新药研发中药理毒理研究内容和要求专家讲座

新药研发中药理毒理

研究内容与要求西安万隆制药股份有限企业王震-3-26新药研发中药理毒理研究内容和要求第1页

第一章新药评价内容(一)药学研究与评价(二)临床前药理研究(三)临床前毒理学研究(四）临床研究与评价新药研发中药理毒理研究内容和要求第2页(一)药学研究与评价名称结构或组份理化性质原料药生产工艺制剂处方及工艺定性判别含量测定杂质检验原料药和制剂稳定性质量标准草案和起草说明包装材料和容器选择依据及质量标准新药研发中药理毒理研究内容和要求第3页(二)药理研究主要药效学二种模型量效关系指标客观阳性对照空白对照时效关系临床给药路径二种动物体外试验最少重复3次作用机理(全新药)新药研发中药理毒理研究内容和要求第4页(三)毒理学研究普通药理三个剂量临床路径时效改变神经系统心血管系统呼吸系统药代动力学三个剂量二种动物临床路径8～12个采样点药动学基本参数方法学考证分布排泄急性毒性毒性症状LD50，二种动物二种路径长久毒性三个剂量临床路径空白对照，动态观察中毒症状中毒剂量动物选择指标测定二种动物靶器官安全剂量毒性性质病理描述病理照片统计处理毒代动力学三个剂量6-8点主要毒代参数AUCCmaxTmax特殊毒性遗传生殖致癌性局部毒性过敏刺激光毒溶血免疫毒性

(生物制品)依赖性作用于CNS药品新药研发中药理毒理研究内容和要求第5页第二章、毒理学研究

一、毒理学研究意义二、毒理学研究内容及方法三、急性毒性研究四、长久毒性研究五、其它毒性研究六、特殊毒性研究七、毒代动力学研究新药研发中药理毒理研究内容和要求第6页一、毒理学研究意义1、毒理学研究介绍2、创新药品基本要求3、20世纪重大药害事件4、已审批药品副作用与从市场撤出举例5、安全性原因对药品研发影响新药研发中药理毒理研究内容和要求第7页

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致癌性遗传毒性

生殖毒性

局部耐受性、过敏、依赖性、免疫毒性光敏和其它试验等

了解毒性反应剂量、时间、强度、症状、靶器官及可逆性等，为临床方案提供参考、预测出现毒性反应，制订临床防护办法、确保受试者用药安全

毒理学研究局部用药毒性全身用药毒性发觉毒理学普通毒性特殊毒性目标新药研发中药理毒理研究内容和要求第8页2.创新药品基本要求

质控安全有效

药品基本属性（安全性、有效性、稳定性、可控性），在一定意义上，由药品化学结构所决定药品分子设计是实现新药创制主要路径和伎俩稳定新药研发中药理毒理研究内容和要求第9页3、20世纪重大药害事件甘汞：

汞中毒死亡585人醋酸铊：

铊中毒死亡1万人氨基比林：

粒细胞缺乏症死亡2082人磺胺酏：

肝肾损害死亡107人非那西丁：

肾损害、溶血死亡500人碘二乙基锡：神经毒性、脑炎、失明死亡110人反应停：

海豹样畸形儿10000多死亡5000人异丙肾气雾剂：严重心律失常、心衰，死亡3500人氯碘喹啉：

骨髓变性、失明、受害7856人，死亡5%心得宁：

眼-皮肤-粘膜综合征，受害2257人新药研发中药理毒理研究内容和要求第10页4、已审批药品副作用与从市场撤出举例（1990-）年份药品适应症/分类副作用1991Enkald恩卡尼上市４年抗心律失常药品作用于心血管，突然死亡1992Temafloxacin替马沙星抗菌类药肾损伤1998Poslcor(mibefradll)

Duract(bronfenacsodium)降血压药/钙通道抑制剂止痛药致死性相互作用（抑制肝酶）肝损伤1999Tronan严格限制使用RaxarHismanal息斯敏Rotashield抗生素喹诺酮抗生素抗组胺药轮状病毒疫苗肝/肾损伤QT间期延长（致死）药品相互作用肠梗阻RenzulinPropulsidLotonex治疗Ⅱ型糖尿病药烧心过敏性胃肠综合症肝损伤心律不齐/致死缺血性结肠炎Phenylpropanolaminebaychlor调整血脂药降低胆固醇出血性休克横纹肌溶解/致死新药研发中药理毒理研究内容和要求第11页5、安全性原因对药品研发影响药品撤出市场原因总撤出百分率人体药代试验不恰当39临床缺乏疗效30动物毒性试验11人体副作用10经济原因5其它5新药研发中药理毒理研究内容和要求第12页二、毒理学研究内容及方法1、GLP－国际上安全性研究试验室共同遵照规范2、临床前药品安全性评价主要内容3、新药临床前安全性评价利弊权衡4、新药临床安全性再评价目标5、新药临床试验安全性评价不足6、年10大药品不良反应事件回顾7、药品临床安全性再评价主要内容8、新药临床阶段安全性评价利弊权衡9、药品上市后再评价目标10、药品上市后风险主要起源11、药品毒副作用与从市场撤出举例新药研发中药理毒理研究内容和要求第13页1、GLP－国际上安全性研究试验室共同遵照规范

