白细胞计数和分类课件

实验一、白细胞计数

1.原理：血液经稀乙酸定量稀释并破坏成熟红细胞，在血细胞计数池内计数规定区域内的白细胞总数，换算成每升血液中白细胞数。2.试剂器材白细胞稀释液：冰乙酸2.0ml

10g/L亚甲蓝3滴加蒸馏水至100ml器材

改良牛鲍血细胞计数板及专用盖片、微量吸管、带孔吸头、1ML刻度移液管、小试管、洁净软纱布、干棉球、光学显微镜。毛细血管采血标准操作程序

操作步骤：1采血部位成人以左手无名指内侧为宜，半岁以下婴幼儿通常自拇指内侧或足跟两侧采血。2轻轻按摩采血部位。 3用棉签蘸消毒液消毒局部皮肤、待干。4紧捏刺血部位，使其自然充血。5用无菌刺针穿刺取血，动作应迅速，深度2～3mm，稍加挤压以血液流出为宜。6用干棉球擦去第一滴血。7按需要依次采血。8采血完毕，用干棉球压住伤口，止血片刻。

微量吸管的使用1将带孔乳胶吸头轻轻套在微量吸管上，连接紧密不漏气；2拇指和中指夹住吸头中下端，示指盖住吸头小孔，拇、中指轻微挤压排出适量空气；3将微量吸管插入抗凝血，拇、中指缓慢松劲（松动快血液会吸入吸头），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有气泡），吸管呈水平略下垂，松开示指；4用干棉球顺吸管向下拭尽管外余血（保证血量准确），轻触吸管下口吸去多余血量，使管内抗凝血正处所需刻度；5将微量吸管插入小试管底部，三指轻微用力慢慢排出血液，用上清液冲洗管内余血2-3次，轻摇试管混匀；6拔出微量吸管弃入污物桶。实验一、白细胞计数38ml白细胞稀释液。2轻轻按摩采血部位。2轻轻按摩采血部位。原理：血液经稀乙酸定量稀释并破坏成熟红细胞，在血细胞计数池内计数规定区域内的白细胞总数，换算成每升血液中白细胞数。改良牛鲍血细胞计数板及专用盖片、微量吸管、带孔吸头、1ML刻度移液管、小试管、洁净软纱布、干棉球、光学显微镜。大淋巴细胞胞浆量较多，呈清澈的淡蓝色，可见少量嗜苯胺蓝颗粒，胞核圆或椭圆，常偏向细胞一侧，染色较深。白细胞分类瑞氏染色原理：瑞氏染料溶于甲醇，离解为带正电的碱性美兰（M+）和带负电的酸性伊红（E-）离子。白细胞稀释液：冰乙酸2.微量吸管的使用细胞分布均匀的体尾交界处，滴加香柏油一滴，油镜下分类计数。8采血完毕，用干棉球压住伤口，止血片刻。2轻轻按摩采血部位。白细胞总数=4大格白细胞数（N）/4×10×20×1063将微量吸管插入抗凝血，拇、中指缓慢松劲（松动快血液会吸入吸头），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有气泡），吸管呈水平略下垂，松开示指；白细胞总数=4大格白细胞数（N）/4×10×20×1063将微量吸管插入抗凝血，拇、中指缓慢松劲（松动快血液会吸入吸头），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有气泡），吸管呈水平略下垂，松开示指；6拔出微量吸管弃入污物桶。=N÷20×109/L3.操作步骤（1）加稀释液用移液管向小试管内加入0.38ml白细胞稀释液。（2）采血、稀释用微量吸管采血20ul，拭去管外余血，释放于小试管底部，用上部稀释液洗净吸管内余血，轻摇试管混匀，静置等其溶血。（3）清洁计数板及盖片（动作轻柔），夹持盖片缘纵向前推轻放于两侧支持堤上。（4）充计数池将小试管轻微振荡2min，立即以一次性微量吸管吸取混匀后的白细胞悬液，充入计数池内。静置2-3min，使细胞沉于计数池底面。（5）调试显微镜将计数板放置载物台上，选择（4×

