细胞分选技术

细胞分选技术第1页，共35页，2023年，2月20日，星期日细胞分选和基本原理细胞分选是把一种细胞从多细胞样品中分离出来用抗体标记细胞，同时被用的抗体被萤光标记或连接免疫磁珠或其它利用萤光和免疫磁珠的特性来分离细胞第2页，共35页，2023年，2月20日，星期日细胞分选常用方法密度梯度离心(Ficoll)离心抗体标记分离免疫密度离心免疫磁珠流式第3页，共35页，2023年，2月20日，星期日正选和负选正选需要得细胞标记需要得细胞需要得细胞标记不需要得细胞负选第4页，共35页，2023年，2月20日，星期日正选只需要一种抗体分离出的细胞纯度高对于比例小的细胞群，正选容易得到高纯度正选和负选的比较优点负选需要的细胞没有被抗体等标记对需要的细胞，不需要特异性的细胞标记缺点需要多种抗体标记不需要的细胞需要特异性的靶细胞标记可能引起细胞活化第5页，共35页，2023年，2月20日，星期日细胞分选产品第6页，共35页，2023年，2月20日，星期日StemCellTechnologiesInc.

的细胞分选原理利用抗体四聚体(TetramericAntibodyComplex,TAC)来分选细胞TACCell磁珠直接标记TACCell磁珠间接标记第7页，共35页，2023年，2月20日，星期日适用于人的全血细胞样品是一种负选方法基本原理：抗体标记和免疫密度离心法需要的仪器：离心机第8页，共35页，2023年，2月20日，星期日DirectLabelingofHumanCells不需要的细胞第9页，共35页，2023年，2月20日，星期日离心把细胞样品置于密度分离液上分选的过程标记把RosetteSep™抗体混合液加入细胞样品中室温下20分钟用缓冲液稀释收集第10页，共35页，2023年，2月20日，星期日的密度分离液DM-L为了最大限度回收淋巴细胞，StemCell专门研制了一种适合RosetteSep™的密度分离液——DM-LDM-L的密度：1.081g/mLDM-L的渗透压与人外周血的渗透压相同(iso-osmolar)适用于以下的淋巴细胞分选:CD3+Tcells - CD8+TcellsCD4+Tcells - Bcells第11页，共35页，2023年，2月20日，星期日DensityofFreshLeukocytesFrom:“CentrifugationTechniquesIII”,NycomedAmersham

MonocytesLymphocytesBasophilsNeutrophilsEosinophilsErythrocytes1.060 1.070 1.080 1.090 1.100Densitying/mLDM-L:1.081g/mLFicoll:1.077g/mL第12页，共35页，2023年，2月20日，星期日低温冷藏的外周血单个核细胞人和小鼠脾细胞第13页，共35页，2023年，2月20日，星期日负选,只需要离心机可以同时分选多份样品取决于离心机的容量分选的细胞量在106

cellsinEppendorf-109cellsin50mLtube适用于低温冷藏的人外周血单个核细胞(PBMC)和小鼠脾细胞的特点Sep第14页，共35页，2023年，2月20日，星期日直接标记人的细胞Anti-cellAnti-particleTetramericAntibodyComplex(TAC)DenseParticle(1mm)UnwantedCell第15页，共35页，2023年，2月20日，星期日间接标记小鼠的细胞

TetramericAntibodyComplex(TAC)BiotinylatedAntibodyAnti-Anti-BiotinParticleDenseParticle(1mm)UnwantedCell第16页，共35页，2023年，2月20日，星期日SpinSep的分选过程LabelLayer&SpinCollectAntibodyCocktailAnti-BiotinTAC(mouseonly)DenseParticles4. LayeroverSpinSep®DensityMediumSpin10-20minat1200xgCollectalmostentirevolume7.WashtoremoveDensityMedium第17页，共35页，2023年，2月20日，星期日的细胞分选资料人的外周血细胞(PBMC)小鼠的脾细胞Valuesarethemean±SD第18页，共35页，2023年，2月20日，星期日新型，高效，易行的免疫磁珠分选技术新：不用柱子，只需用磁极，所用的磁珠很小高效：效率-分选过程不用洗细胞(省时省力);效果-分选的细胞纯度高易：操作过程简单易行广：可做正选和负选适应性强：在理论上可以分选任何一种细胞第19页，共35页，2023年，2月20日，星期日

Anti- Anti-CellParticleTetramericAntibodyComplex(TAC)MagneticNanoparticle(160nm)直接标记人的细胞Cell第20页，共35页，2023年，2月20日，星期日MagneticNanoparticle(160nm)TetramericAntibodyComplex(TAC)Biotin/FluoAntibodyAnti-Anti-biotin/FluoParticle间接标记小鼠细胞Cell第21页，共35页，2023年，2月20日，星期日RelativeSizesofMagneticParticlesusedinCellSeparationCell第22页，共35页，2023年，2月20日，星期日的细胞分选过程

Ab(TAC)(人)

Abbiotinanti-biotinTAC(小鼠)标记放置磁极中倒出未标记的细胞分选结合磁珠加入免疫磁珠孵育后稀释第23页，共35页，2023年，2月20日，星期日正选资料人的外周血细胞(PBMC)小鼠脾或骨髓细胞第24页，共35页，2023年，2月20日，星期日负选资料人的外周血细胞(PBMC)小鼠脾细胞第25页，共35页，2023年，2月20日，星期日可正选或去除任何一种细胞PE标记的抗体分选KitFITC标记的抗体分选KitBiotin标记的抗体分选KitCell第26页，共35页，2023年，2月20日，星期日细胞分选常见的问题分选方法的选择样品种类样品数量每次需要分选的细胞数第27页，共35页，2023年，2月20日，星期日常见问题样品的前处理Ficoll离心机全血和单采的细胞细胞计数稀释液细胞数第28页，共35页，2023年，2月20日，星期日常见问题分选过程中细胞浓度缓冲液细胞混匀动作要点第29页，共35页，2023年，2月20日，星期日CalculatingPurityandRecovery%Purity = #desiredcellsinenrichedfractionx100

#totalnucleatedcellsinenrichedfraction = %oftotaleventsinthedesiredcellgate(FACSprofile)%Recovery = #desiredcellsinenrichedfractionx100

#desiredcellsinstart

= (%purityinenriched)x(totalnucleatedcellsinenriched)x100 (%purityinstart)x(totalnucleatedcellsinstart)第30页，共35页，2023年，2月20日，星期日FACSGate第31页，共35页，2023年，2月20日，星期日panNK+SelectedfromMoSpleenStartNK+Selected第32页，共35页，2023年，2月20日，星期日Dataanalysis第33页，共35页，2023年，2月20日，星期日的技术要领细胞稀释后，用吸管混匀细胞（不要倒置试管）倒出未标记的细胞时，让液体连续流淌