血液标本采集与血涂片制备

血液标本采集与血涂片制备第一页，共五十五页，编辑于2023年，星期二

患者刘某，男，44岁，身高173cm，体重59kg，患糖尿病5年，入院前口服多种降糖药，血糖控制很不理想，波动较大，电解质常规检查结果如下：

钠135.9mmol/L（135~145）

钾6.5mmol/L（3.5~5.2）

氯105.2mmol/L（96~108）

钙2.31mmol/L（2.20~2.75）临床基础检验学作为检验人员，你准备如何处理这份检验结果？第二页，共五十五页，编辑于2023年，星期二第一章血液标本采集与血涂片制备教学内容血液标本的采集一血液抗凝剂及使用二血涂片的制备技术三血液细胞染色技术四第三页，共五十五页，编辑于2023年，星期二血液学检查：反应造血系统本身、机体全身或局部病变一、血液标本的采集第四页，共五十五页，编辑于2023年，星期二全血血浆血清wholeblood：静脉全血、动脉全血、毛细血管全血。【肘前静脉、腕静脉，小儿颈静脉、股静脉】Plasma：抗凝后去除血细胞后的血液成分。血浆化学成分分析、凝血试验等。serum：血液离体自然凝固后分离出来的液体成分。临床化学和免疫学检测。部分检验项目有时选择特定的血细胞作为标本一、血液标本的采集第五页，共五十五页，编辑于2023年，星期二1.按采血部位分：皮肤采血、静脉采血、动脉采血2.按采血方式分：普通采血法、真空采血法一、血液标本的采集第六页，共五十五页，编辑于2023年，星期二一、血液标本的采集第七页，共五十五页，编辑于2023年，星期二一、血液标本的采集第八页，共五十五页，编辑于2023年，星期二一、血液标本的采集第九页，共五十五页，编辑于2023年，星期二一、血液标本的采集第十页，共五十五页，编辑于2023年，星期二一、血液标本的采集第十一页，共五十五页，编辑于2023年，星期二一、血液标本的采集第十二页，共五十五页，编辑于2023年，星期二一、血液标本的采集第十三页，共五十五页，编辑于2023年，星期二一、血液标本的采集第十四页，共五十五页，编辑于2023年，星期二皮肤采血法skinpunctureforbloodcollection皮肤采血法主要用于微量用血的检查；成人一般选择中指或无名指指尖内测采血；半岁以下婴幼儿可选择足跟进行采血。一、血液标本的采集第十五页，共五十五页，编辑于2023年，星期二一、血液标本的采集第十六页，共五十五页，编辑于2023年，星期二激光采血法：激光发射一束波长为2940nm的单脉冲的激光。细微的光束打在采血者手指的滑囊处，其瞬间温度可达1000℃，作用时间不超过万分之四秒，使得皮肤表皮组织溶解、挥发，出现一个0.4~0.8mm的小孔。

