细胞工程 实验技术

CELecture1

细胞工程实验室基本实验技术

授课教师:谢浩10/20051WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.细胞品种改良，生物制品(如抗体制备)，医学用途，…培养，改造细胞工程实验室的设置和运行都是为细胞工程服务的。10/20052WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.细胞培养的基本概念细胞培养的基本条件细胞培养的基本技术10/20053WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.CE1-1 细胞培养的基本概念10/20054WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.什么是细胞/组织培养？体外细胞培养的优点和缺点培养细胞生长的基本条件10/20055WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.什么是细胞/组织培养？细胞的体外繁殖 Propagationofcellsoutsidetheorganism包括动物组织培养和植物组织培养 Tissuecultureinvolvesbothplantandanimalcells通过组织培养可以获得克隆 Tissuecultureproducesclones,inwhichallproductcellshavethesamegenotype(unlessaffectedbymutation

duringculture)10/20056WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.体外细胞培养的优点细胞株和细胞系的遗传单一性可由单细胞决定 Singlewelldefinedcelltype培养条件可控制，较易操作 Controlledconditions，alsoeasytomanipulate生物材料操作方便 Superbaccess可代替动物试验 AlternativetoanimaltestingModelsystemfordiscoveryofphysiologicalprinciplesChecklateronthesmallernumberofanimals可以获得大量的细胞 Largequantitiesofcellscanbeobtained10/20057WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.体外细胞培养的缺点细胞培养同动物培养完全不一样 NotatalllikeananimalIncellculturescellsarenolongerorganizedintotissuesMonolayerisnothinglikea3Dtissue细胞培养环境同体内环境不同 EnvironmentisnotlikeinvivoECMscaffolding受血清，血浆等培养条件的影响 Effectsofserum,plasma,etc. “Tissueculturecanbeapowerfultechniqueifconductedproperlyandagreatwasteoftimeandmoneywhendonesloppily” BerniceMartin,Ph.D.10/20058WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.细胞的营养需要细胞的生存环境温度: 37℃，O2CO2: 5%，CO2+H2O←→H2CO3←→H++HCO3-pH渗透压 无污染无毒培养细胞生长的条件10/20059WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.CE株1-峡2细胞窗培养尝的设备10司/2卸00宿510W捏uh宿an废U预ni廊ve那rs荣it判y绣of穗S紧ci餐en省ce久a济nd译T努ec灶hn刃ol洽og叉y鉴X椒ie己H苏.无菌减：净化很工作疲室，婆风淋具室，外传递庸窗，劝高效拔过滤豆器，挑洁净沸层流猾罩，哄生物冶安全仪柜，夹超净文工作届台，奇紫外插灯，桌电热鞠干燥舞箱，绝滤器批，高牌压灭扩菌器怎，抗拾生素细胞推生长游：纯水康蒸馏轻器，条纯水古仪，嫌培养瞎板，培养捞瓶，CO帅2培养嘉箱，秩培养秒基，椒血清细胞估检测壳：倒置歉显微翼镜，酶标做仪至，微师孔板武震荡横器，高速视离心捕机，筐移液炊器细胞剩保存某：液氮抚罐10炮/2食00良511W吩uh确an鸽U计ni恼ve骨rs悄it煮y叨of诉S炒ci妖en传ce蛙a塘nd步T平ec感hn拉ol员og统y蛮X疑ie代H芽.无菌种设备征：净汤化工扛作室------我国药品生产洁净室（区）空气洁净度标准-------洁净度级别尘粒最大允许数/立方米尘粒最大允许数

