物消毒氧化剂8/22/202325消毒与灭菌专业知识讲座第25页表面活性剂作用机制惯用消毒剂用途损伤细胞膜灭活酶类蛋白质沉淀0.1%新洁尔灭0.1%杜灭芬外科手术洗手，皮肤粘膜消毒，浸泡手术器械皮肤创伤冲洗，金属器械、棉织品、塑料、橡皮类消毒8/22/202326消毒与灭菌专业知识讲座第26页烷化剂作用机制惯用消毒剂用途菌体蛋白、核酸烷基化10%甲醛0.05%环氧乙烷2%戊二醛浸泡消毒，空气消毒手术器械、敷料消毒精密仪器、内窥镜消毒8/22/202327消毒与灭菌专业知识讲座第27页染料作用机制惯用消毒剂用途对核酸有亲和力，影响繁殖以及干扰氧化过程2%龙胆紫浅表创伤消毒8/22/202328消毒与灭菌专业知识讲座第28页酸碱类作用机制惯用消毒剂用途破化细胞膜、细胞壁和凝固蛋白醋酸熏蒸1:4生石灰空气消毒地面、排泄物消毒8/22/202329消毒与灭菌专业知识讲座第29页第四节影响消毒灭菌效果原因消毒剂性质、浓度和作用时间75%ethanol温度和酸碱度：温度升高效率增强Anthraxspore—2%戊二醛20oC:104/ml/15min56oC:104/ml/1min细菌种类和数量结核杆菌、芽胞被消毒物性质8/22/202330消毒与灭菌专业知识讲座第30页消毒剂选择标准效果好毒力低廉价8/22/202331消毒与灭菌专业知识讲座第31页小结概念：消毒灭菌无菌抑菌防腐物理灭菌方法与应用湿热法种类和应用消毒剂作用原理和应用8/22/202332消毒与灭菌专业知识讲座第32页消毒与灭菌灭菌消毒防腐抑菌无菌热力灭菌法高压蒸汽灭菌法化学消毒剂种类和作用机制8/22/202333消毒与灭菌专业知识讲座第33页问题什么是消毒、灭菌、无菌、抑菌、防腐？物理灭菌有哪些方法？湿热灭菌有哪些方法？分别应用何处？高压蒸汽灭菌法原理、应用？消毒剂作用原理是什么？使用消毒剂有何注意事项？8/22/202334消毒与灭菌专业知识讲座第34页

第五节生物安全及无菌操作基本技术8/22/202335消毒与灭菌专业知识讲座第35页生物安全biosafety生物安全biosafety

防止危险生物因子造成试验室人员暴露，向试验室外扩散并造成危害综合办法。8/22/202336消毒与灭菌专业知识讲座第36页生物试验室试验室分区laboratoryarea按照生物因污染概率大小，试验室能够进行合理分区。危害程度分级：依据生物因子对个体和群体危害程度将其分为4级8/22/202337消毒与灭菌专业知识讲座第37页生物危害程度Ⅰ级（低个体危害，低群体危害）不会造成健康工作者和动物致病细菌、真菌、病毒和寄生虫等生物因子。Ⅱ级（中等个体危害，有限群体危害）能引发人或动物发病，但普通情况下对健康工作者、群体、家畜或环境不会引发严重危害病原体。试验室感染不造成严重疾病，具备有效治疗和预防办法，而且传输风险有限。Ⅱ级8/22/202338消毒与灭菌专业知识讲座第38页生物危害程度Ⅲ级(高个体危害，低群体危害)能引发人或动物严重疾病，或造成严重经济损失，但通常不能因偶然接触而在个体间传输，或能用抗生素抗寄生虫药治疗病原体。Ⅳ级（高个体危害，高群体危害）能引发人或动物非常严重疾病，普通不能治愈，轻易直接、间接或因偶然接触在人与人，或动物与人，或人与动物，或动物与动物之间传输病原体。Ⅳ级Ⅲ级8/22/202339消毒与灭菌专业知识讲座第39页试验室生物安全试验室及其人员生物安全管理，按国务院令(第424号)《病原微生物试验室生物安全管理条例》于年11月起施行。病原微生物，是指能够使人或者动物致病微生物。试验活动，是指试验室从事与病原微生物菌（毒）种、样本相关研究、教学、检测、诊疗等活动。

8/22/202340消毒与灭菌专业知识讲座第40页生物安全水平分级生物安全防护水平（biosafetylevel，BSL）分为4级，以表示试验室对应生物安全防护水平。BSL－1：防护水平最低,普通建筑物即可，每个试验室应设洗手池。BSL-2：试验室门有可视窗。在试验室工作区域外还应该有供长久使用存放空间。在试验室内使用专门工作服；应戴乳胶手套。配置高压蒸汽灭菌器，在试验室内配置生物安全柜。BSL-28/22/202341消毒与灭菌专业知识讲座第41页BSL－1试验室防护水平最低,普通建筑物即可。8/22/202342消毒与灭菌专业知识讲座第42页生物安全水平分级BSL—3试验室：自成隔离区（有出入控制）或为独立建筑物。BSL—4防护水平最高。试验室应建造在独立建筑物内或建筑物中独立完全隔离区域内，该建筑物应远离城区。8/22/202343消毒与灭菌专业知识讲座第43页生物安全柜生物安全柜（Biologicalsafetycabinets，BSCs）是为操作含有感染性试验材料时，用来保护操作者本人、试验室环境以及试验材料，使其防止暴露于上述操作过程中可能产生感染性气溶胶和溅出物而设计。使用生物安全柜能够降低因为气溶胶暴露所造成试验室感染以及培养物交叉污染。同时也能保护环境。8/22/202344消毒与灭菌专业知识讲座第44页

一、二级试验室不得从事高致病性病原微生物试验活动。三级、四级试验室从事高致病性病原微生物试验活动。

从事高致病性病原微生物相关试验活动应该有２名以上工作人员共同进行。在同一个试验室同一个独立安全区域内，只能同时从事一个高致病性病原微生物相关试验活动。应有健全安全保卫制度。

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试验室工作人员应掌握试验室技术规范、操作规程、生物安全防护知识和实际操作技能。应有符合要求防护用具，应建立健康档案；进行预防接种。试验室应有科学、严格管理制度，定时对试验室设施设备、材料等进行检验、维护和更新，应对废水、废气以及其它废物进行合理处置，预防环境污染。8/22/202346消毒与灭菌专业知识讲座第46页未经同意，任何人不得进入试验室工作区域。儿童不得进入试验室工作区域。可能增加取得性感染危险性或感染后可能引发严重后果人员不允许进入试验室或动物房。BSL-2试验室门上应标有国际通用生物危害警告标志，包含通用生物危险性标志，标明传染因子、试验室责任人或其它人姓名、电话、以及进入试验室特殊要求。试验室门应保持关闭。工作