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文档简介

溶血性链球菌检验革兰氏阳性球菌检样处理增菌培养检样处理固体样品：25g（电子天平）液体样品：25mL（25mL吸量管）+

225mL生理盐水（量筒），混匀。注意：液体样品先用无菌NaOH或HCl调节PH至7.0。稀释瓶或具塞广口瓶增菌取上述混合液5mL（吸量管）

50mL葡萄糖肉浸液肉汤培养（于36℃±1℃培养24h）葡萄糖肉浸液肉汤培养

1.取已培养好的增菌液1环血平板划线培养（于36℃±1℃培养24h）葡萄糖肉浸液肉汤（阳性）血平板平板划线示意图开始处开始处

2.取有典型菌落的阳性血平板（在放阳性物品处）灰白色，半透明或不透明，表面光滑，周围有透明圈血平板划线（分纯）血平板涂布贴杆菌肽试纸（2~3片）革兰氏染色典型菌落（同一菌落）于36℃±1℃培养18~24h于36℃±1℃培养18~24h在无菌室中固定，到微生物实训室染色革兰氏染色步骤：涂片——火焰固定——结晶紫初染——水洗——碘液媒染——乙醇脱色——水洗——吸干——番红或沙黄复染——水洗——干燥——镜检涂片：在载玻片中央滴一滴生理盐水，用无菌操作法挑取菌种于生理盐水中，调匀并涂成薄膜。注意：生理盐水不宜过多；涂片必须均匀。火焰固定：载玻片通过火焰1~2次固定，不可过热，以载玻片不烫手背为宜。结晶紫初染：涂片置于水平位置。涂片薄膜上加结晶紫1滴，染色1min。水洗：用自来水冲洗至冲下的水无色为止。碘液媒染：加碘液媒染1min，然后用水冲洗至冲下的水呈无色为止。乙醇脱色：用吸水纸将载玻片上的水吸净，用95%的乙醇滴于涂片薄膜上，滴洗至流出的乙醇不出现紫色为止，大约需要20~30s。立即用自来水冲洗乙醇约30s，用吸水纸吸干水分。番红或沙黄复染：在涂片薄膜上滴加番红1滴，染色1~2min。水洗：用水冲洗至冲下的水呈无色为止。干燥：于室温下自然干燥。观察：干燥后，于涂片薄膜上滴香柏油1滴，置油镜下观察。结果:

革兰氏阳性菌——紫色；

革兰氏阴性菌——红色。杆菌肽敏感试验结果：试纸周围有抑菌带出现为阳性血平板纯化结果：

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