感染机会少、痛感轻、工作强度低皮肤采血法skinpunctureforbloodcollection一、血液标本的采集第十七页，共五十五页，编辑于2023年，星期二一、血液标本的采集第十八页，共五十五页，编辑于2023年，星期二静脉采血法venipunctureforbloodcollection一、血液标本的采集第十九页，共五十五页，编辑于2023年，星期二负压采血法预先添加各种添加剂，满足临床多种实验需要。无菌程度高，血液污染概率小，对检验结果的干扰小。带有分离胶的真空采血管可直接快速分离血清。在实验室间传送方便，能避免对医护人员的感染和患者血标本间的交叉污染。静脉采血法venipunctureforbloodcollection一、血液标本的采集第二十页，共五十五页，编辑于2023年，星期二第二十一页，共五十五页，编辑于2023年，星期二真空采血负压管头盖的颜色及适用范围颜色添加成分用途蓝、黑3.2%枸橼酸钠缓冲剂用于凝血四项及血沉检查绿肝素锂用于生物化学检查红无添加剂用于血清学检验紫乙二胺四乙酸用于白细胞、红细胞、血小板等常规检查黄无添加剂消毒容器用于血培养一、血液标本的采集第二十二页，共五十五页，编辑于2023年，星期二一、血液标本的采集第二十三页，共五十五页，编辑于2023年，星期二静脉采血法venipunctureforbloodcollection一、血液标本的采集第二十四页，共五十五页，编辑于2023年，星期二两种采血方法的优缺点比较毛细血管采血静脉采血缺点标本量少，不能进行重复实验和补充实验；组织液可混入，局部炎症可得假性结果。不同抗凝剂的使用，可能改变血液性质，影响有形成分的形态。优点价廉、快速、操作简便，标本可直接测定标本代表性强，无组织液影响，适于临床研究，可重复实验和追加其他实验一、血液标本的采集第二十五页，共五十五页，编辑于2023年，星期二适用于动脉血血气分析(氧含量，二氧化碳含量，动脉血酸碱平衡等)；穿刺部位：桡动脉、股动脉、肱动脉；注意事项：隔绝空气、立即送检。动脉采血法Arterialpunctureforbloodcollection一、血液标本的采集第二十六页，共五十五页，编辑于2023年，星期二血液标本的处理、运送与保存视每一份标本为无法重复获得、唯一的标本；标本信息的完整性------唯一标识原则；视所有的标本都有传染性------生物安全原则；对标本进行及时处理；不合格血液标本拒收------溶血、凝血标本；血液采集容器不当；采血量不足；标本污染、容器破损。一、血液标本的采集第二十七页，共五十五页，编辑于2023年，星期二患者情况采血时间采血部位溶血情况标本处理结果分析血液采集的质量控制一、血液标本的采集第二十八页，共五十五页，编辑于2023年，星期二检验项目红细胞内浓度与血清的比值1%红细胞溶血引起血清浓度的变化（%）LD160:1+272.5AST40:1+220.0钾23:1+24.4ALT6.7:1+55.0溶血引起血液成分浓度或活性变化一、血液标本的采集第二十九页，共五十五页，编辑于2023年，星期二二、血液抗凝剂及使用血液凝固机制第三十页，共五十五页，编辑于2023年，星期二抗凝原理：螯合钙离子使用方法：EDTAK2·2H2O1.5~2.2mg/ml血液适用范围：对血细胞形态和血小板计数影响小---适合于多项血液学检查；影响血小板聚集---不宜用做凝血象检验及血小板功能检验。乙二胺四乙酸（EDTA）盐二、血液抗凝剂及使用第三十一页，共五十五页，编辑于2023年，星期二常用的有草酸钠、草酸钾和草酸铵。抗凝原理：螯合钙离子，草酸钙沉淀使用方法：0.1mol/L与血液1：9混合

适用范围：止凝血检验,不适合作细胞形态分析的抗凝剂草酸盐二、血液抗凝剂及使用第三十二页，共五十五页，编辑于2023年，星期二抗凝原理：草酸钙沉淀使用方法：草酸钾0.8g＋草酸铵1.2g（100ml）与血液1：10混合（80℃以下烘干）。适用范围：红细胞检验（红细胞比积、计数），不适于血小板计数和白细胞分类计数双草酸盐二、血液抗凝剂及使用第三十三页，共五十五页，编辑于2023年，星期二肝素为一种含硫酸基团的粘多糖；抗凝原理：抑制因子Ⅸa、Ⅷ和PF3之间的作用，加强抗凝血酶Ⅲ灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成，还能抑制凝血酶的自我催化及抑制因子Ⅹ的作用。使用方法：每毫升血液（15±2.5）U肝素二、血液抗凝剂及使用第三十四页，共五十五页，编辑于2023年，星期二优点：抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易溶血、能耐高温。适用范围：红细胞检验（红细胞计数、血红蛋白测定、红细胞比积）和多种生化分析。肝素二、血液抗凝剂及使用第三十五页，共五十五页，编辑于2023年，星期二抗凝原理：螯合钙离子使用方法：109mmol/L浓度与血液1：9混合适用范围：止凝血检验、血沉、输血保养液（毒性弱）枸橼酸钠二、血液抗凝剂及使用第三十六页，共五十五页，编辑于2023年，星期二常用抗凝剂的抗凝原理及优缺点抗凝剂种类抗凝原理优点缺点EDTA与钙离子螯合对血细胞形态和血小板计数影响很少。EDTAK2适合于全血细胞分析和血细胞比容测定不适合于做凝血象检查和血小板功能实验双草酸盐与钙离子螯合草酸铵和草酸钾(钠)适当比例混合后，不影响红细胞形态和大小干扰血浆中的离子和酶的测定肝素阻止凝血酶形成抗凝能力强，适用于红细胞检验和多种生化分析引起白细胞聚集染色时产生蓝色背景枸橼酸盐与钙离子螯合用于红细胞沉降率和凝血功能测定，也可以作为输血保养液成分抗凝力较弱，溶解度较低二、血液抗凝剂及使用第三十七页，共五十五页，编辑于2023年，星期二脱纤维蛋白法：血液注入有玻璃珠的器皿中，转动，纤维蛋白缠绕凝固于玻璃球，从而阻止血凝块形成。适用于免疫学检验和红斑狼疮细胞检查。物理方法抗凝二、血液抗凝剂及使用第三十八页，共五十五页，编辑于2023年，星期二血涂片制备主要用于血液细胞学检查、网织红细胞检查和寄生虫学检查。三、血涂片的制备技术第三十九页，共五十五页，编辑于2023年，星期二三、血涂片的制备三、血涂片的制备技术手工法制备第四十页，共五十五页，编辑于2023年，星期二仪器法制备三、血涂片的制备技术第四十一页，共五十五页，编辑于2023年，星期二厚薄适宜头体尾分明细胞完整边缘整齐质量标准三、血涂片的制备技术第四十二页，共五十五页，编辑于2023年，星期二血涂片质量评价头体尾

