CD34＋细胞绝对计数标准操作规程

CD34＋细胞绝对计数标准操作规程××医院检验科临床免疫室作业指导书文件编号:XXX生效日期：共页第页1.目的规范流式细胞检测操作程序，保证全血、骨髓或单采造血干细胞悬液造血干细胞的测定项目的正常开展，使得测量数据和检测结果具有良好的溯源性、准确性和可靠性。2.原理在样本中加入适量的试剂后，试剂中荧光标记的单克隆抗体与细胞表面的抗原特异性结合，核酸染料标记所有有核细胞的DNA和RNA，同时加入已知数目的荧光微球。在分析时，用采集的CD34细胞的数目除以采集的荧光微球的数目，再乘以荧光微球的浓度即可计算出样本中CD34＋细胞的绝对数目。3.标本要求标本主要为单采的干细胞，样本采集后立刻送检。4.试剂与仪器表所示CD34＋细胞绝对计数试剂一览表试剂名称品牌剂型规格保存条件单克隆CD34PE2~单克隆CD34PE2~8℃抗体CD45PC5品牌A液体1ml2mg／mlBSA的PBS2~8℃氯化铵溶血剂自配试剂液体室温室温鞘液鞘液液体—清洗液清洗液液体L—L—液体—2—含核酸染料、CD34PE、CD45PerCP组合抗体；②试剂B(1瓶)：对照试剂包含核酸染料、KLHPE、CD45PerCP组合抗体，2~8℃保存。1∶10稀释为1×溶血素，室温下可以稳定1个月。5.操作步骤PE各10μl，对照管加入CD45PC510μl和IgGPE10μl。S案(ISHAGE方案)采样分析。数据采集和结果分析(CXP2．0分析软件分析结果)：ISHAGE方案设门有着严格强度。Trucount绝对计数管，CD34检测管和对照管，同时在每一管上要同时标记样本的编码。的试剂放到绝对计数管金属网架上面的管壁上，不要碰到管底的颗粒。5．2．1．3反向加样技术吸取50μl混匀的样本到每一个绝对计数管中。盖上绝对计数管n机检测。光微球检查仪器的光路、流路及补偿。 取至少60000个细胞，获取对照管细胞至少60000个细胞。用对照管来评价非特异性染色。er开始检测样本。录实验数据。若存在问题样本，检查出错原因(观察上样管有无裂缝等)。将Loader归位后在获取面板点击“RunCarousel”，在跳出的对话框中选择要重新检测的样本。确认后开始检测样本。6.校准常用方式为使用试剂／仪器对应的质控微球溶液对仪器系统校准和电压标定。7.质控开机前先使用标准校准微球校准仪器，对于无厂家或第三方质控品的项目可在不同仪器之间进行比对。8.结果判断9.注意事项9．2·样本要充分混匀后加样；最后计算前加微球时一定要混匀，取样及微球的均匀程度将直接影响检测结果；建议做复管取均值。9．3·对于任何包含绝对计数的实验，采集细胞数的多少会影响结果。至少采集60000个细胞和1000个微球。9．4·成分白细胞样本必须在采集6h内染色，并在染色后24h内上机分析。外周血和动员后的血标本要在采集后24h内染色，并在染色后24h内上机分析。其他类型的样本要在10.临床意义CD34是20世纪80年代中期发现的一种细胞表面黏附分子，表达在骨髓和外周血的造血干／祖细胞及具有造血潜能的各种集落形成细胞上，包括多能及定向造血祖细胞。CD34＋细胞在正常骨髓中占1％~4％，正常人外周血中＜0．01％。动物体内及人类临床实践均证明输入一定数量的CD34