提升药品非临床研究质量；确保试验资料真实性、完整性和可靠性；提升科学数据质量和有效性，促进试验数据国家间相互认可；确保人民用药安全，为人类健康服务。新药研发中药理毒理研究内容和要求第14页2、临床前药品安全性评价主要内容单次给药毒性试验（急性毒性试验）重复给药毒性试验（长久毒性试验）遗传毒性试验生殖毒性试验安全性药理学试验（普通药理学）致癌性试验药品依赖性试验特殊毒性试验（过敏性、局部刺激性、溶血性）等免疫原性试验毒代动力学试验新药研发中药理毒理研究内容和要求第15页临床前研究结果评定：利－是指药效或疗效，弊－是指毒性或毒副作用毒性特点：（主要症状、毒性大小、靶器官、可逆性）安全范围：（LD50/ED50、LOAEL、NOAEL）LOAEL(lowest-observed-adverse-effect-level)出现副反应最小剂量NOAEL（NoObservedAdverseEffectLevel）无可见有害作用水平同类药比较：了解程度及优势（有效性和安全性）适应症背景：治疗谱、毒性大小（安全范围）、性质和早期可预测性人体相关性：注意量化（毒代暴露量）利弊权衡－是一个综合性评价过程（系统工程）3、新药临床前安全性评价利弊权衡新药研发中药理毒理研究内容和要求第16页4、新药临床安全性再评价目标临床前研究结果并不能完全推测临床研究结果，动物模型也不能完全复制出人体发生疾病。临床中存在联适用药产生药品相互作用问题。药品在临床使用中发觉毒副作用，需进行毒性机制研究寻找解毒药品。部分试验能够在药品进行临床研究中才开始进行。临床研究中有时会出现药品引发特异质毒性反应。特需药品免做临床前安全性评价研究药品。新药研发中药理毒理研究内容和要求第17页药品上市前动物毒性研究不足药品上市前人体临床试验伦理范围不足药品上市前人体临床试验科学性研究不足统计发觉，在全部药品临床试验与应用中，不良反应种类出现概率是：在普通动物毒性试验中只占３５％左右；在Ⅰ期人体耐受试验中只有２０％；在Ⅱ、Ⅲ期临床试验出现率是３５％；在Ⅳ期临床试验时出现７０％；到市场销售时全部副作用才陆续出现。

5、新药临床试验安全性评价不足

新药研发中药理毒理研究内容和要求第18页6、年10大药品不良反应事件回顾头孢曲松钠安全使用问题（与钙使用，婴儿死亡）静脉输注人免疫球蛋白引发丙肝抗体阳性率增加甲磺酸培高利特撤市（心脏瓣膜病）

马来酸替加色罗撤市(心肌梗死、脑卒中）含钆造影剂安全问题（肾源性纤维化病）罗格列酮安全性受质疑（心梗和心源性死亡）注射用甲氨蝶呤、阿糖胞苷中混入长春新碱（N受损）感冒药禁用于2岁或以下儿童（死亡）哺乳妇女服用可待因可能造成婴儿发生严重不良反应硫酸普罗宁与胸腺肽注射剂可引发严重不良反应

新药研发中药理毒理研究内容和要求第19页7、药品临床安全性再评价主要内容药品毒性作用靶器官、药品毒性作用模型研究处理因为模型不适当而发生不良反应，重新设计动物模型评价药品毒性作用药品毒性作用机制

处理小概率毒性作用药品不良反应，评价没有动物模型不良反应药品毒性作用联适用药作用机制筛选研究处理临床上因为联适用药而发生不良反应依据新药特点，可在临床阶段提供新药安全性资料

致突变试验、致癌性试验和III段生殖试验，普通可以在申报NDA时提供其研究资料

新药研发中药理毒理研究内容和要求第20页8、新药临床阶段安全性评价利弊权衡评定临床已出现毒性，和毒性特点以及监测、防治办法。确定深入临床和剂量选择方案提供主要信息。综合相关信息进行利弊权衡，判断能否向临床推进。依据毒理结果调整临床适应症范围、适应人群或给药方案综合比较新药与已上市药品之间毒副作用与安全性之间关系，分析与判断该新药上市可能性。新药研发中药理毒理研究内容和要求第21页9、药品上市后再评价目标新药上市前安全性评价不足病例太少、研究时间太短、试验对象年纪范围太窄、用药对象条件控制太严药品副反应与安全性关系

副作用、变态反应、特异质反应、药品依赖性、致癌、致突变、致畸作用老药毒、副作用研发成新药可能性

反应停、长春新碱、阿托品、阿斯匹林、雌激素药品再评价与药品命运关系

限制与撤出使用、医疗事故判断依据新药研发中药理毒理研究内容和要求第22页10.药品上市后风险主要起源已知风险可防止无法防止药品缺点仿冒制品可预防AEs损伤或死亡其它不确定原因潜在、未知风险缺失信息，如人种、年纪、性别、药品与药品之间、药品与疾病之间相互作用等。不一样问题，应给予对应处理方法－上市后监测与安全性再评价用药错误新药研发中药理毒理研究内容和要求第23页11.药品毒副作用与从市场撤出举例（1990-）年份药物适应症/分类副作用1991Enkald恩卡尼上市４年抗心律失常药品作用于心血管，突然死亡1992Temafloxacin替马沙星抗菌类药肾损伤1998Poslcor(mibefradll)

Duract(bronfenacsodium)

降血压药/钙通道抑制剂止痛药致死性相互作用（抑制肝酶）肝损伤1999Tronan严格限制使用Raxar格帕沙星(Grepafloxacin)

Hismanal息斯敏Rotashield轮状病毒疫苗

抗生素喹诺酮抗生素抗组胺药轮状病毒疫苗肝/肾损伤QT间期延长（致死）药品相互作用肠梗阻RenzulinPropulsidLotonex治疗Ⅱ型糖尿病药烧心过敏性胃肠综合症肝损伤心律不齐/致死缺血性结肠炎Phenylpropanolaminebaychlor调整血脂药降低胆固醇出血性休克横纹肌溶解/致死新药研发中药理毒理研究内容和要求第24页12.非临床安全性评价基本标准

把握药理毒理评价系统性充分暴露毒性详细问题详细分析执行GLP（药品非临床研究质量管理规范）新药研发中药理毒理研究内容和要求第25页13.非临床安全性评价全过程

质量管理GRP-GoodReviewingPracticeGSP-GoodSupplyPracticeGUP-GoodUsingPracticeGSSP-GoodStorageAndShippingPracticeGMP-GoodManufacturingPracticeGLP-GoodLaborataryPracticeGCP-GoodClinicalPractice药品相关GXP管理GCP/GLP药品研制药品生产GMPGSP药品流通GUP药品使用药品审评GRP药品储存GSSP新药研发中药理毒理研究内容和要求第26页14、药品安全性评价最终目标－为临床服务初步目标–