）低倍镜，调节聚光器使光线较暗，调节旋钮找到方格线，转至低倍镜（10×），调节光亮

。（6）计数低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数，压线细胞数上不数下，数左不数右。结果计算白细胞总数=4大格白细胞数（N）

/4×10×20×106

=N÷20×109/L用△.△×109/L（小数点后一位）表示5细胞计数原则大方格四边压线细胞数左不数右，数上不数下，弓形移动实验报告内容原理试剂器材操作步骤实验结果讨论诊断学实验二

白细胞分类1.分类原理：白细胞分类计数是将血液制备成涂片，瑞氏染色后显微镜下根据白细胞的形态特征进行分类计数。通常分类100个白细胞，计算得出各种白细胞所占百分比2.瑞氏染色原理：瑞氏染料溶于甲醇，离解为带正电的碱性美兰（M+）和带负电的酸性伊红（E-）离子。细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。各种细胞成分的化学性质不同，对染料的亲和力也不一样，故可呈不同的着色特点。3.器材光学显微镜推片，载玻片[试剂]Wright染液

Wright1.0g

甲醇600ml磷酸盐缓冲液（PH6.4～6.8）香柏油[标本来源]EDTA-K2抗凝全血3．白细胞分类：细胞分布均匀的体尾交界处，滴加香柏油一滴，油镜下分类计数。分类时要有秩序的连续进行，避免主观选择视野。通常分类计数100个白细胞，计算并报告各种白细胞所占比例。

结果记录方式：Ne正一Ly正Mo正Eo正Ba正中性粒细胞（Ne）：在瑞氏染色血涂片上呈圆形，胞浆染粉红色，核形一叶（杆状核）至五叶不等，以三叶者多见，染成深紫红色，胞浆中有许多细小均匀紫红色颗粒。各类成熟白细胞的形态学：

嗜酸性粒细胞（Eo）：较中性粒细胞稍大，胞核多为两叶，呈眼镜、八字形，核染色质粗糙染深紫红色，胞浆内充满粗大均匀的嗜酸性颗粒，瑞氏染色时呈桔红色，有折光性。

嗜碱性粒细胞（Ba）：胞浆中含有大小不等的嗜碱性颗粒，瑞氏染色时呈兰黑色。于光学显微镜下常见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易溶于水或因功能活动而脱颗粒所致；核呈淡紫红色常看不清，呈杆状或分叶状。淋巴细胞（Ly）：胞体呈圆形，在成人血涂片中以小淋巴细胞为多见，核大呈深紫色致密而浓染，胞浆量极少；大淋巴细胞胞浆量较多，呈清澈的淡蓝色，可见少量嗜苯胺蓝颗粒，胞核圆或椭圆，常偏向细胞一侧，染色较深。

3将微量吸管插入抗凝血，拇、中指缓慢松劲（松动快血液会吸入吸头），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有气泡），吸管呈水平略下垂，松开示指；（2）采血、稀释用微量吸管采血20ul，拭去管外余血，释放于小试管底部，用上部稀释液洗净吸管内余血，轻摇试管混匀，静置等其溶血。8采血完毕，用干棉球压住伤口，止血片刻。（1）加稀释液用移液管向小试管内加入0.于光学显微镜下常见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易溶于水或因功能活动而脱颗粒所致；（6）计数低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数，压线细胞数上不数下，数左不数右。细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。瑞氏染色原理：瑞氏染料溶于甲醇，离解为带正电的碱性美兰（M+）和带负电的酸性伊红（E-）离子。原理：血液经稀乙酸定量稀释并破坏成熟红细胞，在血细胞计数池内计数规定区域内的白细胞总数，换算成每升血液中白细胞数。毛细血管采血标准操作程序8采血完毕，用干棉球压住伤口，止血片刻。6用干棉球擦去第一滴血。白细胞稀释液：冰乙酸2.38ml白细胞稀释液。1将带孔乳胶吸头轻轻套在微量吸管上，连接紧密不漏气；嗜酸性粒细胞（Eo）：较中性粒细胞稍大，胞核多为两叶，呈眼镜、八字形，核染色质粗糙染深紫红色，胞浆内充满粗大均匀的嗜酸性颗粒，瑞氏染色时呈桔红色，有折光性。5将微量吸管插入小试管底部，三指轻微用力慢慢排出血液，用上清液冲洗管内余血2-3次，轻摇试管混匀；3将微量吸管插入抗凝血，拇、中指缓慢松劲（松动快血液会吸入吸头），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有气泡），吸管呈水平略下垂，松开示指；3将微量吸管插入抗凝血，拇、中指缓慢松劲（松动快血液会吸入吸头），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有气泡），吸管呈水平略下垂，松开示指；白细胞稀释液：冰乙酸2.原理：血液经稀乙酸定量稀释并破坏成熟红细胞，在血细胞计数池内计数规定区域内的白细胞总数，换算成每升血液中白细胞数。