≥0.5um

≥5um浮游菌/立方沉降菌/皿

100

3,500

0

5

1

10,000

350,000

2,000

100

3

100,0003,500,000

20,000

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10

300,00010,500,000

60,000

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1510沉/2授00马512W牌uh塌an洲U阁ni雪ve决rs惰it舰y没of载S而ci名en借ce炕a鞠nd腹T唐ec起hn型ol执og抽y配X是ie赏H链.风淋重室是俊生物导洁净哨室的心理想高配套挑设备羽，它罗不仅敞可以茄清除蜜人体倚和物得品表加面附诱着的瞎尘埃贴，减装少带桨入洁乳净室航的灰译尘量琴，而荡且兼栋有气梁闸室首的功斧能，短可防命止非肚洁净违空气忍的侵果入。循风淋所室的颈板壁月采用川轻质笛隔热志夹芯坟钢板索，吹诵淋板爱采用优进口厚不锈匀钢制介作，看吹淋添口方盈向可必调，杯风淋碰时间弄可在30揉-9叔9秒间票的调扛整。隆风淋着室可洋以配馆合加裹热器茫，冬讽天可第以加研热，不温度直可调镜，一墙般控践制温五度在30响-3饱5℃较为衔适宜宣。无菌陶设备骡：风糖淋室10尼/2准00塑513W微uh姐an帮U锣ni乓ve姻rs享it芦y沫of昼S可ci扩en赛ce且a妄nd湖T邪ec雕hn爹ol立og拿y誉X神ie叶H炮.该装转置是被一种巴洁净墓室的劳辅助伤设备兔，主壶要用皂于洁盖净区酒与洁食净区罚，洁企净区就与非躺洁净验区之数间小舱件物宋品的刺传递庄，以昼减少萍洁净拢室的较开门砍次数跟，把贺对洁生净区尚的污兼染降薯低到迟最低面程度百。PB系列誉传递烂窗按旨用途彻分为备标准谨型和没生物证洁净己型两梨种。袄（后吊者带打空气鼠自净唇装置寻）按坏门互蹈锁形丸式分撇为机忆械互床锁和劣电子拦互锁慰两种饱外壳壮按材灿料分贩为彩舟钢板案型、搁薄钢夺板喷覆塑型钳和全秒不锈万钢型扩三种秧通用胸型尺煎寸如泽下表域所列肌，特从殊规薄格按跑用户下要求迈制作秩。无菌川设备比：传房诚递窗10蹲/2瓦00作514W远uh枣an见U附ni油ve卫rs哀it修y耀of居S分ci变en夜ce获a痰nd胡T隙ec坐hn耕ol绝og但y宫X司ie宿H摄.高效寇过滤施器是郊用超千细玻眠璃纤可维纸率作滤撞料，调胶板友纸作惯分隔和板，蹦可与缠铝合脚金框右、木做框及屑镀锌田钢板械框组酸合而疗成。特点勇：具剃有低扮阻高光效、窜轻质盏、容速尘量妨大等怖特点膨，层污高的炎要求扫，缩侨小净竭化设盐备静点压箱肺体积傅等优详点。适用滩于常核温常席压常抖湿条含件下剑环境搜空气正的净拆化，别尤其号适用尚于需甜要高冲效空网气过塞滤器黄覆盖惩率高蚕的净乘化厂咱房。无菌博设备威：高哭效过发滤器10聪/2贵00战515W沙uh绝an蹄U叉ni等ve侦rs浪it停y嗓of谋S奔ci固en哭ce彻a佛nd撒T懒ec无hn摔ol遵og更y辫X艰ie察H千.技术浸性能建参数励：(1泪)净化墓等级刚：10予0级(美国撑联邦磁标准20锡9E敌)表(2乏)平均煌风速暂：0.侨25～0.航45雕m/鸡s(可调)登(3铅)噪音嗓：≤6腿2d劈燕B(卵A)稀(筑4)电源赔：22气0V煎/5粗0H掘Z层流宽罩是百可提馒供局傻部高柏洁净渡环境肯的空木气净述化设孕备。肚它主倘要由名箱体掀、风怀机。丧初效呈空气敲过滤的器、厉高效芒空气还过滤择器、邻阻尼熄层、端灯具宝等组及成，隶外壳首为不译锈钢认或彩粪钢板螺。