毒理试验本身（试验评价）1.毒性反应（定性和定量）剂量、时间、程度、症状、性质、靶器官以及损伤可逆性2.安全剂量及安全范围最终目标—向临床过渡（综合评价）申报临床：1.预测人临床用药时可能毒性，以制订监测、防治办法2.推算临床研究安全参考剂量和安全范围，进行利弊权衡申报生产：3.为说明书提供信息--尤其是那些无法在人体试验动物结果，限制用药人群，帮助利弊权衡。新药研发中药理毒理研究内容和要求第27页21/24/26号:过敏性（局部、全身和光敏毒性）、／溶血性和局部（血管、皮肤、粘膜、肌肉等）刺激性等主要与局部、全身给药相关特殊安全性试验研究和文件资料22//27号:复方制剂中各种成/组份药效、毒性、药代动力学相互影响试验资料及文件资料23/25/22号:致突变试验资料及文件资料24/26/23号:生殖毒性试验资料及文件资料25/27/24号:致癌试验资料及文件资料26//28号:依赖性试验资料及文件资料27/28/21号:动物药代动力学试验资料及文件资料15、各类新药申报资料普通要求新药研发中药理毒理研究内容和要求第28页16、《药品注册管理方法》药品注册药理毒理申报资料药理毒理研究资料综述主要药效学试验资料及文件资料普通药理学试验资料及文件资料－（ＧＬＰ）急性毒性试验资料及文件资料－（ＧＬＰ）长久毒性试验资料及文件资料－（ＧＬＰ）过敏性（局部、全身、和光敏毒性）、溶血性和局部（血管、皮肤、粘膜、肌肉等）刺激性等特殊安全性试验资料和文件资料－（ＧＬＰ）复方制剂中各种成份药效、毒性、药代动力学相互影响试验资料和文件资料致突变试验资料及文件资料－（ＧＬＰ）生殖毒性试验资料及文件资料－（ＧＬＰ）致癌试验资料及文件资料－（ＧＬＰ）依赖性试验资料及文件资料－（ＧＬＰ）非临床药代动力学试验资料及文件资料－（ＧＬＰ）新药研发中药理毒理研究内容和要求第29页

17.临床前安全性评价

与临床差异

研究方案/种属动物人体个体数量大量个体个体年纪青年各个年纪段个体健康情况健康不定个体遗传背景同源异源给药剂量从治疗量到中毒量治疗量给药时间通常每日一次依据治疗需要居住条件统一，最正确不定营养统一，最正确不定辅助治疗无经常语言交流无广泛病理组织学全方面特例新药研发中药理毒理研究内容和要求第30页

18、长久毒性试验给药期限药品临床疗程长久毒性试验给药期限能够支持临床研究阶段啮齿类动物非啮齿类动物单次给药2周2周Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期≤2周1个月1个月Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期>2周*1个月1个月Ⅰ期≤1个月1个月1个月Ⅱ期3个月3个月Ⅲ期≤3个月3个月3个月Ⅱ期6个月6个月Ⅲ期≤6个月6个月6个月Ⅱ期6个月9个月Ⅲ期>6个月6个月9个月Ⅱ期6个月9个月Ⅲ期新药研发中药理毒理研究内容和要求第31页19.安评资料审评中主要问题

（一）受试物（二）试验动物（三）给药路径（四）给药频率（五）给药期限（六）给药剂量（七）观察指标（八）观察指标时间和次数（九）结果及分析（十）综合评价新药研发中药理毒理研究内容和要求第32页

急性（单次给药）毒性长久（重复给药）毒性致突变（遗传毒性）生殖毒性致癌性免疫原性依赖性毒代动力学其它毒性（过敏性、溶血性、光毒性、免疫毒性、药品依赖性等试验）20、药品安全性评价研究范围新药研发中药理毒理研究内容和要求第33页

受试药品化学药品：原料、制剂生物制品：制剂中药：原料、制剂、浸膏试验动物

动物同药效试验啮齿类和非啮齿类两种，如大鼠、犬或猴等。理由充分，一个相关动物21.药品非临床研究-共性问题新药研发中药理毒理研究内容和要求第34页22.临床前毒理学评价总要求找出毒性剂量Toxicdosage确定安全剂量范围

Safetymargin

毒性反应Toxicreaction:性质、程度、量毒关系、产生时间，达峰时间,连续时间及重复产生毒性反应时间、迟发性、蓄积性、耐受性

寻找毒性反应靶器官TargetOrgan

毒性反应是否可逆Reversibility确保临床用药安全新药研发中药理毒理研究内容和要求第35页（一）试验要求（二）目标意义（三）基本内容和要求（四）急性毒性LD50惯用计算方法（五）相关问题三、急性毒性试验新药研发中药理毒理研究内容和要求第36页（一）试验要求试验动物啮齿类----小鼠或大鼠非啮齿类----犬或其它一类药最少必须用二种动物(啮齿类及非啮齿类各一个,其中非啮齿类宜用Beagle犬);其它类酌情用二种动物小鼠18-22g,同次体重相差不超出4g;大鼠120-150g,同次体重不超出20g;犬用成年犬♀♂各半

新药研发中药理毒理研究内容和要求第37页（二）急性毒性试验目标意义1、了解新药急性毒性强度2、计算新药相对毒性参数3、为临床毒副反应监护提供参考依据4、为长久毒性、蓄积性毒性提供依据5、为特殊毒性试验选择剂量提供依据6、其它方面新药研发中药理毒理研究内容和要求第38页1、新药急性毒性强度

表.化学物质急性毒性分级标准(WHO,1977)━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━毒性分级ig大、小鼠LD50吸入大、小鼠LC50涂皮兔LD50人口服可能

(mg/kg)(ppm)(mg/kg)致死量(g)━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━极毒<1<10<50.06剧毒1-5010-1005-444中等毒51-500101-100045-35030低毒501-50001001-10000351-2180250实际无毒>5000>10000>2180>1200━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━*吸入毒性LC50指中毒栏中浓度,一次中毒2-4小时,观察24天

新药研发中药理毒理研究内容和要求第39页新药急性毒性强度

表.欧共体对化学物毒性分级━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━动物及给药路径剧毒毒有害━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━大鼠LD50ig(mg/kg)≤2525-200200-大鼠或兔经皮LD50(mg/kg)≤5050-400400-大鼠LC50(mg/L/4h≤0.50.2-22-20━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━

新药研发中药理毒理研究内容和要求第40页2、相对毒性参数治疗指数TI=LD50/ED50安全系数SF=LD5/ED95可靠或确实安全系数CSF=LD1/ED99安全范围SM=(LD1/ED99-1)X100%SED50/ED50,越大越安全LD5基本无害量ED95基本有效量LD1必定无害量

