丙型肝炎实验室检测策略研究

丙型肝炎实验室检测策略研究第1页/共40页课题研究总体思路检测策略制定三原则：

1.检测的目的（监测、诊断、血液筛查）

2.检测方法的敏感性和特异性

3.被检测人群的HCV感染率检测策略评估三阶段：

1.参比实验室小样本的评估

2.临床实验室大样本的现场评估策略实施前试点

3.策略实施后的评估（提供持续的检测性能评价的数据）第2页/共40页一、丙型肝炎实验室检测方法学评价（一）1.方法学评价指标

1）敏感性、特异性；

2）分析灵敏度;3）分析特异性;4）对弱阳性样本的检出能力；

5）线形范围；

6）批内及批间精密度；

第3页/共40页一、丙型肝炎实验室检测方法学评价（二）2.评价用血清盘（panel）

1)参比实验室基础血清盘；

2)美国BBI商业阳转血清盘（4套）；

3)参比室干扰样本血清盘；

4)参比实验室特性血清盘；

5)参比实验室系列稀释血清盘（4套）；

6)参比实验室精密度质控品（高、中、底值）；3.评价实验的质量控制美国CAP能力验证血清盘

第4页/共40页一、丙型肝炎实验室检测方法学评价（三）4.酶联免疫试剂评价结果（15家）

1）敏感性97.5%~100%，特异性97.5%~100%。2）4套BBI血清盘的平均间隔天数（从采样开始到检测出阳性的间隔天数）8.75天-19天。3）分析特异性皆为100%。4）弱阳性样本检测结果见附件。5）4套系列稀释血清盘的线性范围稀释度11~23。6）批内精密度(CV%)3.4~23.9；批间精密度(CV%)高值3.36~57.74；中值1.87~38.64;

低值2.68~56.39;第5页/共40页附件反应强度—特性盘检测结果(s/co)-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------厂家 TX-0101厂家TX-0102厂家TX-0103厂家TX-0104厂家TX-0105厂家TX-0106……………………………..中山 0.725安图0.446金豪0.196贝尔0.333ORTHO0.321安图0.913贝尔 0.82华美0.504新创0.2中山0.34 新创0.428ORTHO 1.019科卫 1.141吉比爱0.622中山0.22Murex0.395 华美0.715Murex 1.239Murex 1.233中山0.67贝尔0.24安图0.52 科卫1.012贝尔 1.553华美 1.405ORTHO0.743华美0.259华美0.597 中山1.06中山 1.965ORTHO 1.416Murex0.748科卫0.275吉比爱1.016 Murex1.649华美 2.247安图 1.42荣盛1.153万泰0.321科卫1.089 贝尔1.933科卫 2.25三维 2.06贝尔1.214三维0.34三维1.253 金豪2.281吉比爱 3.783高达 2.326科卫1.365高达0.406万泰1.292 丽珠2.423万泰 5.314丽珠 2.4新创 1.428ORTHO0.656ORTHO1.303 三维2.433荣盛 5.626万泰 2.607丽珠 1.641丽珠0.705高达1.38 万泰3.128三维 5.68新创 2.692三维1.853Murex1.115荣盛1.443 荣盛4.76高达 6.373荣盛 2.74高达 2.246吉比爱1.188丽珠1.729 高达5.113丽珠 6.382吉比爱 2.75金豪3.192安图1.613新创2.007 安图6.106新创 6.492金豪 4.67万泰4.457荣盛1.793金豪2.168 吉比爱7.561金豪 9.519------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------第6页/共40页附件