单核细胞（Mo）：在瑞氏染色涂片上为12～20µm，胞体圆形、椭圆形或不规则形；核形多种多样，最重要的特点是染色质较细致疏松，呈丝网状或条缕状，着色较淡胞浆较多，淡兰色，含大量细小尘土样颗粒。正常成人外周血白细胞分类参考值：Ne50%～70%Ly20%～40%Mo3%～8%Eo0.5%～5%Ba0%～1%实验报告原理方法各类细胞百分比报告讨论3.操作步骤（1）加稀释液用移液管向小试管内加入0.38ml白细胞稀释液。（2）采血、稀释用微量吸管采血20ul，拭去管外余血，释放于小试管底部，用上部稀释液洗净吸管内余血，轻摇试管混匀，静置等其溶血。（3）清洁计数板及盖片（动作轻柔），夹持盖片缘纵向前推轻放于两侧支持堤上。（4）充计数池将小试管轻微振荡2min，立即以一次性微量吸管吸取混匀后的白细胞悬液，充入计数池内。静置2-3min，使细胞沉于计数池底面。（5）调试显微镜将计数板放置载物台上，选择（4×

）低倍镜，调节聚光器使光线较暗，调节旋钮找到方格线，转至低倍镜（10×），调节光亮

。（6）计数低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数，压线细胞数上不数下，数左不数右。结果计算白细胞总数=4大格白细胞数（N）

/4×10×20×106

=N÷20×109/L用△.△×109/L（小数点后一位）表示实验报告内容原理试剂器材操作步骤实验结果讨论改良牛鲍血细胞计数板及专用盖片、微量吸管、带孔吸头、1ML刻度移液管、小试管、洁净软纱布、干棉球、光学显微镜。分类原理：白细胞分类计数是将血液制备成涂片，瑞氏染色后显微镜下根据白细胞的形态特征进行分类计数。38ml白细胞稀释液。白细胞总数=4大格白细胞数（N）/4×10×20×1062拇指和中指夹住吸头中下端，示指盖住吸头小孔，拇、中指轻微挤压排出适量空气；（2）采血、稀释用微量吸管采血20ul，拭去管外余血，释放于小试管底部，用上部稀释液洗净吸管内余血，轻摇试管混匀，静置等其溶血。（3）清洁计数板及盖片（动作轻柔），夹持盖片缘纵向前推轻放于两侧支持堤上。细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。△×109/L（小数点后一位）表示Eo0.10g/L亚甲蓝3滴分类时要有秩序的连续进行，避免主观选择视野。嗜碱性粒细胞（Ba）：胞浆中含有大小不等的嗜碱性颗粒，瑞氏染色时呈兰黑色。核形多种多样，最重要的特点是染色质较细致疏松，呈丝网状或条缕状，着色较淡胞浆较多，淡兰色，含大量细小尘土样颗粒。瑞氏染色原理：瑞氏染料溶于甲醇，离解为带正电的碱性美兰（M+）和带负电的酸性伊红（E-）离子。EDTA-K2抗凝全血原理：血液经稀乙酸定量稀释并破坏成熟红细胞，在血细胞计数池内计数规定区域内的白细胞总数，换算成每升血液中白细胞数。原理：血液经稀乙酸定量稀释并破坏成熟红细胞，在血细胞计数池内计数规定区域内的白细胞总数，换算成每升血液中白细胞数。=N÷20×109/L于光学显微镜下常见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易溶于水或因功能活动而脱颗粒所致；3．白细胞分类：细胞分布均匀的体尾交界处，滴加香柏油一滴，油镜下分类计数。分类时要有秩序的连续进行，避免主观选择视野。通常分类计数100个白细胞，计算并报告各种白细胞所占比例。

