基础化学分光光度法(年制)

新浪娱乐讯9月1日上午9:30柯震东前往台北地检署报道，他全程低头媒体围堵寸步难行。柯震东今日将进行毛发、尿液的检测。

第十三章

紫外-可见分光光度法

一、物质的吸收光谱物质对光的选择性吸收物质的吸收光谱二、分光光度法的基本原理透光率和吸光度Lambert-Beer定律定量分析滴定分析仪器分析紫外-可见分光光度法

酸碱滴定氧化还原滴定分光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立起来的一种分析方法。目视比色法一、紫外-可见分光光度法定义

研究物质在紫外、可见光区的分子吸收光谱

的分析方法称为紫外-可见分光光度法，又称为紫外-可见(分子)吸收光谱法。

吸收光的波长范围：200-800nm(1)紫外光区:200-400nm(2)可见光区:400-800nm若用一连续的电磁辐射照射样品分子，将照射前后的光强度变化转变为电信号并记录下来，就可得到光强度变化对波长的关系曲线，即为分子吸收光谱。跃迁：电子受激发，从低能级转移到高能级的过程。分子只有选择性的吸收(hν=△E)某些波长（频率）的光才能由较低的能级跃迁到较高能级上。三、紫外-可见吸收光谱的产生二、紫外-可见分光光度法特点灵敏度较高，10-6～10-5mol/L

相对误差，2～5％有较好的选择性适当地选择测量条件，可在多种组分共存的体系中测定一种组分操作简单，价格低，分析速度较快应用广泛二、物质对光的选择性吸收白光通过棱镜色散出红、橙、黄、绿、蓝、紫等光单色光：单一波长的光复合光：由不同波长的光组合而成的光光的互补：若两种不同颜色的单色光按一定比例混合得到白光，称这两种单色光为互补色光，这种现象称为光的互补。

有色溶液的颜色是它所选择吸收光的互补色，吸收越多颜色越深。物质的吸收光谱（吸收曲线）测量某物质对不同波长单色光的吸收程度，以波长（）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，绘制吸光度随波长的变化可得一曲线，此曲线即为吸收光谱或吸收曲线。吸收曲线的讨论KMnO4溶液对不同波长的光吸收程度不同，在525nm的光吸收程度最大——λmax同一物质的吸收曲线是特征的。不同浓度的KMnO4溶液吸收曲线相似，λmax不变。不同物质吸收曲线形状不同，可以作为物质定性分析的依据。不同浓度的同一种物质，在某一定波长下吸光度A有差异，在λmax处吸光度A的差异最大。此特性可作为物质定量分析的依据。在λmax处吸光度随浓度变化的幅度最大，所以测定最灵敏吸收曲线是定量分析中选择入射光波长的重要依据。312I0I1I0I2I2<

I1I0I3I3<

I2<

I1T1=I1I0T2=I2I0T3=I3I0T3<

T2<

T1吸光度A=-lgT=lgI0ItA3>

A2>

A1T=ItI0透光率T=ItI0透光率第二节紫外-可见分光光度法的基本原理一、透光率（透光度）和吸收度①透光率T定义：T取值为0.0%~100.0%T=0.0%：光全吸收T=100.0%：光全透过②吸光度（吸收度）AT=ItI0×100%显然，T↑，溶液吸收度↓；T↓，溶液吸收度↑。即透光率T反映溶液对光吸收程度，通常用1/T反映吸光度。定义：A=lg1T=-lgT=lgI0ItA=-lgT,T=10-AtI0=It+Ia

+Ir吸收光反射光透过光

Ia

③T与A关系：IrA∝1/T，T=0，A=∞，T=100%，A=0二、光的吸收定律朗伯(Lambert)和比尔(Beer)分别于1760年和1852年研究吸光度Ａ与溶液厚度Ｌ和其浓度Ｃ的定量关系：朗伯定律：A=k1×b比尔定律：A=k1×bA=kbc一束平行单色光通过一均匀、非散射的吸光物质溶液时，在入射光的波长、强度以及溶液温度等保持不变时，该溶液的吸光度A与其浓度C及液层厚度L的乘积成正比。①入射光为单色光，适用于可见、红外、紫外光。②均匀、无散射溶液。③吸光度A具有加和性。Aa+b+c=Aa

+Ab

+Ac朗伯-比尔定律:A=lg1T=-lgT=lgI0It透光率T反映溶液对光吸收程度，T↑，溶液吸收度↓；T↓，溶液吸收度↑A=kbc朗伯-比尔定律c：mol/L

K

摩尔吸光系数,L·mol–1·cm-1

c：g/L

K

a

质量吸光系数，

L·g–1·cm-1

c：g/100mL

K

相互关系K

比吸光系数

e=aMBT=ItI0透光率吸光度A=-lgT=lgI0ItT=10-A=10-kbc分光光度法计算公式Aa+b+c=Aa

+Ab

+Ac第三节紫外-可见分光光度法

一、分光光度计光源单色器样品室检测器显示1.光源在紫外可见分光光度计中，常用的光源有两类：可见光光源，如钨灯和卤钨灯；紫外光源，如氢灯和氘灯。

2.单色器

单色器以棱镜或光栅分光，提供单色光。

3.吸收池样品室放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池两种。在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池。4.检测器利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，如：光电池、光电管、光电二极管或光电倍增管(目前常用)。5.结果显示记录系统检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处理一、定性分析与定量分析法定性分析基础定量分析基础物质对光的选择吸收ABA

在一定的实验条件下，物质对光的吸收与物质的浓度成正比。A

C增大max标准曲线法定量分析法通过零点的直线示例

芦丁含量测定0.710mg/25mL偏离朗伯-比尔定律的因素朗伯-比尔定律：A=kCL依据Beer定律，A与C关系应为经过原点的直线（一）化学因素（二）光学因素

偏离Beer定律的主要因素表现为以下两个方面：该定律适用于稀溶液，溶质的离解、缔合、互变异构及化学变化也会引起偏离。尤其浓度过高(>0.01mol/L)会使C与A关系偏离定律：①粒子相互作用加强，吸光能力改变。②溶液对光的折射率显著改变。（二）光学因素1．非单色光的影响：入射