GB/T 35515-2017化学品鱼类雌激素、雄激素和芳香酶抑制活性试验方法

ICS133001302040

;

A80...

中华人民共和国国家标准

GB/T35515—2017

化学品鱼类雌激素雄激素和芳香酶

、

抑制活性试验方法

Chemicals—Fishassaforoestroenicandandroenicactivit

yggy,

andaromataseinhibition

2017-12-29发布2018-07-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T35515—2017

目次

前言

…………………………Ⅲ

引言

…………………………Ⅳ

范围

1………………………1

术语定义和缩略语

2、………………………1

方法概述

3…………………1

质量保证与质量控制

4……………………2

仪器设备

5…………………2

试验准备

6…………………2

试验用水

6.1……………2

鱼的驯养

6.2……………2

预暴露和鱼的选择

6.3…………………3

试验程序

7…………………3

一般说明

7.1……………3

试验浓度的选择

7.2……………………3

试验过程

8…………………3

受试鱼的选择与称重

8.1………………3

暴露条件

8.2……………3

时间

8.2.1……………3

驯养

8.2.2……………3

灯光和温度

8.2.3……………………4

测试频率

8.3……………4

观察

8.4…………………4

死亡率

8.4.1…………………………4

行为和表观

8.4.2……………………4

鱼的安乐死

8.4.3……………………4

第二性征的观察

8.4.4………………4

卵黄蛋白原测定

8.4.5………………5

数据和报告

9………………5

采用方差分析对生物标志物响应进行评价

9.1(ANOVA)…………5

试验结果报告

9.2………………………5

附录资料性附录进行卵黄蛋白原分析的样品收集推荐程序

A()……7

附录资料性附录检测特定内分泌活性物质对黑头呆鱼和青鳉的第二性征的评估

B()……………16

附录资料性附录鱼类内分泌筛选试验的实验条件

C()………………21

附录资料性附录斑马鱼和黑头呆鱼的产卵基板

D()…………………23

附录资料性附录可接受的稀释水的一些化学特性

E()………………25

Ⅰ

GB/T35515—2017

附录资料性附录卵黄蛋白原加标和批间标准品分析

F()……………26

附录资料性附录统计分析流程

G()……………………27

附录规范性附录试验结果阐释和可接受性的标准

H()………………28

参考文献

……………………29

图用剪刀沿着胸鳍前剪开

A.1……………8

图用剪刀沿着腹部中线伸入腹部离肛门头部大约处

A.22mm………9

图采用手术钳撑开腹壁暴露肝脏以及其他内部器官或者将腹壁横向固定

A.3,()…9

图采用手术钳缓慢分离和切除肝脏

A.4………………10

图采用手术钳缓慢摘取肠道

A.5………………………10

图肠道以及任何肠系膜的附属物的终端采用剪刀切割

A.6…………11

图雌鱼对于雌鱼过程相同

A.7()………………………11

图完成整个过程

A.8……………………12

图斑马鱼鱼头鱼尾的切分

A.9…………15

图黑头呆鱼珠星的数目和尺寸

B.1……………………17

图臀鳍形状和尺寸的性别差异

B.2……………………19

图臀鳍线的结合板上的突起过程

B.3…………………20

图带有切割点的鱼身照片

B.4…………20

图斑马鱼产卵基板

D.1…………………23

图黑头呆鱼产卵基板

D.2………………24

图统计分析流程图

G.1…………………27

表黑头呆鱼珠星模板

B.1………………18

表鱼类内分泌筛选试验的实验条件

C.1………………21

表可接受的稀释水的一些化学特性

E.1………………25

Ⅱ

GB/T35515—2017

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准技术内容与经济合作与发展组织

(OrganizationforEconomicCooperationandDevelopment,

测试导则年鱼试验雌激素雄激素和芳香酶抑制活性短期筛选试验英文版

OECD)230(2009)《21d:、》()