分明厚

薄

均

匀长

度

适

中三、血涂片的制备技术第四十三页，共五十五页，编辑于2023年，星期二血涂片观察区域选择三、血涂片的制备技术第四十四页，共五十五页，编辑于2023年，星期二四、血液细胞染色技术经过染色后,血液细胞及其主要结构染上不同的颜色，便于显微镜下观察细胞的内部结构，正确识别各种细胞及其异常变化。第四十五页，共五十五页，编辑于2023年，星期二普通染色细胞化学染色免疫组化染色荧光染色四、血液细胞染色技术第四十六页，共五十五页，编辑于2023年，星期二碱性染料：为阳离子染料，能接受质子,与细胞内酸性成分结合,是染胞核的染料。如亚甲蓝、天青。酸性染料：为阴离子染料，能释放质子。主要有荧烷-氧杂蒽染料和偶氮染料两类，能结合细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白、嗜酸性颗粒成分等。复合染料：同时具有阴、阳离子型的染料如瑞氏染料。染料分类四、血液细胞染色技术第四十七页，共五十五页，编辑于2023年，星期二瑞氏染色瑞氏染液由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝溶解于甲醇而成。酸性染料伊红与血细胞中的碱性物质结合染成红色，如红细胞中的血红蛋白及嗜酸性粒细胞的嗜酸性颗粒。碱性染料亚甲蓝与血细胞中的酸性物质结合染成蓝色，如淋巴细胞及嗜碱性粒细胞的嗜碱性颗粒等。四、血液细胞染色技术第四十八页，共五十五页，编辑于2023年，星期二Wright染液：瑞氏染粉0.1g，甲醇60.0ml；甲醇有强大的脱水力，可将细胞形态固定，并使蛋白质沉淀为颗粒状、网状结构等，增加细胞与染料接触表面积，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。磷酸盐缓冲液（pH6.4～6.8）：维持染色过程的pH值。瑞氏染色四、血液细胞染色技术第四十九页，共五十五页，编辑于2023年，星期二用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。加瑞氏染液覆盖血膜，固定1min。滴加等量或稍多的缓冲液，混匀，染色5-10mins。用清水冲洗，待干后镜检。瑞氏染色四、血液细胞染色技术第五十页，共五十五页，编辑于2023年，星期二影响瑞氏染色效果的一些因素:染料放置时间；溶液的酸碱度；染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关。

瑞氏染色四、血液细胞染色技术第五十一页，共五十五页，编辑于2023年，星期二四、血液细胞染色技术第五十二页，共五十五页，编辑于2023年，星期二基本成