线性范围—系列稀释样本检测结果-------------------------------------------------------------------------------------厂家系列-01系列-02系列-03系列-04稀释度北京万泰655622上海荣盛655622北京科卫443415北京金豪665623珠海丽珠655622ORTHO323311Murex432211华大GBI555520英科新创665623现代高达655622潍坊三维555520安图绿科433313北京贝尔434415中山生物554519河南华美332311……………….第7页/共40页附件批内精密度—室内质控品检测结果（s/co）-----------------------------------------------------------------厂家 平均值 SD CV（%）…………北京万泰2.728 0.196 7.2上海荣盛2.472 0.132 5.3北京科卫1.170 0.051 4.4北京金豪3.542 0.271 7.7珠海丽珠3.063 0.474 15.5ORTHO0.998 0.039 3.9Murex 1.123 0.122 10.9华大GBI3.988 0.298 7.5英科新创4.075 0.288 7.1现代高达2.607 0.088 3.4潍坊三维1.609 0.245 15.2安图绿科1.489 0.356 23.9北京贝尔0.936 0.094 10.1中山生物1.567 0.212 13.5河南华美1.551 0.153 9.9-----------------------------------------------------------------第8页/共40页附件批间精密度—室内质控品检测结果(s/co)-------------------------------------------------------------------厂家 T17CV(%)IQC-1CV(%)IQC-2CV(%)………….北京万泰4.10 20.03 19.92上海荣盛7.55 7.79 11.25北京科卫18.10 12.13 22.02北京金豪4.50 3.36 38.64珠海丽珠14.64 20.53 1.87ORTHO 8.74 14.71 14.99Murex 13.85 16.75 11.19华大GBI9.13 19.41 23.21英科新创12.51 17.18 22.68现代高达11.62 5.25 15.98潍坊三维4.47 8.75 6.97安图绿科2.68 4.74 18.33北京贝尔33.23 22.51 19.27中山生物56.39 57.74 10.82河南华美49.96 16.38 25.78---------------------------------------------------------------第9页/共40页一、丙型肝炎实验室检测方法学评价（四）5.金标快速检测试剂的评价结果（8家）1）敏感性82.5%-100%，特异性97.5%-100%。。2）4套系列稀释血清盘的稀释度1~23。3）分析特异性皆为100%。第10页/共40页附件系列稀释样本检测结果--------------------------------------------------------------------------------厂家系列-01系列-02系列-03系列-04稀释度北京蓝十字444416上海荣盛333312中新科炬554519英科新创02035潍坊康华01001上海凯创656623珠海丽珠322310广州万浮01124-------------------------------------------------------------------------------第11页/共40页一、丙型肝炎实验室检测方法学评价（五）

小结1.ELISA试剂1）多数试剂敏感性、特异性较高，适合我国一般人群筛查。2）个别试剂未检出抗NS3抗体，所有试剂均能检测出抗核心区抗体。3）国产抗-HCVELISA试剂的S/CO比值差异较大。4）个别试剂分析灵敏度较差。2.快速试剂1）多数试剂的特异性较高，个别试剂的敏感性较差。2）试剂性能相互之间有较大差异。第12页/共40页二、丙型肝炎感染的血清流行病学调查（一）１.2007-2008年中国部分人群HCV感染的血清流行病学调查1）调查对象及地区分布

吸毒人群（9600人）；云南、新疆、广西。性病门诊就诊者（7821人）；北京、黑龙江、湖北、广东。男男同性性接著触者（670人）；山东。既往有偿供血/浆者（6645人）；河南、山西、安徽。无偿献血者（10051人）；上述各省血液中心。

HIV感染者（1200）；河南、山西、黑龙江、湖北、云南。2）实验室检测质量控制

室内质控、能力验证（PT）、现场督导。第13页/共40页二、丙型肝炎感染的血清流行病学调查（二）3）结果(1)吸毒人群抗-HCV阳性率69.8%.

广西、云南、新疆分别为85.5%、70.0%、53.9%.(2)既往有偿供血/浆者(HIV阴性)抗-HCV阳性率26.4%

山西、湖北、河南分别为15.7%、15.2%、48.4%。(3)性病门诊就诊者抗-HCV阳性率0.4%.

