睾酮测定标准操作规程

睾酮测定标准操作规程1.检验原理：ARCHITECT睾酮项目采用延迟一步法免疫检测，运用Chemiflex技术，即化学发光微粒子免疫检测技术(CMIA)与灵活的检测模式的结合，定量测定人血清和血浆中的睾酮。第一步，将样本、项目专用稀释液和睾酮抗体（绵羊，单克隆）包被的顺磁微粒子混合。样本中的睾酮与睾酮抗体包被的微粒子结合。孵育后，将吖啶酯标记的睾酮结合物添加至反应混合物中。进一步孵育和冲洗后，将预激发液和激发液加入反应混合物中。测量产生的化学发光反应，以相对发光单位（RLUs）表示。样本中的睾酮含量与ARCHITECTi光学系统检测到的RLUs值之间成反比。睾酮浓度由已知睾酮浓度的校准曲线得出。2.试剂主要组成成分2.1试剂盒微粒子：睾酮抗体（绵羊，单克隆）包被的微粒子，储存于含有蛋白（牛）稳定剂的BISTris缓冲液中。最低浓度：0.1%固体物质。防腐剂：ProClin300。结合物：吖啶酯标记的睾酮结合物，储存于表面活性剂稳定剂的BISTris缓冲液中。最低浓度：6.5nmol/L。防腐剂：ProClin300。项目专用稀释液：睾酮项目稀释液，含有磷酸盐和甘氨酸，储存于柠檬酸盐缓冲液中。防腐剂：ProClin300。样本稀释液：睾酮样本稀释液，含有PBS缓冲液中。防腐剂：ProClin300。2.2需要但未提供的试剂预激发液：预激发液含有1.32%（W/V）过氧化氢激发液：激发液含有0.35N氢氧化钠浓缩清洗缓冲液：浓缩清洗缓冲液含有磷酸盐缓冲液。防腐剂：抗菌剂。3.样本要求：人血清（包括采集于血清分离管中的血清）或采集于肝素或EDTA钾抗凝管中的血浆。血清和血浆样本中应不含纤维蛋白、红细胞或其他颗粒物质。2-8℃可保存7天；7天内不能检测的，-20℃以下冻存。样本应避免反复冻融。4.检验方法：仪器法（详见雅培i1000标准操作规程）5.参考范围样本参考范围（nmol/L）血清、血浆男性4.94-32.01女性0.38-1.976.检验结果的解释睾酮项目通过四参数Logistic曲线拟合数据约简法（4PLC,Y加权）生成一条校准曲线7.检验方法的局限性7.1肝素锂血浆分离管（PST和PST-II）不能用于ARCHITECT睾酮项目。7.2睾酮检测结果与临床症状不符时，需要通过附加试验来验证检测结果。7.3检测结果用于诊断时，应当与其他其他信息结合使用，比如症状、其他检测结果以及临床影像等。7.4接受过小鼠单克隆抗体制剂诊断或治疗的患者，其样本中可能含有人抗小鼠抗体（HAMA）。使用含有小鼠单克隆抗体的试剂盒如ARCHITECT睾酮测定试剂盒检测含有HAMA的样本时，可能会出现异常值。7.5发现其与19－去甲睾酮（诺龙）反应强烈。不能使用接受了诺龙治疗的患者的样本8.产品性能指标8.1分析灵敏度：定量限ARCHITECT睾酮项目的定量限（LoQ）≤0.15nmol/L。LoQ定义为总误差估计值小于总允许误差（TEa）时测得的最低分析物浓度，其中TEa如下：•样本浓度≤0.5nmol/L时，TEa=0.125nmol/L•样本浓度>0.5nmol/L时，TEa=25%根据NCCLS文件EP17-A的指导测定LoQ。12ARCHITECT睾酮项目观测到的LoQ为0.08nmol/L(2.30ng/dL)。空白限和检测限在上述试验中也对空白限（LoB）和检测限（LoD）进行了测定。LoB为0.03nmol/L(0.87ng/dL)，LoD为0.05nmol/L(1.44ng/dL)。8.2精密度：对于睾酮浓度≥0.5nmol/L至35nmol/L的样本，ARCHITECT睾酮项目的室内（总）不精密度为CV≤10%。9.临床意义：睾酮是最重要的雄激素。男性体内的雄激素由睾丸的Leydig细胞（间质细胞）分泌，并受黄体生成素(LH)调控。睾酮分泌受下丘脑的促性腺激素释放激素的负反馈机制调节。下丘脑分泌促性腺激素释放激素，促进垂体前叶合成和释放LH和尿促卵泡素(FSH)。女性体内，睾酮由卵泡膜和卵巢间质细胞分泌，肾上腺雄激素代谢也产生睾酮。女性睾酮浓度比男性低大约10-20倍。在体内循环中，约97%的睾酮由蛋白质运输，大多数结合至性激素结合球蛋白（SHBG），亲和力约为109Lmol-1。睾酮与白蛋白也有较低的结合率。ARCHITECT睾酮项目将睾酮从结合蛋白中释放出来，从而测定总睾酮量。游离睾酮可通过总睾酮、SHBG和白蛋白浓度计算得出。也可计算出游离雄激素指数（FAI）(FAI=[总睾酮]/[SHBG])，并提供游离睾酮指数。个体的睾酮浓度24小时内处于波动状态。夜间LH脉冲式释放导致清晨睾酮浓度