ED99必定有效量新药研发中药理毒理研究内容和要求第41页3.为临床毒副反应监护提供参考中毒症状起始时间连续时间恢复时间反抗试验为临床抢救提供依据新药研发中药理毒理研究内容和要求第42页急性毒性试验观察动物反应指标中毒部位毒性症状表现中枢神经系统呆滞:对刺激反应迟缓、减弱、消失；不安：对刺激反应过敏、兴奋；强直：行动姿势改变、叫声异常、震颤、共济失调植物神经系统瞳孔缩小、放大;分泌增多，如流涎、流泪呼吸系统鼻孔流鼻涕、呼吸迟缓、困难、潮式呼吸、速率加紧等心血管系统心动过速、迟缓、心律不齐、心跳过强、微弱胃肠系统胀、腹泻、便秘、粪便不成形、粪便黑色生殖系统乳腺膨胀、会阴部污浊、阴囊下垂等皮肤、毛皮肤发红、松弛、皮疹、毛竖起粘膜口腔流粘液、充血、溃疡、出血性紫绀眼睛上睑下垂、眼球突出混浊其他直肠温度升高、降低；消瘦；拒食等新药研发中药理毒理研究内容和要求第43页4、为长毒、蓄毒试验

选择剂量提供依据长久毒性剂量设计LD50法(1/10,1/50,1/100)MTD法(1,1/3,1/10)蓄积性毒性剂量设计1/10LD50,然后按等比级数1.5倍逐步递增新药研发中药理毒理研究内容和要求第44页5、为特殊毒性试验选择剂量提供依据生殖毒性试验高剂量为母鼠MTD致突变试验啮齿类动物微核试验高剂量为1/2LD50果蝇伴性隐性致死试验高、低剂量分别为1/2LD50和1/4LD50精原细胞染色体畸变试验高剂量应为1/2LD50

动物短期致癌试验高剂量应是MTD主要药效学剂量程度、普通药理学和药动学剂量设计也要参考急性毒性LD50新药研发中药理毒理研究内容和要求第45页6、其它方面系列化合物合格率分析(除理化性质为主外)也参考LD50复方中药品相互作用,有时也经过拆方及适用LD50来判别相互作用性质新药研发中药理毒理研究内容和要求第46页四、长久毒性试验（一）目标意义（二）基本内容和要求

1、LD50试验

2、最大耐受量试验

3、最大给药量试验

4、限量试验（三）长久毒性研究目标（四）试验方案设计

1-基本标准

2-试验动物

3-给药方案新药研发中药理毒理研究内容和要求第47页（一）目标意义毒性剂量Toxicdosage安全范围Safetymargin毒性反应Toxicreaction:性质、程度、量毒关系、产生时间，达峰时间,连续时间及重复产生毒性反应时间、迟发性、蓄积性、耐受性

毒性反应靶器官Targetorgan

毒性反应是否可逆Reversibility新药研发中药理毒理研究内容和要求第48页1-LD50试验指动物单次给药后引发50％动物死亡剂量。LD50值意义是：LD50越小表示药品急性毒性越大。动物：小鼠、大鼠等动物与分组：普通5组；每组10只雌、雄各半。试验前禁食给药路径：临床给药路径观察14天，进行大致解剖观察，如有改变-病理检验（二）基本内容和要求新药研发中药理毒理研究内容和要求第49页2-最大耐受量试验

（MTD--Maximum-ToleratedDose

）指动物单次大剂量给药或在24小时内接收屡次大剂量受试药品后，动物在短期内出现与药品相关毒性反应，不过又不引发动物死亡最大剂量动物：小鼠、大鼠、犬等动物数：小动物20只；大动物4只雌、雄各半。试验前动物应注意禁食给药路径：临床给药路径观察14天，进行大致解剖观察，如有改变-病理检验（二）基本内容和要求新药研发中药理毒理研究内容和要求第50页

该试验多用于中药和毒性较小其它药品研究指药品以最高浓度和最大容积给药，剂量可能并未到达最大耐受剂量，所以该剂量被称为最大给药量。详细要求可参考最大耐受量试验。

低毒药品，口服给药：5g（或ml）/kg

动物数普通≥5只，大鼠禁食一夜，小鼠禁食4－6小时，观察14天，如无死亡，则无必要进行更高剂量如动物在5g/kg出现死亡，可选择较低剂量3、最大给药量试验4、限量试验（二）基本内容和要求新药研发中药理毒理研究内容和要求第51页观察动物在给予超出临床剂量（数倍或数十倍）和用药周期（3-4倍以上）情况下所出现毒性反应设法发觉引发毒性反应剂量、剂量与毒性之间关系、中毒表现和程度、主要毒性靶器官或组织及可逆程度等预测临床研究阶段可能安全范围和毒性，预先制订防治办法或防止一些有特殊疾病患者使用，降低临床可能风险为临床试验初始剂量和指标选择等提供主要参数（三）长久毒性研究目标新药研发中药理毒理研究内容和要求第52页通常长毒始于主要药效、安全药理、单次给药毒性、初步药代动力学（假如已经可取得）等试验之后有些药品侧重比较毒理学研究，如新剂型、改变酸根或碱基、改变给药路径等。（四）试验方案设计-基本标准新药研发中药理毒理研究内容和要求第53页l

动物种类

常用大鼠和犬或敏感动物。创新药普通2种以上，雌雄各半。生物制品多用大鼠和猴（种属特异性可特殊）

动物年纪与数量

大鼠试验3月内：6-8周龄；>3月：5-6周龄犬：普通选取性成熟，6-10月；猴：3.5-4.5年依据试验周期长短确定每组动物数。标准：试验结束时小动物每组动物数应满足统计学要求；大动物数应满足毒理学评价要求；普通大鼠为10-30只，雌雄各半；犬、猴最少雌、雄各3只；毒性大、周期长数量应增加，考虑恢复期数量。（四）试验方案设计—试验动物新药研发中药理毒理研究内容和要求第54页给药时间临床给药周期3-4倍。重复、长久或植入药，按最长给药时间，即啮齿-6月；非啮齿-9月周期短-天天给药；>1个月-6天/周

-天天给药时间应一致

-确保动物摄入量准确性中药如给药体积大，可将药品分成2次/日

-不提倡采取掺食给药，除非有稳定性、均一性（四）试验方案设计—给药方案新药研发中药理毒理研究内容和要求第55页给药剂量普通3个给药剂量组高剂量-动物应出现毒性和个别死亡（<20%）低剂量-等于或略高于有效剂量，无毒性中剂量-介于以上二者之间，轻微毒性或者按急毒结果：

