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第二 分子生物学技PCR过程一般分为变性、退火、延伸三大步, A.94℃、55℃、72 B.72℃、55℃、94C.55℃、94℃、72 D.80℃、55℃、72解析:94℃(90~96℃)以上时,DNA解聚为单链,称之为变性;当温度50℃(40~60℃)左右时,DNA结合;当温72℃(70~75℃)左右时,溶液中的四种脱氧核苷酸(A、T、C、G)TaqDNA聚合酶的作用下,DNA链,称为延伸。答案DNA的需要引物,其主要原因是 可加快DNA的速DNA5'DNADNA解析:DNA的两条链是反向平行的,DNA的方向,DNA的羟基(—OH)3'端,5'端。DNA聚合酶不能从头开始合成DNA,而只能从3'端延伸DNA链。因此,DNA需要引物。当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后,DNA3'DNA链,DNA的合成方5'3'端延伸。答案下列有关PCR反应的叙述正确的是( A.PCR反应所需要的引物只是RNAB.PCR反应所需要的材料是核糖核苷酸C.PCR60℃会变性解析:PCRDNARNA,反应所需要的材料是脱氧核苷酸,PCR所需要的酶是耐高温的,60℃不会变性。答案有关PCR技术,下列叙述不正确的是 PCR15~40在用PCR技术扩增DNA时,DNA的过程与细胞内DNA的类PCR反应只需一定的缓冲溶液、DNAPCR一般经历三十多次循环,解析:PCR反应中需要的条件有模板(DNA分子)、原料(4种脱氧核苷酸)、酶(TaqDNA聚合酶)、引物(DNARNA)答案 ①目的②引 ③四种脱氧核苷 ④DNA聚合酶等 ⑥核糖 B.①②③⑥ 解析:PCR技术需要目的作为扩增的模板,耐高温DNA聚合酶催化反应的进行,而引DNA聚合酶起作用的需要,四种脱氧核苷酸是该过程的原料。答案多聚酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历下述三十多次循环;94℃下使模板DNA变性、解链→55℃下退火(引物与DNA模板链结合)→72℃下引物链延伸(形成新的脱氧核苷酸链)。下列有关PCR过程的叙述中不正确 变性过破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键,也可利用解旋酶实复性过引物与DNA模板链的结合依靠互补配对原则完延伸过需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷PCR与细胞内DNA相比,所需要酶的最适温度较解析:变性过破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键,也可利用解旋酶实现;复性过引物与DNA模板链的结合依靠互补配对原则完成;延伸过需要DNA聚合酶、ATP、四种脱氧核糖核苷酸;PCR与细胞内DNA相比,所需要酶的最适温度较高。下面关于DNA对高温的耐受性的说法,不正确的是( A.DNA对高温的耐受性一般要比蛋白质强B.80DNA将变性,即使恢复到常温,解析:蛋白质一般受80℃以上的高温,一旦达到此温度,其结构往往会发生不可逆转的破坏,DNA80℃以上情况下才会变性,一旦温度降低,其在高温下解开的答案关于PCR的说法不正确的是( A.PCR是体外DNA的技术B.TaqDNAC.DNAD.PCR利用的是DNA双链原解析:DNA既可来源于动物、植物、微生物,答案PCR操作中,从第二轮循环开始扩增的DNA片段( 解析:R扩增产物可分为长产物片段和短产物片段两部分。短产物片段的长度严格地5端之间,是需要扩增的特定片段。进入第二轮循环后,模板结合外,还要同新合成的链(即“长产物片段”)结合引物在与新链结合时,由于新链模5端序列是固定的,3端被固定了终点,保证了新片段的起点和终点都限定于引物扩增序列以内,形成长短一致的“短产物片段”。答案使用PCR仪的具体实验操作顺序应为 PCR仪的循环程序③用微量移液器在微量离心管中依次加入各组分④进行PCR反应 A.②③⑤④①B.①⑤③④②C.②③⑤①④解析:使用PCR仪进行DNA扩增前,首先按照PCR体系配方,依次将各组分加入微量离心管离心,使反应液集中于试管底部,然后再设计好PCR仪的循环程序进行PCR反应。11.(2014·山东高考理综)玉米是重要的粮食作物,经深加工可生产、玉米胚芽油和果玉米秸秆中的纤维素经充分水解后的产物可被酵母菌利用发酵生产。培养酵母 。发酵过检测酵母菌数量可采用 利用PCR技术扩增葡萄糖异构酶时,需用耐高温的 解析:PCR技术中,DNA分解成单链,因而需耐热的(Taq)DNA聚合酶;PCR技术中的每次循环都包括三个步骤:变性→复性→延伸。答案:(1)碳源(2)压榨萃取(注:两空可颠倒) 复性(或退火 延DNA的两条链是反向平行的,通常将 过碱基互补配对结合后,DNA聚合酶就能从引物的 开始延伸DNA链。PCRDNADNA双链的问题,DNA聚合酶2080年代,Taq细菌中分离 假设在PCR反应中,只有一个DNA片段作为模板,请计算在5次循环后,反应物中大 个这样的DNA片段。PCR。解析:(1)DNA3'羟基上,DNA母链RNA引物就提供这个羟基。(2)PCRDNA的热变性原理解决了打开DNA双链的问题,所以用于催化DNA过程的DNA聚合酶要具有耐高温的特性。在高温环境中培养微生物,只有耐高温的微生物才能生存,Taq细菌从其他普通的微生物中分离出来。(3)DNA复制两条链均作为模板,进行半保留,所以5次后得到的子代DNA分子数为25=32个。(4)PCRDNA分子进行扩增,所以可用于遗传疾病的诊断、刑侦破案、古生物学、克隆和DNA序列测定等方面。答案:(1)磷酸基团3'耐高温的TaqDNA聚合 选择培养病原体鉴定、遗传学诊断、免疫学研究、癌探索及治疗、刑侦破案、古生物学、克隆和DNA序列测定等定量测定;从原先只能扩增几个kb(千碱基对)的到目前已能扩增长达几十个kb的DNA片段。现在PCR技术已有十几种之多。它不仅可用于分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊断等。PCRDNA、引物、脱氧核糖核DNA聚合酶、ATP等条件,其简要过程如图所示。请分析回答下列有关问题。PCR技术能把某一DNA片段进行扩增,依据的原理 。PCR与体内的不同之处主要表现在环境温度的不同,在PCR中先用94℃高温处理的目的 ,而这一过在细胞内是通过 若将1个DNA分子拷贝10次,则需要在缓冲液中至少加 个引物DNA子链的方向 ,这是由。PCR技术不仅为遗传病的诊断带来了便利,而且改进了检测细菌和的方法。若要检测一个人是否了,你认为可以用PCR扩增血液中的 解析:PCR技术又称多聚酶链式反应,扩增过遵循的原理就是DNA;分析得出新合成的DNA分子中,A=T,C=G,这个事实说明DNA分子的合成遵循碱基互补配对原则;在PCR中选用94℃高温处理的目的是在解旋酶的催化下将DNA分子中的氢键断裂,两条链解开,使DNA分子变性。引物是一种单链DNA或RNA分子,它能与解开的DNA母链的3'端结合,为DNA聚合酶提供吸附位点,使DNA聚合酶从引物的3'端开始连接脱氧核糖核苷酸,从而决定了DNA子链的方向是从5'端到3'端。在DNA分子扩增时,需要两种引物,由于新合成的子链都需要
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