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文档简介

种子生产与经营专业电泳法测定品种纯度的程序电泳法测定品种纯度的程序药品的配制样品提取液凝胶溶液电极缓冲液样品的提取凝胶的制备加样和电泳染色和谱带分析一、药液的配制

不同电泳方法提取液和提取的程序不同，应按具体方法配制提取液和操作。二、样品的提取

不同电泳方法提取液和提取的程序不同，应按具体方法配制提取液和操作。1、清蛋白

能溶于水。包括大多数酶蛋白。通常可用同工酶电泳方法鉴定。

2、球蛋白

难溶于水，能溶于稀盐溶液；玉米盐溶蛋白电泳鉴定方法就是对球蛋白进行鉴定。

3、醇溶蛋白

不溶于水，但能溶于70～80％的乙醇。小麦和大麦种子醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳。

4、谷蛋白

不溶于水、醇，可溶于稀酸、稀碱中。二、样品的提取三、凝胶的制备连续电泳只有分离胶（小麦、大麦PAGE电泳）；不连续电泳有分离胶和浓缩胶（玉米盐溶蛋白电泳鉴定方法）。以TEMED（四甲基乙二胺）为催化剂的凝胶系统，温度低于20℃聚合变慢，可将密封好的玻璃板适当预热至30～35℃。样品梳取出后，将槽内残余的溶液用针管吸出。三、凝胶的制备连续电泳只有分离胶（小麦、大麦PAGE电泳）；不连续电泳有分离胶和浓缩胶（玉米盐溶蛋白电泳鉴定方法）。以TEMED（四甲基乙二胺）为催化剂的凝胶系统，温度低于20℃聚合变慢，可将密封好的玻璃板适当预热至30～35℃。样品梳取出后，将槽内残余的溶液用针管吸出。四、加样和电泳加样量应根据提取液中蛋白质的含量确定，一般10～30μl。四、加样和电泳电泳时一般采用稳压（农业部玉米盐溶蛋白电泳鉴定方法：稳压500V）。一般以凝胶板在电泳时不过热为准。电泳时为了指示电泳的过程，可加入指示剂，根据指示剂移动的速度确定电泳时间。（1）对阳离子电泳系统（pH＜pI时，酸性电泳）：可用甲基绿作指示剂。（2）对阴离子电泳系统（pH＞pI时；碱性电泳）用溴酚蓝作指示剂。五、染色蛋白质目前用得较多的染色液是10％三氯乙酸（可以10～12％）、0.05～0.1％考马斯亮蓝R—250，该染色液染色后一般不需要脱色。六、谱带分析根据蛋白谱带的组成及带型的一致性，区分本品种和异品种。杂种F1表现为双亲共显性：即在父母本中所具有的蛋白质谱带，在F1代种子内同时出现，没有新的谱带产生。（双亲中有差异的蛋白谱带，同时在F1出现，称为互补带）根据互补带的有无区分自交粒和杂交粒。在互补带存在的条件下：六、谱带分析（1）如果同时出现了父母本所没有的谱带，可判为亲本不纯。

（2）如果互补带的二条有其中一条缺失，则为自交粒。

（3）如果整个带型与本品种有很大差异，则为杂粒。注意：电泳测定时，不同混杂率情况下，保证测定结果

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