北京、黑龙江、湖北、广东分别为0.4%、0.5%、0.3%、0.4%.(4)男男同性性接著触者（山东）抗-HCV阳性率1.8%.(5)无偿献血者抗-HCV阳性率0.4%.(6)HIV感染者抗-HCV阳性率64.5%

河南、山西、黑龙江、湖北、云南分别为92.3%、69.4%、20.6%、68.0%、46.0%.第14页/共40页二、丙型肝炎感染的血清流行病学调查（三）4）小结

静脉吸毒人群是我国目前HCV感染的最主要高危人群。既往有偿献血/浆者HCV感染率处于较高水平。

性病门诊就诊者HCV感染率相对不高。

HIV阳性者中合并较高的HCV感染率。第15页/共40页二、丙型肝炎感染的血清流行病学调查（四）2.2009年全国丙型病毒性肝炎血清流行病学调查1）调查对象

本次全国“丙型肝炎调查”检测标本为“2006年全国乙肝调查”保留的B管血清，实验室共检测样本78937人份，与“2006年全国乙肝调查”数据库对接后，有效样本78746人份用于数据分析。分布在全国31个省（自治区、直辖市，未包括香港、澳门和台湾地区）的160个疾病监测点

2）实验室检测流程3）实验室检测质量控制

第16页/共40页二、丙型肝炎感染的血清流行病学调查（五）4）结果(1)1～59岁人群HCV感染阳性率0.40%，调整阳性率0.43%（95%CI=0.33%～0.53%），

HCV感染阳性率随年龄组的递增呈上升趋势（z=-10.92，p<0.001）。

第17页/共40页在调查1～59岁人群中，三个地区HCV感染阳性率差异有统计学意义（χ2=8.33，p=0.01）。东部地区HCV感染阳性率0.27%，调整阳性率0.37%（95%CI=0.21%～0.53%）；中部地区HCV感染阳性率0.54%，调整阳性率0.67%（95%CI=0.40%～0.94%）；西部地区感染HCV阳性率0.40%，调整阳性率0.31%（95%CI=0.20%～0.42%），第18页/共40页(3)1～59岁人群中，不同职业人群HCV感染阳性率不同，差异有统计学意义（χ2=56.52，p<0.0001）。

农民HCV感染阳性率最高0.63%（调整阳性率0.68%,95%CI=0.47%～0.89%）,

散居儿童最低0.06%（调整阳性率0.05%,95%CI=0.00～0.12%）。(4)1～59岁人群中，性别间差异无统计学意义(χ2=0.41,p=0.52)。

男性HCV感染阳性率0.41%，调整阳性率0.46%(95%CI=0.31%～0.61%)；女性HCV感染阳性率0.40%，调整阳性率0.40%(95%CI=0.27%～0.54%)，

第19页/共40页

(5)1～59岁人群中，不同民族HCV感染阳性率差异无统计学意义（χ2=6.17,p=0.40）。

维吾尔人群族HCV感染阳性率最高0.96%（调整阳性率0.29%,95%CI=0.03%～0.54%）,

藏族人群最低0.13%（调整阳性率0.05%,95%CI=0.00～0.13%）。(6)1～59岁人群中，不同文化程度人群HCV感染阳性率差异有统计学意义（χ2=21.36，p<0.001）。

文盲人群HCV感染阳性率最高0.74%（调整阳性率1.03%,95%CI=0.24%～1.83%）,

学龄前儿童最低0.08%（调整阳性率0.04%,95%CI=0.01%～0.08%）。第20页/共40页二、丙型肝炎感染的血清流行病学调查（六）5）小结

全国1～59岁人群HCV感染调整阳性率为0.43%，在全世界范围内我国丙型肝炎感染属于较低水平，同时由此推算我国HCV感染者约650万人。第21页/共40页三、丙型肝炎检测策略的提出及临床评估（一）参比实验室的评估

1）评估方法(1)依据方法学评价结果，结合实际工作，选取试剂（敏感性大于99%、特异性大于95%）用于HCV检测策略研究。(2)根据感染途径分四类人群（感染率不同），共筛选402份样品。采用8种抗-HCVELISA试剂检测样品，任一阳性样品采用CHIRONRIBAHCV进行确认试验，确认每份样品抗-HCV情况。(3)分析探讨不同试剂的各自特定S/CO比值（样品S/CO≥特定S/CO比值，则该试剂检测结果阳性符合率≥95%）。(4)按照假设的不同检测策略，分析各策略判读的检测结果与样品的真实结果的差异，计算敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值评价指标；并按照不同人群，对各检测策略评价指标进行比较。采用秩和检验分析不同检测策略的评价指标。第22页/共40页三、丙型肝炎检测策略的提出及临床评估