该政产品字既可悟悬挂绸，又晋可地劝面支狗撑，朗结构透紧凑内，使怒用方纲便。豪可以辉单个栗使用温，也义可多洋个联侦接组鸣成带丧状洁屈净区赔域，朗形成横洁净帝隧道居。洁卧净层恩流罩毯是将傲空气走经风逼机以江一定园的风主压通捧过高虹效空贤气过表滤器捧后，砖由阻射尼层灾均压铜，使脆洁净寸空气健呈垂届直层样流型饺气流续送入掉工作眨区，烧从而刃保证贫了工攀作区税内达允到工疲艺所文需的书高洁赔净度抛。无菌讲设备掠：洁福净层排流罩10抗/2雕00脾516W成uh泳an说U救ni江ve壮rs统it群y拾of稻S孔ci页en拌ce游a邀nd意T园ec滥hn衡ol突og疫y料X喇ie袖H惩.超净器工作蕉台的夕工作罢原理帅是利酬用鼓毒风机栗驱动猫空气虏遁过争高效海滤器疗除去妖空气掀中的范尘埃已颗粒静，使勤空气别得到杆净化军。净行化空泻气徐颠徐通暴过工联作台才面，浩使工锤作台瓣内构农成无岩菌环仗境。无菌柏设备挠：超词净工释作台(H绒oo党ds含)10获/2若00糊517W脖uh伤an柳U它ni药ve誓rs错it经y眨of请S贼ci四en削ce侧a元nd槽T材ec型hn馒ol坚og悔y刘X却ie朝H泽.无菌之设备白：超探净工蕉作台10忘/2凶00鸽518W肢uh搜an垫U僵ni供ve客rs牧it泪y浙of依S肝ci微en槽ce夹a烤nd柄T抗ec凯hn剂ol糊og丑y择X库ie案H项.一种桌既能正使操英作造劳成无柔菌、费无尘却的局每部空注气环膝境，忆保证返检验梨、检吃测不桑受污洋染，烤又能湾保证翁被研肆究的万对象默（如叨病菌糠、细忌菌等桐）不男外溢纤，保许护周询围环边境及饥操作泳人员辩的安倡全隔海离设兰备。该设闷备可赛广泛腥应用杨于低骂、中咸等危蠢险度陶（病绩原体1-拖-3，DN勿A重组P1梨--汤P3）的鲜临床埋细菌韵学，傅病毒堪学、僻微生虏物学诞、组习织培援养、努生物桂学及若生命虎科学秘的研规究，舍加工惠、检征验部殖门。无菌粉设备贺：II级A型生筑物安暂全柜10丹/2蹄00熟519W炮uh糟an矛U及ni迅ve汇rs雨it阿y餐of辈S娘ci美en周ce呜a止nd霉T寺ec柔hn垂ol塞og若y过X软ie显H芽.紫外脏线消萝毒主税要用盒于培箭养室敲空气码、操碑作台键、塑晴料培痛养洋皿姑和培牙养板天等表鸣面消宗毒无菌勇设备斧：紫被外灯10叔/2顽00齐520W涉uh农an浸U弃ni红ve挨rs帐it字y云of歼S割ci融en暴ce拌a圆nd串T傲ec对hn嫌ol谅og慢y稼X限ie适H据.干热翼消毒划（16债0争℃，2小时街）主敢要用习干玻袖璃器职皿消感毒无菌死设备清：电龙热干够燥箱10眯/2适00膨521W墙uh猜an闷U警ni斑ve馋rs野it止y坟of秘S傅ci游en紫ce备a待nd今T滩ec炒hn划ol熊og探y熊X晨ie墙H码.Ze棍is两s滤器倡：过滤珍除菌赠：大壁多数息培养扔用液锅，如扮人工算合成袋培养敌基、见血清株、酶粘液等牵均采黑用滤遣过法介除菌无菌霉设备乞：滤延器10且/2擦00陡522W慢uh蓬an寄U永ni留ve低rs闻it巷y详of竟S剥ci鸭en姐ce怠a幸nd串T浪ec被hn无ol仁og箭y工X稠ie宋H返.大容季量高蔽压灭傅菌器全自吸动手蜘提式铁灭菌棕器无菌伪设备妻：灭或菌器10从/2坟00指523W丘uh独an殖U王ni尊ve戏rs筋it蹲y黑of上S样ci礼en拖ce辨a员nd拖T图ec姓hn蓝ol讯og忙y编X百ie姜H臂.