LD50法(1/10,1/50,1/100)MTD法(1,1/3,1/10)（四）试验方案设计—给药方案新药研发中药理毒理研究内容和要求第56页对照组设置

-通常给药组和对照组动物数应基本相等

-对照组可依据试验方案详细要求和研究目标设置阴性对照组、溶媒对照组观察指标全方面、针对特点普通体征、饮食、体重改变；血尿常规、血液及血液生化指标、心电图，脏器/体重系数、主要组织器官肉眼和病理组织学观察、死亡情况。应统计毒性症状出现、减轻或消失时间。体重和进食量每七天测1-2次。周期>3月，1/3动物检验中期主要指标；如发觉异常可适当增加检验次数。（四）试验方案设计—给药方案新药研发中药理毒理研究内容和要求第57页五、其它毒性研究1、致突变性试验2、生殖毒性试验3、致癌性试验4、皮肤给药急性毒性试验5、皮肤给药长久毒性试验6、皮肤刺激试验7、皮肤过敏试验8、光敏试验9、眼刺激试验10、滴鼻剂和吸入剂急性毒性试验11、直肠、阴道用药急毒试验12、直肠、阴道用药刺激试验13、身体依赖性试验-自然戒断试验14、身体依赖性试验--替换试验15、身体依赖性试验--催促试验16、身体依赖性试验--诱导试验17、精神依赖性试验新药研发中药理毒理研究内容和要求第58页

当前建立遗传毒性试验是研究机体遗传物质受外源性化学物质或其它环境原因作用时对有机体产生遗传毒性作用。遗传毒性试验包含体外和体内检测系统。二者应结合进行研究。体外检测系统包含细菌回复突变、微核试验、哺乳动物细胞染色体畸变等；体内试验包含骨髓微核试验、显性致死试验等。一类药需要提供试验资料1、致突变性试验（遗传毒性）新药研发中药理毒理研究内容和要求第59页

概念评价药品对哺乳动物生殖影响，推测对人可能生殖毒性研究分为三段

I段（普通生殖毒性）：是评价对成年动物生育力和早期胚胎发育影响，评价药品对配子成熟，交配行为、受孕、胚胎着床前和着床影响

II段（致畸敏感期毒性）：即妊娠动物在胚胎器官形成期给药，评价药品对亲体、胚胎、胎仔发育影响

III段（围产期毒性）：在妊娠动物分娩前后给药，评价胎仔出生前后发育和孕鼠从妊娠后期至断奶期间给药对妊娠、分娩、哺乳、胚胎、胎仔发育影响。依据临床用药次数、适应证和拟用人群决定是否进行该试验创新药，普通可在申报临床研究前先提供II段试验对于可能只给一次或终生一次（如诊疗或外科手术）药，重复给药研究可能是无须要。在较高剂量下，缩短处理期似乎更适当。2、生殖毒性试验新药研发中药理毒理研究内容和要求第60页致癌试验检测受试药品对动物潜在致瘤性药品是否进行该试验应在取得一定相关信息后才能确定人群最长用药时间及遗传毒理学、重复给药毒性等相关结果重复给药毒性试验可能显示受试药品含有免疫抑制特征、激素活性或考虑对人类是一个危险因子时，都应慎重考虑进行相关致癌试验。如：-药品拟用于非肿瘤病人辅助治疗或非癌症疾病重复给药使用

-临床连续给药时间大于6个月应进行该试验

-治疗慢性和复发性疾病而经常间断使用药品

-有明确遗传毒性化合物；

-其构效关系提醒有潜在致癌性药品

-在连续重复给药毒性试验中有癌前期病变证据

-重复给药滞留母体化合物或其代谢产物造成局部组织或病生理改变

-较长时间接触药品，如迟缓释放药品也应考虑进行该试验

-内源性肽类、蛋白质是否需要进行该研究需作特殊考虑-超生理水平3-1、致癌性试验新药研发中药理毒理研究内容和要求第61页

以下情况进行致癌试验尤为主要：1）产生生物学作用与天然产物显著不一样；2）因为修饰造成产品结构与天然产物相比有显著不一样；3）在人体局部或全身浓度（即药理学水平）显著增加。对于抗肿瘤药品是否进行该试验，可考虑以下原因：

-假如用药人群生存期较短（2－3年），则不要求

-如用于晚期全身治疗抗肿瘤药品普通不需要进行，但当该药品疗效很好，能显著延长生命时，应考虑相关继发性肿瘤问题，应进行致癌性研究3-2、致癌性试验新药研发中药理毒理研究内容和要求第62页目标:观察短期接触受试物后皮肤毒性反应动物:家兔、豚鼠或大鼠，♀♂各半，家兔体重２kg,豚鼠300g,大鼠200g左右,给药前24h将动物背部脊柱两侧毛脱掉,去毛范围约相当于体表面积10%左右,(家兔约150cm2左右,豚鼠、大鼠约40cm2左右）药品：膏剂、液体或粉末。粉末需用赋形剂（如羊毛脂、凡士林等）混匀，以确保受试物与皮肤有良好接触剂量：3个，组距0.65－0.85。家兔每组４只，豚鼠或大鼠每组10只并设赋形剂或空白对照组方法：将受试物均匀涂敷于脱毛区，破损皮肤则在脱毛区划破皮肤后再涂敷受试物。24h后去除，每日观察，连续7-14天。观察动物体重、皮肤、毛发、眼睛和粘膜改变，呼吸、循环、中枢神经系统、四肢活动等改变。若有死亡则进行尸检，当有肉眼可见病变，则需进行病检判断：试验结果与对照组比较判断4、皮肤给药急性毒性试验

