基因工程的原理和技术

第一页，共三十页。怎样能在大肠杆菌中生产出人的胰岛素呢？基因工程的基本原理：让人们感兴趣的基因（目的基因）在宿主细胞中稳定和高效表达。第二节

基因工程的原理和技术第二页，共三十页。1、获取目的基因。2、形成重组DNA分子。3、将重组DNA导入受体细胞。4、筛选含有目的基因的受体细胞。5、目的基因的表达。爱情五步曲：1、找准目标2、约会牵手3、进入殿堂4、神父作证5、爱情结晶基因工程的一般操作步骤第三页，共三十页。基因工程基本操作步骤的演示：第四页，共三十页。1.获取目的基因⑴化学方法合成⑶从基因文库获得目的基因⑵用PCR技术扩增目的基因基因序列已知基因序列未知第五页，共三十页。2.形成重组DNA分子第六页，共三十页。⑴用一定的_________切割质粒，使其出现一个切口，露出____________。⑵用_____________切断目的基因，使其产生_________________。⑶将切下的目的基因片段插入质粒的______处，再加入适量___________，形成了一个重组

DNA分子。限制酶粘性末端同一种限制酶切口DNA连接酶相同的粘性末端第七页，共三十页。质粒含目的基因的DNA分子同一种限制酶处理（一般）一个切口两个黏性末端两个切口获得目的基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）过程:第八页，共三十页。3.将重组DNA导入受体细胞第九页，共三十页。将目的基因导入微生物细胞CaCl2处理受体细胞（大肠杆菌），增大细胞壁的通透性。第十页，共三十页。将目的基因导入动物细胞显微注射法（将基因表达载体提纯，用显微仪注射到受精卵中）第十一页，共三十页。农杆菌转化法（表达载体导入农杆菌，再让农杆菌感染植物细胞）将目的基因导入植物细胞第十二页，共三十页。农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法将目的基因导入植物细胞第十三页，共三十页。四环素抗性基因氨苄青霉素抗性基因4.筛选含有目的基因的受体细胞如何筛选含有胰岛素原基因的大肠杆菌呢？第十四页，共三十页。ABCD把每个大肠杆菌分别放在有氨苄青霉素的培养基中生长，看能否长出菌落，再作出判断。第十五页，共三十页。5.目的基因的表达第十六页，共三十页。无表达产物无表达产物有表达产物无表达产物细菌的检测，将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。第十七页，共三十页。1）以下说法正确的是（）

A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列

B、质粒是基因工程中唯一的运载体

C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接

D、基因控制的性状都能在后代表现出来C练习第十八页，共三十页。2）有关基因工程的叙述中，错误的是（）

A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来

B、限制性内切酶用于目的基因的获得

C、目的基因须由运载体导入受体细胞

D、人工合成目的基因不用限制性内切酶A练习第十九页，共三十页。3）有关基因工程的叙述正确的是（）

A、限制酶只在获得目的基因时才用

B、重组质粒的形成在细胞内完成

C、质粒都可作为运载体

D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料D练习第二十页，共三十页。4）基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是（）

A、人工合成目的基因

B、目的基因与运载体结合

C、将目的基因导入受体细胞

D、目的基因的检测和表达C练习第二十一页，共三十页。人工合成基因的方法反转录法根据已知的氨基酸序列合成DNA甲硫氨酸——苯丙氨酸——色氨酸蛋白质：信使RNAAUGUUUUGG或AUGUUCUGG基因或DNATACAAAACCATGTTTTGGTACAAAACCATGTTTTGG或第二十二页，共三十页。利用PCR技术扩增目的基因第二十三页，共三十页。DNA合成仪DNA合成仪能自动进行化学合成的仪器，能按设计自动连接脱氧核苷酸的设备。第二十四页，共三十页。人工合成基因的方法反转录法根据已知的氨基酸序列合成DNA甲硫氨酸——苯丙氨酸——色氨酸蛋白质：信使RNAAUGUUUUGG或AUGUUCUGG基因或DNATACAAAACCATGTTTTGGTACAAAACCATGTTTTGG或第二十五页，共三十页。基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。基因文库的构建：第二十六页，共三十页。关于基因工程的图片：

我国生产的部分基因

工程疫苗和药物转生长激素鲤鱼转基因超级小鼠我国生产的部分基因工程疫苗和药物第二十七页，共三十页。对照抗虫转基因抗虫棉花和普通棉花果实耐贮藏，在25℃温度下，可贮藏40－50天，较对照延长贮藏期20－30天。转基因耐贮藏番茄和普通番茄第二十八页，共三十页。

转基因抗除草剂玉米施用除草剂，杂草被杀死，转基因抗除草剂的玉米不受影响（右侧为未施用除草剂的对照）第二十九页，共三十页。内容总结怎样能在大肠杆菌中生产出人的胰岛素呢。让人们感兴趣的基因（目的基因）在宿主细胞中稳定和高效表达。第二节基因工程的原理和技术。⑴用一定的_________切割质粒，使其出现一个切口，露出____________。⑶将切下的目的基因片段插入质粒的______处，。重组DNA分子（重组质粒）。（表达载体导入农杆菌，再让农杆菌感染植物细胞）。把每个大