细胞抗生长社设备历：纯饰水仪10谈/2旬00疲524W胃uh贡an浸U森ni乎ve胖rs尚it充y巾of原S盏ci形en途ce根a揭nd那T甚ec蛛hn籍ol忧og俭y纠X砌ie院H懒.Pi劲pe剥tt蜂es档,熊bo跌tt把le异s,患f俯la洲sk梁s,酒p阿et烟ri压d子is全he载s•塑料--扶b忆et乡丰te之r为at油ta烫ch出me颠nt骗a矛nd价c畏el偷lgr股ow毙th穗o葬f炸mo胞no浆la财ye沟r野ce躲ll令c中ul啄tu蓝re--纯m厌or事e沿ex胳pe独ns昏iv彼e原th滚an哥r债eu傍sa仙bl孕e唯gl佩as得s--苗s是ui鞠ta跳bl毁e铲fo单r斧st研or绢ag姥e尘at铸4甘ºC•玻璃--序C安an逝w决it绕hs静ta言nd站t据em谱pe裳ra农tu乖re融s黎<0解ºCus劫e带fo贝r娇ma档in蓄ta篇in泼in打g卫fr铁oz楼en裙s努to蚂ck蛋s--弦S胳te使am侦s乡丰te消ri兴li密ze萄b延y春au恼to弃cl裹av率in库g*暴re董li究es盛o久n况st怀ea型m苗pr压es吸su仇re碍a缓nd炭h已ig牲h武he圈at*伞us湖e割fa纷st里-d害ry砌c聪yc右le缺t泄o格dr禽y子co陶nd娃en填sa真te*毙us芬e弓“w宴et此”培cy毯cl堤e米fo疗r债sa狡lt岁s亏ol磨ut衡io超ns桃t脖o粪pr畜ev梁en场t蜡ev腾ap狮or接at言io报n*货lo沃os赛el纷y鹿pl咐ac本e楚ca消ps印o堂n甚bo健tt笔le亲s细胞款生长参设备摊：玻璃畏和塑娱料器法具10双/2你00仔525W旅uh歪an径U奶ni食ve才rs刃it姓y定of着S丧ci斧en心ce酷a愧nd支T吩ec谜hn喷ol以og俩y嚷X努ie削H喊.细胞肉生长傍设备棕：培养预容器猪的选济择Ma铸jo木ri迎ty喂o住f惠ve致rt蜡eb间ra吴te推c野el告ls那i堵n膨vi逗tr驱o吧gr臂ow债a奶smo棕no蜘la烧ye页rson属a透n巧ar娃ti欲fi软ci洒al从s泥ub每st芽ra属teMo舍st靠c症el舱ls水n筐ee萍d遇to全s质pr谁ea承d没ou膝t胃on滑a余s栗ub纪st辱ra亲te卫i姻n龄or津de怒r倍to够p统ro抚li蚁fe悟ra退teOv叔er保cr效ow晶di经ng谢w响il核l细in疲hi灰bi彻t砖pr洲ol杀if指er枯at循io测nBu奥t肝ce闯ll伤s染do斤n’僻t纷li怜ke端t徒o凑be驰l怎on葬el世yCe纲ll逢y膜ie当ld辰i带s同pr敲op纹or遥ti腰on剂al朋t捎o若th糊e很av陶ai乖la同bl肉e浇su忘rf菌ac供e10舒/2予00讲526W照uh滤an督U型ni末ve翁rs逮it胞y存of绸S姐ci涌en络ce牢a躲nd谨T抚ec汁hn僻ol戒og痒y雾X楚ie佣H宵.细胞遣生长记设备斤：培养赵板10室/2觉00冰527W爹uh士an腹U么ni足ve晃rs舍it转y议of首S匪ci盾en天ce厘a请nd低T替ec袭hn零ol捉og索y捎X晓ie京H掘.细胞盯生长姓设备建：培养其瓶10炕/2舞00虚528W掀uh钥an博U归ni太ve纱rs生it堤y佳of凝S五ci重en灾ce祸a私nd惩T盗ec向hn杜ol所og痰y延X哥ie史H显.10栏/2械00朵529W目uh世an已U象ni蜂ve橡rs盒it呆y回of食S微ci叨en汗ce服a介nd日T晋ec班hn纱ol睛og比y细X荐ie花H插.Se术ns谎in失g嘴an傻d历co董nt途ro惠l讲de矮vi共ce丽sCh纪am梦be新r撒fa斥ns吃–率e火ve消n墨di哄st乘ri塑bu萝ti角on荷o方f快he看at孩a饥nd券g灾as陆es–技Di颗sa门dv笋an残ta绵ge功–诱i歇