新药研发中药理毒理研究内容和要求第63页5.皮肤给药长久毒性试验目标：观察经皮渗透产生异常反应和可逆程度，找到靶器官动物：家兔(2kg,6只/组)，豚鼠(300g，10只/组)或大鼠(200g，10只/组)，♀♂各半。给药前24h动物背部脊柱两侧脱毛，面积同急毒受试物：同急性毒性试验剂量：３个，要求同大鼠口服长毒试验，并设赋形剂或空白对照组，若用受试物剂量超出有效浓度20倍以上，仍未见动物有不良反应或死亡时，则只须设一个高剂量组方法：受试物均匀涂敷,每次最少接触６h，临床用药疗程３倍以上时间连续给药。部分动物应于停药后继续观察１-２周，检测指标：除每日观察皮肤、临床改变及皮肤病理学检验外，其血液学、血液生化指标和病理学检验项目同大鼠长久毒性试验要求判断：试验结果应写明安全剂量、中毒剂量、中毒表现、中毒靶器官及中毒可逆程度等新药研发中药理毒理研究内容和要求第64页6、皮肤刺激试验目标：观察刺激反应情况动物：首选家兔(2kg左右)，其次为豚鼠(300g左右)。药前24h脱毛，家兔每侧脱约50cm2，豚鼠每侧脱约20cm2受试物：同急性毒性试验方法：≥３只家兔或５只豚鼠，在受试物区、对照区和破损皮肤区（脱毛后），一次或屡次将受试物１ml或1g涂于受试物区，赋形剂则涂于对照区。24h后去除。观察1、24、48和72h涂抹部位有没有红斑和水肿等，改变恢复情况和时间屡次给药则每日涂抹一次，连续一周，其余均与一次给受试物方法和要求一致结果评价：每只动物试验结果进行刺激反应评分，计算出平均分值进行刺激强度评价新药研发中药理毒理研究内容和要求第65页皮肤刺激反应评分━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━

刺激反应分值━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━红斑:

无红斑0

勉强可见1

中度红斑2

严重红斑3

紫红色红斑并有焦痂形成4水肿:

无水肿0

勉强可见1

皮肤隆起轮廓清楚2

水肿隆起约1mm并范围扩大4━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━新药研发中药理毒理研究内容和要求第66页皮肤刺激强度评价━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━

强度分值━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━无刺激性<0.5

轻度刺激性<2.0

中度刺激性<6.0

强度刺激性>6.0━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━新药研发中药理毒理研究内容和要求第67页7、皮肤过敏试验目标:观察免疫系统反应在皮肤上表现动物：豚鼠♀♂各半(250-300g)。给药前24h背部两侧脱毛，脱毛区每侧约3x3cm2受试物：若受试物是膏剂或液体，直接试验。若为固体粉末，则用水或赋形剂（如羊毛脂、凡士林、橄榄油等）混匀阳性致敏物：2,4-二硝基氯代苯配成1%致敏浓度和0.1%激发浓度方法：分受试物组，空白对照组，阳性对照组，每组10只（♀♂各半）1.致敏接触：将受试物0.1-0.2ml(ｇ)涂在左侧脱毛区，连续6h。第７天和第14天，同法各重复一次2.激发接触：末次致敏后14天，将受试物0.1-0.2ml(ｇ)涂于右侧脱毛区，阳性对照用0.1%2,4—二硝基氯代苯，６h后去除，即刻观察，然后于24、48、72h再次观察过敏反应情况结果评价：结果按皮肤反应评分标准评分，依据试验组与对照组豚鼠皮肤反应差异，判断受试物对皮肤过敏反应性质可用致敏率(红斑或水肿动物例数/受试动物总数)判断致敏强度新药研发中药理毒理研究内容和要求第68页皮肤过敏反应评分标准

皮肤反应分值红斑形成：无红斑０轻度红斑１中度红斑２重度红斑３水肿性红斑４水肿形成：无水肿０轻度水肿１中度水肿２重度水肿３新药研发中药理毒理研究内容和要求第69页致敏率分类━━━━━━━━━━━━━━━━━

致敏率（%）反应强度━━━━━━━━━━━━━━━━━０－10弱致敏性性

20－30轻度致敏性

40－60中度致敏性

70－80高度致敏性

90－100极度致敏性━━━━━━━━━━━━━━新药研发中药理毒理研究内容和要求第70页8、光敏试验有些受试物皮肤涂抹后遇光照可引发光敏反应若其化学结构或一些组成（包含药品和赋形剂）文件报导有光敏作用者应作光敏试验其化学结构和已知光敏剂相同者也应做光敏试验新药研发中药理毒理研究内容和要求第71页皮肤给药毒性试验相关问题设置赋形剂对照组，赋形剂各种指标、规格等均应符合药用规格受损皮肤用药，急毒、长毒等毒性试验也宜以模拟破损皮肤进行高剂量符合制剂工艺要求，以剂型允许配制浓度和允许给药容量给药。不能将外用药厚厚地涂在皮肤上新药研发中药理毒理研究内容和要求第72页9眼刺激试验目标：观察眼睛接触受试物后产生刺激反应动物：家兔≥４只，体重2－3kg受试物：液体或膏剂均可直接滴入或涂敷剂量：用原液或原膏剂，无须稀释，每只眼睛滴入0.1ml或涂敷0.1g以内方法：滴入或涂敷于动物一侧眼结膜囊内，另一侧作为空白（或赋形剂）对照。给药后使眼睛被动闭合5－10分。统计给药后6、24、48、72h至7天眼局部反应情况临床用药超出一周受试物要进行屡次给药刺激试验，连续给药一周以上结果评价：将每只动物眼角膜、虹膜和结膜刺激反应分值相加，即是一只受试动物眼刺激反应总积分。把每个受试动物刺激反应积分总和除以动物数，就是该受试物对眼刺激性最终分值，以此判定受试物刺激程度新药研发中药理毒理研究内容和要求第73页9眼刺激试验

