动物细胞培养和核移技术课件

核移植技术及应用报告人：孙志杰导师：马小军研究员Seminar

Ⅰ精卵结合胚胎细胞个体显微操作仪1.1定义：将供体细胞核移入去核的卵母细胞中,使后者不经精子穿透等有性过程即可被激活、分裂并发育,使得核供体的基因得到完全复制。一核移植技术简介1切开卵母细胞透明带2挤出卵母细胞细胞核3注入供体细胞核4电融合仪融合培养12345供体细胞核的来源体细胞核移植胚胎细胞核移植胚胎干细胞核移植供受体种间关系异种核移植同种核移植核移植目的生殖性克隆治疗性克隆二核移植分类2.2克隆动物的鉴定DNA指纹：指每个个体所特有的基因多态性鉴定方法：RAPD微卫星RFLPDOLLY的鉴定：微卫星

绵羊1997小鼠1998牛1998山羊2000张涌西北农林科技大学猪2000兔2001大鼠2003周琪中科院动物所狗20052.3已克隆的动物2.4治疗性克隆细胞治疗组织替代器官移植1细胞治疗三核移植技术的应用1.1定义细胞移植可以治疗由于细胞功能缺陷所引起的各种疾病，如糖尿病;中枢神经系统疾病（帕金森，阿尔莫茨症）;肝功能衰竭;甲状腺疾病。

面临的问题解决方法

细胞来源尸源性异种细胞

免疫排斥免疫抑制剂基因敲除免疫隔离核移植消除免疫排斥胚胎干细胞提供细胞来源三核移植技术的应用2005韩国科学家黄禹锡应用体细胞核移植，从糖尿病；脊索损伤；先天性低丙球蛋白血症病人的皮肤细胞中克隆出了早期胚胎，并成功提取出新的胚胎干细胞系，突破克隆早期胚胎和提取干细胞的效率从

1/240提高到1/20。体细胞全部来自于患有各种疾病的病人

遗传疾病的治疗3生产药用蛋白目的基因

转基因细胞系核移植动物乳腺

乳液提取目的产

物基因打靶

3.1方法三核移植技术的应用3.2研究实例

1997年底,英国Roslin研究所和PPL公司通过克隆转基因体细胞，获得了6只整合neo或neo和F2IX基因绵羊,这标志着核移植介导的转基因技术成功问世。2000年,英国PPL公司将人AAT基因定点整合到胎儿成纤维细胞的α1原胶原(Procollagen)基因座位,而后用转基因细胞进行核移植,生产出世界首例基因打靶绵羊,其乳中AAT蛋白含量达到了650mg/L,远高显微注射法18mg/L的水平。2004年，台湾培育带有治疗血友病的“第八凝血因子”的体细胞克隆羊。2005年，这只克隆羊产下一只同样带有第八凝血因子的公羊。三核移植技术的应用4保护濒危物种细胞核去核卵母细胞核移植重构胚三核移植技术的应用四展望

虽然核移植技术有着广阔的应用前景，并且已取得了一些进展如体细胞核移植等，但也存在着一些问题。主要包括核移植效率低，动物畸形。这要求研究人员进一步了解核质作用机理，改进培养方式。Bortvin,A.,Eggan,K.,Skaletsky,H.(2005).IncompletereactivationofOct4-relatedgenesinmouseembryosclonedfromsomaticnuclei.Development130,1673-1680.Buehr,M.,Nichols,J.,Stenhouse,F.(2003).Rapidlossofoct-4andpluripotencyinculturedrodentblastocystsandderivativecelllines.BiolReprod68,222-229.Ferguson-Smith,A.C.,andSurani,M.A.(2001).Imprintingandtheepigeneticasymmetrybetweenparentalgenomes.Science293,1086-1089.Giles,J.,andKnight,J.(2003).Dolly'sdeathleavesresearcherswoollyoncloneageingissue.Nature421,776.Gurdon,J.B.(1999).GeneticreprogrammingfollowingnucleartransplantationinAmphibia.SeminCellDevBiol10,p239-243.Jaenisch,R.,andWilmut,I.(2001).Developmentalbiology.Don'tclonehumans!Science291,2552.Rideout,W.M.,Eggan,K.,andJaenisch,R.(2001).Nuclearcloningandepigeneticreprogrammingofthegenome.Science293,1093-1098.基本参考文献