（二）2）评估结果

总人群及分吸毒人群、性病门诊人群、既往献血人群、义务献血人群的评价

(1)单一试剂检测策略的评价(2)两种试剂平行检测策略的评价(3)两种试剂顺序检测策略的评价(4)S/CO比值替代检测策略的评价(5)三种试剂检测策略的评价评价指标：敏感性、特异性、阴性预期值、阳性预期值。第23页/共40页三、丙型肝炎检测策略的提出及临床评估

（三）3）小结

(1).本次研究提示单一试剂检测策略可用于人群监测。

(2).单一试剂检测策略的敏感性较高，特异性较低（低感染率）。

(3).平行检测和顺序检测在四项指标方面无显著性差异。

(4).S/CO替代策略的阳性预测值显著大于其他策略，敏感性则较低（高感染率）。

(5).替代策略因阳性符合率为95%时对应的S/CO比值，国产试剂差异较大，不建议针对不同国产试剂做出有关S/CO比值的统一规定。S/CO替代策略用于临床诊断时，应考虑各试剂S/CO比值差异较大这一因素。

(6).三种试剂检测的阳性预测值均高于单一检测试剂、平行检测和顺序检测，但低于S/CO比值替代策略。

(7).各策略的国产试剂组合与国产和进口试剂组合在检测能力方面无显著差异。第24页/共40页三、丙型肝炎检测策略的提出及临床评估

（四）2.临床实验室大样本的现场评估1)评估现场地区：黑龙江、广西、四川、陕西。2)评估样本人群：吸毒、肾透析、医院侵入性诊疗、性病门诊就诊者、无偿献血体检。3)评估指标：根据样本的真实感染状况计算检测策略的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。4)评估策略：监测策略、诊断策略、S/CO比值替代策略。5）实验室检测质量控制第25页/共40页三、丙型肝炎检测策略的提出及临床评估（五）策略1样品阴性反应初筛试验阳性反应复检试验阴性反应阳性反应筛查试剂-1图1HCV感染疫情报告的检测流程报告抗-HCV阴性报告抗-HCV阳性筛查试剂-2第26页/共40页三、丙型肝炎检测策略的提出及临床评估（六）策略2筛查试剂样品阴性反应初筛试验阳性反应复检试验均阴性反应一阴一阳均阳性反应补充试验原有试剂双孔或原有试剂加另一种不同原理（或厂家）试剂图2临床诊断筛查检测流程报告抗-HCV阴性第27页/共40页三、丙型肝炎检测策略的提出及临床评估（七）策略2复检阳性样品阳性反应免疫印迹试验阴性反应图3临床诊断补充试验检测方法-1流程不确定报告抗-HCV不确定报告抗-HCV阴性报告抗-HCV阳性第28页/共40页三、丙型肝炎检测策略的提出及临床评估（八）策略3初/复检阳性样品样品不确定免疫印迹试验阴性反应图4临床诊断补充试验检测方法-2流程阳性反应根据S/CO值判断高S/CO值低S/CO值报告抗-HCV阳性报告抗-HCV阴性报告抗-HCV不确定第29页/共40页四、丙型肝炎实验室检测能力验证（PT）1.PT方法

1)依据标准：

2)PT方式：

3)PT样品：

4)预期结果的确定：

5)评定方法（PT得分）：第30页/共40页四、丙型肝炎实验室检测能力验证（PT）2.参加单位

参加单位来自全国31个省、自治区、直辖市的324家艾滋病检测确证实验室（疾病预防控制机构274家、检验检疫机构24家、医疗卫生机构16家、军队系统4家、公安系统1家、血液系统3家、临检中心1家、高校1家）。

第31页/共40页四、丙型肝炎实验室检测能力验证（PT）3.实验室PT成绩(抗-HCVELISAPT)…………………年度100分90—99分80—89分80分以下90分以上（%）………….2011242611591.7201021951796.6200917191397.82008902249420073511