眼刺激试验--角膜评分无混浊０散在或弥漫性混浊，虹膜清楚可见1

半透明区易分辨，虹膜含糊不清2

出现灰白色半透明区，虹膜细节不清，瞳孔大小勉强看清3

角膜不透明，因为混浊，虹膜无法识别4眼刺激试验--虹膜评分正常０皱褶显著加深，充血，肿胀，角膜周围轻度充血，瞳孔对光仍有反应１出血，肉眼可见坏死，对光无反应（或出现其中一个反应）２新药研发中药理毒理研究内容和要求第74页眼刺激试验--结膜评分Ａ.充血（指睑结膜、球结膜部位）血管正常０血管充血呈鲜红色１血管充血呈深红色，血管不易分辨弥漫性充血呈紫红色３Ｂ.水肿无水肿０轻微水肿（包含瞬膜）１显著水肿，伴有部分眼睑外翻水肿至眼睑近半闭合３水肿至眼睑超半闭合４Ｃ.分泌物无分泌物０少许分泌物１分泌物使眼睑和睫毛潮湿或粘着２分泌物使整个眼区潮湿或粘着３新药研发中药理毒理研究内容和要求第75页眼刺激试验--结膜评分眼刺激性评━━━━━━━━━━━━━━━━刺激程度积分━━━━━━━━━━━━━━━━无刺激性０～３轻度刺激性４～８中度刺激性９～１２强度刺激性１３～１６━━━━━━━━━━━━━━━新药研发中药理毒理研究内容和要求第76页10.滴鼻剂和吸入剂急性毒性试验目标：观察一次滴入或吸入后所产生毒性反应和死亡情况动物：大鼠、豚鼠或家兔。♀♂各半，大鼠、豚鼠体重在250-300g、家兔在2.5kg左右受试物：液体或粉末剂剂量：３个剂量，组距0.65-0.85为宜。设赋形剂或空白对照组。若大剂量组（超出临床预计用量50倍以上）未出现死亡情况时，则只须设一个高剂量组方法：大鼠或豚鼠每组10只，家兔每组４只，♀♂各半。滴入或吸入药后，最少接触４小时，给药后即刻观察及7-14天观察动物全身情况、体重、呼吸、循环、中枢神经系统、四肢活动等改变，若出现死亡则病检结果判断：试验结果与对照组比较。如能测出LD50值则按急性毒性试验要求计算新药研发中药理毒理研究内容和要求第77页11.直肠、阴道用药急毒试验目标：观察直肠或阴道一次接触受试物后，由吸敷所产生毒性反应和死亡情况受试物：栓剂、液体或膏剂。剂量：３个，组距0.65-0.85，须设赋形剂或空白对照组方法：家兔每组４只，大鼠每组10只。将受试物置入≥４h。即刻观察7-14天，观察全身情况，体重、呼吸、循环、中枢神经系统、四肢活动等改变。若出现死亡时应做病检结果判断：与对照组比较判断。必要时算LD50目标：观察直肠、阴道刺激反应动物：同上述急性毒性试验受试物：栓剂、液体或膏剂分组：给药组、赋形剂组和空白对照组。每组家兔４只，大鼠６只方法：受试物置入≥４h，24h后处死动物。取出局部直肠或阴道组织。观察有没有充血、红肿等现象，若有改变需进行病检新药研发中药理毒理研究内容和要求第78页12.直肠、阴道用药刺激试验目标：观察直肠、阴道刺激反应动物：同上述急性毒性试验受试物：栓剂、液体或膏剂分组：给药组、赋形剂组和空白对照组。每组家兔４只，大鼠６只方法：受试物置入≥４h，24h后处死动物。取出局部直肠或阴道组织。观察有没有充血、红肿等现象，若有改变需进行病检屡次给受试物则普通每日一次，连续７天，于末次给药后24h处死动物并观察结果判断：试验结果与对照组比较判断腔道用药毒性试验要尤其注意既要符合剂型要求，又要考虑腔道可给容量新药研发中药理毒理研究内容和要求第79页13.身体依赖性试验-自然戒断试验------连续给药后突然停药，观察戒断症状，与同类代表药作对比，判断受试药依赖性潜力-----动物：小、大鼠和猴。小鼠体重20-24g，每组≥20只，大鼠体重180-220g，每组≥10只,猴体重3-5kg，每组3～5只，♂♀各半------剂量：2～3，须设赋形剂对照和阳性药对照(吗啡，苯巴比妥或巴比妥)。低剂量用ACD；高剂量组依赖性潜力低药品应选取靠近毒性反应剂量，毒性低药品选取MTD。药品可采取恒量或剂量递增方式给予-------连续给药后突然停药，观察戒断症状，与同类代表药作对比，判断受试药依赖性潜力------动物：小、大鼠和猴。小鼠体重20-24g，每组≥20只，大鼠体重180-220g，每组≥10只,猴体重3-5kg，每组3～5只，♂♀各半------剂量：2～3，须设赋形剂对照和阳性药对照(吗啡，苯巴比妥或巴比妥)。低剂量用ACD；高剂量组依赖性潜力低药品应选取靠近毒性反应剂量，毒性低药品选取MTD。药品可采取恒量或剂量递增方式给予新药研发中药理毒理研究内容和要求第80页13.身体依赖性试验-自然戒断试验------连续给药后突然停药，观察戒断症状，与同类代表药作对比，判断受试药依赖性潜力-----动物：小、大鼠和猴。小鼠体重20-24g，每组≥20只，大鼠体重180-220g，每组≥10只,猴体重3-5kg，每组3～5只，♂♀各半------剂量：2～3，须设赋形剂对照和阳性药对照(吗啡，苯巴比妥或巴比妥)。低剂量用ACD；高剂量组依赖性潜力低药品应选取靠近毒性反应剂量，毒性低药品选取MTD。药品可采取恒量或剂量递增方式给予------观察指标：镇痛药在停药前24h及停药后48h内每隔4h观察统计外观体征和行为活动、植物神经系统机能改变，并称重。镇静催眠药在停药前一天及停药后1至2周内天天观察动物外观体征和行为活动及自发惊厥发生率-------外观体征和行为活动包含：应激性、神情过敏(猴)、饮食、睡眠、自发运动活动、攻击性、警觉程度、神经反射、竖尾、震颤、惊厥、呼吸、体温、体重------植物神经系统机能改变：腹泻、流涎、流泪、恶心、呕吐、瞳孔大小------资料统计及整理：①动物应写明种属、性别、生产合格证号、统计体重、试验室温度及湿度②受试物应写明生产批号、配制方法③戒断症状用记分法统计，对检测指标和体重、惊厥发生率等应设计合理图表显示。试验结果进行统计处理新药研发中药理毒理研究内容和要求第81页14.身体依赖性试验--替换试验-----给予动物代表药(如吗啡、巴比妥或苯巴比妥)产生身体依赖性后，停顿给药，替之以受试药，观察统计动物是否发生戒断症状及发作程度----动物：参考“自然戒断试验”----剂量：参考“自然戒断试验”----给药路径：腹腔注射、灌胃或“药掺食”(drugadmixedfood,DAF)法给予代表药使产生身体依赖性，然后停顿给代表药，以一样给药方式给予不一样剂量受试药,观察及统计替换期间动物戒断行为和体重改变-----镇痛药观察期为停顿吗啡前24h和停药后48h内，每4h观察一次；镇静催眠药观察为停顿代表药前一天和停药后1～2周内，天天观察一次-----采取1～2种给药路径，必须有一个与临床用药路径相同-----观察指标：参考“自然戒断试验”-----资料统计与整理：参考“自然戒断试验”新药研发中药理毒理研究内容和要求第82页15.身体依赖性试验--催促试验---概念：短时期内给予动物大剂量受试药，然后注射受体反抗剂，观察和统计是否出现戒断症状及其程度。此法只适合用于有竟争性受体反抗剂阿片类药品----动物：参考“自然戒断试验”----剂量：除低剂量组普通采取临床剂量1至2倍外，余同“自然戒断试验”---给药路径：猴试验应采取与临床给药路径相同；大、小鼠试验选取二种给药路径，其中必须有一个与临床用药路径相同---给药期限：猴连续给药30～60天，上、下午各一次，大、小鼠连续给药3～5天----停药后给予阿片受体反抗剂，惯用纳洛酮，亦可用环丙羟丙吗啡。观察给受体反抗剂后1～2h内动物出现戒断症状及体重改变---观察指标：参考“自然戒断试验”。小鼠适应观察统计跳跃次数----资料统计及整理：参考“自然戒断试验”新药研发中药理毒理研究内容和要求第83页16.身体依赖性试验--诱导试验---概念：应用各种诱发惊厥方法如听源性发作和戊四唑惊厥，对镇静催眠药产生身体依赖性动物，在断药期间阈下刺激强度就可出现反跳性兴奋，诱发惊厥---动物：大、小鼠。应预先挑选对各种阈下刺激无惊厥反应鼠---剂量：参考“自然戒断试验”，阳性代表药为苯巴比妥或巴比妥----给药路径：二种，有一个同临床路径----给药期限：30天，天天二次，上、下午各一次----观察指标：听源性发作试验在停药后一周内天天统计发作率和体重；戊四唑试验在停药24h后统计一次发作率和体重----资料统计及整理：参考“自然戒断试验”新药研发中药理毒理研究内容和要求第84页17.精神依赖性试验---采取”本身给药“测定iv药品对动物强化效应---动物：200～250g健康大鼠，♂♀各半----剂量：1～2个剂量组，加上一个阳性药对照组(阿片类--盐酸吗啡，镇静催眠--苯巴比妥钠或戊巴比妥钠)，每组10只动物。---方法：戊巴比妥钠麻醉下行颈外静脉插管术，将插管一端固定于血管内，另一端与恒速泵及药液输入系统相连。术后第二天开始对大鼠进行本身给药训练，直至动物建立本身给药(踏板)行为---观察指标：包含形成本身给药行为潜伏期、每个试验期内大鼠本身给药次数、行为改变、本身给药行为随药品浓度变动改变程度、消退反应、与其它药品相互替换等----资料统计及整理：参考“自然戒断试验”

