Modfit分析细胞周期指南

Modfit本指南只供给在guavaModfit一．概述细胞周期的概念：细胞由一次分裂完毕到下一次分裂完毕，都要经受一样的变化阶段(即G1→S→G2→M)周而复始地进展活动，细胞的这种生长、分裂循环即称为细胞周期(cellcyc1e)。一个细胞周期包括有丝分裂期(M)和分裂间期(G1、S、G2)。尽管在各种细胞中各期所占时间都不尽一样，但相对而言M期最短，S期却较长。分裂间期：1、G1SDNA复制有关的酶明显增多，线粒体、叶绿体、核糖体增多，质网在更扩大，高尔基体、溶酶体都增加，中心粒彼此分别、复制。2、S期：DNA、组蛋白合成3、G2期，SG2期、S期、M期反映了细胞的G2期、S期〔因M期较短。因而，G2/M％+S％反映了细胞增殖力量。二者有无差异要进展统计检验。(如干细胞)，由于细胞不断的增殖，细胞G1、S、G2M期的连续的细胞周期中。在细胞周期的各阶段，细胞分别DNA复制、蛋白质合成及细胞分裂等重要的生理活动。每一阶段都是下一阶段的预备期,真核细胞可以在启动下一个周期前监测与一个细胞周期顺当完成相关的生化大事，这包括各种体外因素威逼下游大事进展时可逆地将细胞周期阻滞在特定的生理阶段的力量，而这种特定的生理阶段称为检定点(checkpoint)。只有前一阶段的生理活动完成后，才能通过称进的因子，从而使细胞周期停滞在检定点，这被称为细胞周期阻滞(cellcyclearrest)。比较相G1、S、G2期差异有无统计学意义，才能说有无细胞周期阻滞。第一图：增值率〔合成期〕〔分裂期：％其次图：增值率〔合成期〕〔分裂期：％据此分析两者的增值没有明显的差异。虽然其次图比第一图的SG2期下降了。细胞周期是基于细胞处于不同分裂时期具有不同的DNA含量而分析细胞处于不同的时期的G1G1＋G0期细胞的百分比。G2的百分比实G2＋M期细胞的百分比。二．细胞样品制备化丙啶〔PI〕染色进展细胞周期和倍体分析的细胞通透剂，通常为70％冷乙醇；乙醇必需与流式细胞仪猎取细胞的速度不宜太快，在guava上要使用最低速。用户首先使用guava的细胞周期试剂盒，并按相应的操作步骤进展细胞固定、染色后，guava的细胞周期模块进展数据采集和分析，并生成以.ccy.CCY.FCS为后缀的文件。细胞周期结果受样品制备的影响较大，请参阅相关文献进展样品制备。guava细胞周期试剂盒简要操作步骤：70%的冰乙醇,-20C2小时制备单细胞悬液,收集细胞,离心去除培液,PBS重悬离心,PBS.100ulPBS重悬.100ulPBS7ml70%的冰乙醇中固定过夜固定后,450g5分钟,弃固定液,3mLPBS重悬.再次离心,PBS,留细胞在离心管底部,500ulCellCycle试剂30分钟后上机检测.请留意在固定步骤中，参加－20℃70%酒精〔1到2ml〕打匀，固定，至少半个小时以上〔100ul7ml70%冰乙醇〔-202小时〕中，每加一次都需要反复吹打，以避开细胞成团；需要留意的就是加酒精固定的时候要用4℃预冷的酒精，缓慢的加，边加边晃动细胞，避开细胞黏连在一起〔不做的话，可放入2-3〕PBS洗去固定剂时，不宜洗得过多，以免细胞损失。三．Modfit操作指南双击t图标，翻开t软件〔无需安装，翻开界面如下：OK连续，会消灭下述界面，每个均点击OK即可：File〔FCS3.0文件open以翻开文件：翻开文件，可以看到该文件包含10个数据文件，假设分析第一个文件，则选中第一个文件〔10个数据文件中再选中其次个进展分析，其它8个数据文件分析方法同上，点击K以翻开该数据文件：在选择参数erranalysi〕时选择第五个：选择右下脚的Convert按钮，在下述界面的Linear-to-LogConversion下选择第六个，点选tog前的方框，再选中K连续：OK连续：EnableGate1DefineGate1按钮进展设门：〔XY〕选择第五个参数，点击K连续：+字形调整其位置，正常的细胞周期细胞应为上下两群细胞的哑铃外形，并调整方框的大小，以去除碎片及粘连细胞：OK按钮，软件会回到设门的界面，点击OK连续：软件会消灭设门的细胞及细胞周期的峰图：AnalysisSyncWizardCreateoreditmodel:软件消灭下述细胞周期的设置界面，分别进展G0/G1、G2/MSPhase的设置，调整时可选择其中的红色三角转变G0/G1、G2/M的位置，一般选择默认即可〔如不想设置，可直接选择其次排的o按钮进展自动分析：设置完成后，点击Analysis即可自动完成分析过程，并消灭分析结果如下，左侧为拟合的细胞周期图，右为统计数据：EditCopy按钮，即可将分析结果和图形复制到WordPPT文档中：Word文档后的状况：考。具体产品使用方法及留意事项，请参阅具体的产品使用说明书以获更具体的使用方法。指南的编写得到医科大学的玉芳教师的大力帮助，在此深表感。默克密理博生物科学部市浦东江高科技园区晨晖路88号二号楼2楼：202303：2