骨髓增值性疾病相关分子检测

血液肿瘤白血病

造血系统的恶性肿瘤，造血干细胞恶性克隆性疾病。其特征为白血病细胞在骨髓及其他造血组织中呈恶性、无限制地增生，浸润全身各组织和脏器。白血病的发病白血病的分类急性白血病的诊断分型FAB分型（1976）FAB：法国(Franch)美国(American)英国(Britain)以血细胞形态学为基础，专家讨论、制订的关于急性白血病的分型诊断标准。急性白血病的FAB分型急性髓细胞白血病未分化型（M0）急性粒细胞白血病微分化型（M1）急性粒细胞白血病部分分化型（M2，M2b）急性早幼粒细胞白血病（M3/APL）急性粒-单核细胞白血病（M4，M4Eo）急性单核细胞白血病（M5）急性红白血病（M6）急性巨核细胞白血病（M7）急性髓细胞白血病atbgweijiasuan白血病的MIC分型白血病的MICM分型分类方案制定的意义形态学免疫表型遗传改变临床特征疾病分类治疗选择靶向性治疗个体化治疗预后判断骨髓增值性肿瘤相关分子检测WHOMPN类疾病分型MPN辅助诊断相关的分子标志各分子标志检测的原理及意义WHO（2008）MPN分型慢性粒细胞白血病，BCR-ABL阳性（CML）慢性中性粒细胞白血病（CNL）真性红细胞增多症（PV）原发性骨髓纤维化（PMF）原发性血小板增多症（ET）慢性嗜酸性粒细胞白血病，非特殊类型（CEL/HES）肥大细胞增生症皮肤肥大细胞增生症系统性肥大细胞增生症肥大细胞白血病肥大细胞肉瘤皮肤外肥大细胞肿瘤骨髓增殖性肿瘤，无法分类WHOMPN类疾病分型MPN辅助诊断相关的分子标志各分子标志检测的原理及意义2013年之前认识到的不同分子生物标志物在MPN辅助诊断中的运用2013milestone:FromJanuskinase2tocalre.culin:theclinicallyrelevantgenomiclandscapeofmyeloproliferativeneoplasmsCALR基因突变在骨髓增值性疾病中的致病发现CALR基因突变在骨髓增值性疾病中的致病发现CALR基因突变在骨髓增值性疾病中的致病发现MPN可供诊断和鉴别诊断的分子生物标志WHOMPN类疾病分型MPN辅助诊断相关的分子标志各分子标志检测的原理及意义BCR/ABL融合基因费城（Ph）染色体t(9:22)：9号染色体上的ABL基因和22号染色体上的BCR基因异位融合产生融合基因BCR-ABL。BCR/ABL融合基因方法：RQ-PCRCF值：0.74BCR/ABL融合基因定量检测肿瘤减少a≤10%≈1-log≤1%≈2-log≤0.1%IS

≈3-log≤0.0032%IS

≈4.5-log治疗目标196019701980199020002010CHRMCyRMMR白消安羟基脲HSCT干扰素-alfa伊马替尼

（格列卫®）二代

TKIsa与基线水平相比较。白血病负荷MR4.5及更深程度反应更深层分子学反应随着TKI用于治疗，疾病所获得疗效越发深入，要求的检测方法也越发灵敏TKI治疗后第3个月TKI治疗后第6个月TKI治疗后第12个月指南指导的慢粒TKI治疗疗效监测里程碑TKI治疗后第18个月BCR／ABL标准化：尺子能量准尺寸的前提！什么是BCR/ABLIS？BCR-ABLIS的临床意义结果简单、清晰、易懂意义明确国际临床试验的结论来自于BCR-ABLISCML治疗指南的制定基于BCR-ABLIS只有转换为BCR-ABLIS，才能准确评价疗效如何使用IS:IS%ratio=local%ratioxconversionfactor.

CF值：0.74BCR/ABL定量标准化报告示例JAK2MutationsJournalofMolecularDiagnostics,Vol.8,No.4,September2006JAK2基因结构及突变位点MechanismsofDisease,2005;365:1054–61JAK2/V617FMPN患者中JAK2基因c.1849G＞T（V617F）发生率非常高，约95%的PV，以及50%的ET和PMF患者含有该突变。本检测可以用于骨髓增殖性疾病的鉴别诊断，区别反应性血细胞增多以及其它恶性血液疾病JAK2exon12JAK2exon12突变常见于JAK2V617F阴性的PV患者，而在ET和PMF患者中少见。高度怀疑PV的患者，若JAK2V617F检测阴性，则应进行JAK2exon12突变检测JAK2exon12JAK2基因突变检测Taqman探针法测序法MPLMutations

骨髓增殖性疾病患者中除JAK2基因突变外，还可能存在其他导致疾病发生的基因突变。促血小板生成素受体MPL/TPOR是JAK2的同源性受体。在MPL中存在两种获得性突变W515L（TGG→TTG）和W515K（TGG→AAG），MPLW515L/K突变的细胞对非细胞因子依赖性的增殖并对TPO高度敏感，可继发激活JAK2-STAT等信号转导通路.Blood,2006108:3472-3476Leukemia(2008)22,1813–1817Blood,2008112:844-847CALR基因突变检测(ET、PMF)CALR基因在人类基因组学中定位于19p13.2，全长4.2kb，含有9个外显子,转录1.9kb大小的转录本，并表达分子质量大小为48kD钙网织蛋白。钙网蛋白可以作为基因转录的核激素受体的调节中的重要调节因子。CALR基因突变的常见形式CALR突变是MPN特异的重现性分子遗传改变（尤其ET和PMF）CALR突变与另外两个常见的骨髓增殖型疾病的肿瘤基因JAK2和MPLW515L/K相互排斥，CALR突变在PMF或ET的发病机理上有着相对独立的机制或信号同路。

联合JAK2,MPLW515L/K及CALR可将原发性骨髓纤维化／原发性血小板增多症的有效诊断率提高至97%的水平MPN与CALR基因突变CALR的9号外显子上存在36种不同形式插入／缺失突变MayoFoundationforMedicalEducationandResearchMayoClinic的MPN诊断流程修订CSF3R突变与aCML/CNLNEnglJMed.2013May9;368(19):1781-90.PDGFR基因重排FIP1L1-PDGFRa融合基因FIP1L1-PDGFa融合检测ETV6-PDGFRβ融合基