新药研发中药理毒理研究内容和要求第85页六、特殊毒性试验1、目标意义2、定性差异3、定量差异4、致突变试验5、生殖毒性(致畸)试验6、致癌试验新药研发中药理毒理研究内容和要求第86页1、目标意义研究对遗传物质是否有损伤，是否会引发肿瘤、衰老及畸胎等特殊毒性试验存在着种属差异性定性差异定量差异新药研发中药理毒理研究内容和要求第87页2、定性差异反应停对家兔和７种灵长类动物致畸，但最少对10种品系大鼠、15种品系小鼠、2种家狗、３种田鼠和８种灵长类动物不致畸可松对兔子和小鼠强力致畸，但对大鼠不致畸硫唑嘌呤对大鼠不致畸，但对兔子强致畸氨磺丁脲引发大鼠、小鼠眼畸形，但对兔子却引发脸和内脏畸形

新药研发中药理毒理研究内容和要求第88页3、定量差异致畸剂量在人与动物、动物与动物间差异显著

表人类与动物致畸剂量比较药品最低致畸剂量（/kg/d)人与动物比值人动物反应停0.5-1.0mg兔2.5mg

5-2.5

氨基喋呤50μg大鼠100μg2

氨甲喋呤42μg大鼠200μg4.8

乙烯雌酚20-80μg恒河猴200μg10-2.5

苯妥英钠2mg小鼠50mg25新药研发中药理毒理研究内容和要求第89页4、致突变试验微生物回复试验(Ames试验）+哺乳动物培养细胞基因突变试验+果蝇伴性隐性致死试验染色体畸变试验+啮齿动物显性致死试验+精原细胞染色体畸变试验动物微核试验

+程序外DNA合成(UDS)试验+SOS显色试验新药研发中药理毒理研究内容和要求第90页微生物回复试验菌株:组胺酸缺点型鼠伤寒沙门氏菌(S.Typhimurium),采取TA98、100、97、102,检定符合要求,-80℃或液氮冻存备用剂量：由药品对细菌毒性和溶解度决定

最高剂量：

a.普通5mg／皿

b.最高溶解度

c.依据杀菌情况确定最大浓度最低剂量：普通1μg／皿或0.1μg／皿。剂量级：5个以上新药研发中药理毒理研究内容和要求第91页微生物回复试验代谢活化：加肝脏微粒体酶(S9)和不加S9平行条件下测试对照：阴性、阳性对照和S9对照方法：标准平板法或预培养法，48h观察结果，如菌落太小，可继续培养并延长到72h观察结果。每一浓度最少三皿，试验最少重复一次结果判定：①受试物所诱发回变菌落数(ｘ±ｓ)增加，超出对照2倍，量--效关系；②某测试点超出对照2倍以上，展现可重复并有统计学意义增加。符合上述任何一条即可判为阳性新药研发中药理毒理研究内容和要求第92页微生物回复试验如一些药品有显著杀菌作用，可改用哺乳动物细胞基因突变试验如一些阳性或可疑阳性时，可选择哺乳动物培养细胞基因突变试验或果蝇伴性隐性致死试验新药研发中药理毒理研究内容和要求第93页哺乳动物培养细胞染色体畸变试验细胞:提议首选中国仓鼠肺细胞(CHL),需定时检验核型和有没有支原体等污染。-80℃或液氮冻存剂量：高剂量以50％细胞生长抑制浓度为基准，最高不要超出10mM分子量。溶解受限时可采取饱和浓度。中低剂量用倍量稀释法。最少３个剂量代谢活化：应用诱导剂处理后哺乳动物肝微粒体酶（S9）进行体外代谢活化试验新药研发中药理毒理研究内容和要求第94页哺乳动物培养细胞染色体畸变试验药品作用时间:药品和细胞接触非活化组作用24h和48h收获细胞,代谢活化组作用6小时以上标本制作