nc青re炎as凤ed析s稠pr羊ea戚d柏of头c屑on斥ta招mi晨na忆ti当onCo雹pp美er禾w惨al颜ls麦–罩a离re花s敞up俯po参se守d凡to来b和e留an毕ti适mi密cr灾ob欠ia腰lCO循2留de寸li菜ve话ryRe掠du肌ct充or罚s-她to昼c躁ha示ng阅e顿th匪e悔pr励es袜su无re糕b涂et今we局en滚a似t刻an街k桌an隆din朗cu饱ba开to抗r夺(f吓ro昌m摔ab方ou赵t枪90尊0l液b条to胁1各0-秧15越lb硬)Tw极o博or苗m吐or鸽e鸟cy洒li科nd厕er拘s凡wi读th疮a助n鉴el肠ec孝tr葡on覆ic园s奏wi客tc吃hWa职tc徒h骡fo肾r闪le绢ak宾in佩g乏ga骆s吹–咳it峰c捉an延b暴e迷ex窝pe淘ns忙iv笑e细胞据生长贸设备察：培浩养箱浇（In细cu靠ba础to本r)10哪/2远00穿530W杯uh则an响U梨ni逆ve体rs祸it扫y凉of朗S世ci齿en厦ce祸a拍nd遵T尘ec的hn怒ol艳og条y覆X传ie应H内.CO教2培养还箱设算定的务条件咏为37哭℃，5％CO2。使用CO碑2培养垄箱培村养细寻胞时宫应注慨意的孕问题婆：①用螺适旋口过瓶培证养细葵胞时谅，需殖将瓶雨盖微丸松，污以保钓证通畏气。②保持幕培养欺箱内驳空气氧干净逼。定挽期消窗毒泥（90圾℃，14布h采)。③箱内冶灭菌胞蒸馏饮水30啄00毫升跪蒸馏架水槽鲁中以阴保持班箱内缩慧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极需在她火焰温近处时并经缺过烧奸灼进蝴行。细胞把培养坝的基延本操恢作：无菌亦操作绩技术10亭/2辰00既552W阳uh惠an扫U础ni版ve珠rs唐it凳y预of乱S执ci江en皂ce异a需nd悔T被ec侄hn俱ol险og织y摩X扣ie运H滋.【操作】进行桌培养旦时，容动作侦要准食确敏洁捷，职但又售不必胜太快域，以朋防空阔气流棵动，险增加壳污染耳机会迹。不喜能用厨手触波及已禁消毒冶器皿通，如望已接众触，本要用逐火焰留烧灼达消毒往或取郊备品棒更换污。细胞或培养币的基初本操紧作：无菌捉操作汉技术10卫/2尾00职553W跪uh寒an斧U胸ni扫ve券rs鲜it防y刊of陶S拒ci蒙en叼ce医a怖nd伶T浴ec其hn美ol阔og恨y湾X压ie搭H港.细胞宏培养锣的基奋本操庸作St捉er如il趁iz榜at留io柜n界Te丘ch交ni连qu中esMe摄ta铲l畅-览AGl宗as塘s御-男A,奶RPl释as客ti有cs诵A效,还R,均GMe看di脆um汽-努R,抄FSe箩ru砌m败-由R,确FSa丈lt基s遍ol讲ut窗io滔ns资-徒A纤,果R,影FA-忽au馋to归cl躲av被in另g,卵R音-r妄ad屿ia守ti尾on经,断F-膛fi过lt夏ra位ti撑on惭,亮G-版ga摊s10叉/2懂00效554W错uh稀an秧U猪ni伤ve溜rs愧it真y炼of翅S说ci扯en珠ce帜a载nd窄T致ec施hn灾ol短og液y恩X鬼ie世H面.Fi链lt苹ra再ti原onSt蹲er阿il坊iz顾at裕io舒n尿of绪s圾ol玻ut狮io本ns迟f丝式or富m起ai胀nt塘en窑an甩ce傍g张ro健wt断h轮or极t悲re逐at翅me债ntDo等n宾ot胁a况ut好oc勤la痛ve垂n沸ut律ri和en俊t纽奉me武di丹um求—h适ea拌t颈wi张ll扛d转es组tr惊oyso舱me忙o皆f村th座e纳co娘mp若ou凡nd歉s绣in温t果he戚m轨ed疏iu危mPa兔ss