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ICS65.020.20浙江省地DB33方标准DBT2246—2020ealtimePCRdetectiontechniqueforJapaneseencephalitisvirus浙江省市场监督管理局发布前言GBT1.1-2009的规定编写。浙江省农业农村厅提出。口。中心。猪流行性乙型脑炎病毒荧光定量RT－PCR检测方法本标准规定了猪流行性乙型脑炎病毒(Japaneseencephalitisvirus，JEV)荧光定量RT－PCR检件、操作步骤和结果判定等要求。于猪流行性乙型脑炎病毒核酸的检测。语和定义文件。炎公件仪器。2试剂Trizol：核糖核酸(Ribonucleicacid,RNA)提取试剂。3.2.4焦炭酸二乙酯(Diethylpyrocarbonate,DEPC)水：取DEPC100μL，加超纯水至100mL，室eebufferedsalinePBSNaHPOHOgnGGCTCTTATCACGTTCTTCAAGTTT：5－TGCTTTCCATCGGCCYAAAA3，探针：5－FAM-AGCATTAGCCCCGACCAAGGCG-TAMRA-3。3.2.9阳性对照：猪乙型脑炎活疫苗(SA14-14-2株)。操作步骤4.1样品采集4.2样品处理nAl4.4.1反应体系组成设立阳性对照、阴性对照，反应体系(20µL)由表1中物质组成。配制表OneStepRT-PCRBufferⅢExTaqHS(5U/µL)PrimeScriptRTEnzymeMixⅡ10µmol/L)mol/L)针(10µmol/L)A4aseFreedHO4总量4.4.2反应条件。4.4.3荧光素的设定ReportDye为FAM，QuencherDye设定为none。结果判定5.1结果分析条件设定点为准。5.2质控标准Ct，阴性对照无Ct值且无典型扩增曲线，二者同时成立成立，

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