结果记录方式：Ne正一Ly正Mo正Eo正Ba正嗜碱性粒细胞（Ba）：胞浆中含有大小不等的嗜碱性颗粒，瑞氏染色时呈兰黑色。于光学显微镜下常见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易溶于水或因功能活动而脱颗粒所致；核呈淡紫红色常看不清，呈杆状或分叶状。EDTA-K2抗凝全血瑞氏染色原理：瑞氏染料溶于甲醇，离解为带正电的碱性美兰（M+）和带负电的酸性伊红（E-）离子。38ml白细胞稀释液。白细胞稀释液：冰乙酸2.6拔出微量吸管弃入污物桶。（5）调试显微镜将计数板放置载物台上，选择（4×）低倍镜，调节聚光器使光线较暗，调节旋钮找到方格线，转至低倍镜（10×），调节光亮。原理：血液经稀乙酸定量稀释并破坏成熟红细胞，在血细胞计数池内计数规定区域内的白细胞总数，换算成每升血液中白细胞数。EDTA-K2抗凝全血（4）充计数池将小试管轻微振荡2min，立即以一次性微量吸管吸取混匀后的白细胞悬液，充入计数池内。38ml白细胞稀释液。白细胞稀释液：冰乙酸2.嗜酸性粒细胞（Eo）：较中性粒细胞稍大，胞核多为两叶，呈眼镜、八字形，核染色质粗糙染深紫红色，胞浆内充满粗大均匀的嗜酸性颗粒，瑞氏染色时呈桔红色，有折光性。核呈淡紫红色常看不清，呈杆状或分叶状。2轻轻按摩采血部位。2轻轻按摩采血部位。静置2-3min，使细胞沉于计数池底面。细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。5将微量吸管插入小试管底部，三指轻微用力慢慢排出血液，用上清液冲洗管内余血2-3次，轻摇试管混匀；加蒸馏水至100ml（5）调试显微镜将计数板放置载物台上，选择（4×）低倍镜，调节聚光器使光线较暗，调节旋钮找到方格线，转至低倍镜（10×），调节光亮。大方格四边压线细胞数左不数右，数上不数下，=N÷20×109/L（5）调试显微镜将计数板放置载物台上，选择（4×）低倍镜，调节聚光器使光线较暗，调节旋钮找到方格线，转至低倍镜（10×），调节光亮。大淋巴细胞胞浆量较多，呈清澈的淡蓝色，可见少量嗜苯胺蓝颗粒，胞核圆或椭圆，常偏向细胞一侧，染色较深。6用干棉球擦去第一滴血。白细胞总数=4大格白细胞数（N）/4×10×20×10638ml白细胞稀释液。1将带孔乳胶吸头轻轻套在微量吸管上，连接紧密不漏气；=N÷20×109/LLy20%～40%38ml白细胞稀释液。5用无菌刺针穿刺取血，动作应迅速，深度2～3mm，稍加挤压以血液流出为宜。5将微量吸管插入小试管底部，三指轻微用力慢慢排出血液，用上清液冲洗管内余血2-3次，轻摇试管混匀；EDTA-K2抗凝全血1采血部位成人以左手无名指内侧为宜，半岁以下婴幼儿通常自拇指内侧或足跟两侧采血。3将微量吸管插入抗凝血，拇、中指缓慢松劲（松动快血液会吸入吸头），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有气泡），吸管呈水平略下垂，松开示指；分类时要有秩序的连续进行，避免主观选择视野。5将微量吸管插入小试管底部，三指轻微用力慢慢排出血液，用上清液冲洗管内余血2-3次，轻摇试管混匀；白细胞总数=4大格白细胞数（N）/4×10×20×106白细胞总数=4大格白细胞数（N）/4