逐t此hr差ou泥gh晋s祖te横ri中le教f枪il魄te栽r府wi忽th斯s绳ma革ll碌p寻or青e朝si遮ze泥(突22姿μ岂m)絮u美se罪s承te全ri母le番t炒ec炭hn抹iq虎ue茧s细胞先培养滚的基辉本操鲁作10治/2米00绍555W隔uh啄an岗U基ni归ve炉rs配it介y踪蝶of恨S时ci半en绕ce刊a裂nd除T遍ec仅hn亦ol月og晋y愿X项ie窃H兰.Fi诵lt岭ra次ti夫onAl小wa施ys勺f析il惩te芹r宣th凑ro仅ug获h愉0.吃2此µm柄f肿il备te陶r优to剖r姻em蔽ov明e嚼ba善ct铺er团ia灰(廊ba惰ct揉er堂ia送a堵re拒1需-2深µ戚m)0.葬45碍µ叛m爆fi酸lt哈er角s声re疤mo盘ve文o分nl焰y府pa吧rt厘ic屋ul到at便esMy材co栗pl阵as衫maan彼d砖vi易ru鸡se江s外wi赖ll广s序ti缎ll尼f杜il喉te风r驾th检ro阵ug裂hFi汤lt愉er庄s辈co齐me抄i配n注ma泪ny表s胆iz坚es培,狡al牢l乖ar塞e扑$$哲$–国Ce抖ll摔ul基os小e,质p缝ol除yc阻ar盆bo导na后te宣,键PT纷FE拘,玻be舱st核a逮re半‘滔lo医w筛pr章ot词ei只n净bi物nd察in次g’细胞迁培养慢的基币本操羊作10瓣/2施00平556W部uh抗an唐U奥ni两ve宾rs蜡it验y择of滋S序ci股en衣ce目a腔nd膝T雅ec吉hn壳ol递og鸦y龄X蛮ie台H搅.１．蛮肉眼港观察滋培养值物颜筛色及如混浊贴度２．络倒置持显微侍镜观列察细筒胞生枯长状骡态细胞朝培养扰的基翠本操耽作：殿培养伏细胞脑的观兄察10蠢/2危00遥557W庭uh者an童U器ni筐ve朵rs赌it歌y位of而S嫌ci霞en盖ce阔a崖nd域T侦ec送hn毫ol塌og划y践X饰ie详H选.细胞滩培养占的基脆本操弯作：武清洁轿液的浮配制10生/2收00逗558W掌uh娇an卡U洲ni炮ve辛rs老it胜y卖of路S突ci押en鸽ce项a怪nd棍T旱ec占hn染ol愈og环y姨X但ie摧H资.浸泡浆（自棒来水纱）、村刷洗尝（洗哪衣粉胀）、听酸泡剂（24小时湖）流水惰冲洗劳、蒸蜘溜水争浸泡恋和冲柜洗、50颤℃烘干细胞资培养外的基节本操客作：回常用舌玻璃房诚器皿冻清洗10华/2绢00耀559W发uh堡an论U未ni塌ve赌rs尝it卡y轻of日S繁ci胃en详ce村a称nd动T燃ec予hn恒ol小og堪y西X陵ie斧H悉.甚至暂可发坊生在无最好欧的实膏验室Ha远pp咏en卖s坊to雨e怠ve挑n捡th特e秀be吃st趟…真菌Fu德ng贷al君-谦y很ea重st细菌Ba妹ct握er顶ia染l支原梁体My熊co挪pl养as狠ma–伪fi未lt港er姻ab助le皱b牢ac般te大ri吉a腰wh由ic抛h槽wi竿ll分p孩as弟s您ac痛ro络ss乔0府.2戒µ糠m伤fi白lt然er华.茶Bi铃g辣pr另ob蛾le肃m.派I外t场is利t贵re业at棍ed慢w其it留h线ce沃ph蛇al姓os绿po郑ri救n嗓an董ti窄bi川ot课ic航s.艳C史an穿t耍ak耐e险ov狱er暴l嚼ab卧or洒at稻or增ie姓s.细胞抓培养联的基粗本操禽作：Co叔nt竹am歇in闲at踏io存n10贝/2托00肥560W切uh柔an窃U疗ni掌ve蔑rs惑it牢y杠of切S现ci日en卸ce衣a稀nd捉T步ec荡hn舞ol肤og刃y腾X摸ie截H紫.Cr似yo晨pr击es民er践va盈ti划onDe纺fi绘ni封ti唱on偶:st督or予ag砍e专