一致

。

本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会提出并归口

(SAC/TC251)。

本标准起草单位中国检验检疫科学研究院广东省微生物分析检测中心上海市检测中心宁波出

:、、、

入境检验检疫局

。

本标准主要起草人崔媛陈会明曾国驱李海山谢文平梅承芳殷浩文梁艺怀陈小青

:、、、、、、、、。

Ⅲ

GB/T35515—2017

引言

本试验方法描述了一种体内筛选试验方法将性成熟的雄鱼和处于产卵期的雌鱼一起暴露于化学

,

品中在暴露期结束时对雄鱼和雌鱼的生物标志物终点进行测定作为测试化学品的雌激

21d。21d,,

素芳香酶抑制或雄激素活性指标这些测试终点包括卵黄蛋白原和第二性征对黑头呆鱼日本青鳉

、。。、

和斑马鱼可进行卵黄蛋白原测定而第二性征只能在黑头呆鱼和日本青鳉上测定

,。

卵黄蛋白原通常受循环的内源性雌激素的刺激由雌性卵生脊椎动物的肝脏产生卵黄蛋白原是

,。

卵黄蛋白的前体一旦在肝脏中产生由血流进入卵巢被发育中的卵吸收并修饰卵黄蛋白原在未成

,,,。

熟的雌鱼和雄鱼的血浆中几乎检测不到因为它们缺乏足够的循环雌激素但在受外源性的雌激素的刺

,,

激下肝脏能够合成并分泌卵黄蛋白原

,。

卵黄蛋白原的测定能够检测不同雌激素作用模式的化学品对雌激素类化学品的检测有可能通过

,,

测量雄鱼的卵黄蛋白原的产生在雌性体内的雌激素循环水平的降低例如通过抑制转化内源性雄激

。,

素为天然雌激素雌二醇的芳香酶会引起卵黄蛋白原水平的降低这一点被用来检测具有芳香酶

17β-,,

抑制性质的化学品

。

采用已建立标准化的常规检测方法采用免疫化学的物种特异性的酶联免疫吸收分析方

。(ELISA)

法收集黑头呆鱼的血液斑马鱼的血液或头尾的匀浆以及青鳉的肝脏作为测定的样品对于

,、/,VTG。

青鳉在血液中测量的与肝脏中所测具有良好的相关性附录提供了对于卵黄蛋白原分析的

,VTG。A

样品收集的推荐程序卵黄蛋白原可采用不同的试验方法但都得基于验证的物种特异性

。,ELISA

方法

。

特定物种雄鱼的第二性征是可观察的与内源性雄激素循环水平呈定量响应性这些特性在黑头呆

,,

鱼和青鳉上能体现但斑马鱼没有体现因为斑马鱼不具备可定量的第二性征

,,。

对于黑头呆鱼外源受试物暴露的主要指标是位于雌鱼唇部珠星的数量对于青鳉乳突物的数目

,。,

组成了雌鱼的外源性暴露于雄激素受试物的主要标志物附录分别说明了对于黑头呆鱼和青鳉的

。B

性特征评价的过程

。

Ⅳ

GB/T35515—2017

化学品鱼类雌激素雄激素和芳香酶

、

抑制活性试验方法

1范围

本标准规定了化学品鱼类雌激素雄激素和芳香酶抑制活性试验方法的方法概述质量保证与质量

、、

控制仪器设备试验准备试验程序试验过程数据和报告

、、、、、。

本标准适用于化学品鱼类雌激素雄激素和芳香酶抑制活性试验

、。

2术语定义和缩略语

、

21术语和定义

.

下列术语和定义适用于本文件

。

211

..

承载率loadingrate

单位体积水中鱼的湿重

。

212

..

承载密度stockingdensity

单位体积水中鱼的数目

。

213

..

卵黄蛋白原vitellogeninVTG

;

一种磷脂糖蛋白蛋黄蛋白的前体一般出现于所有卵生动物的性成熟雌性个体

,,。

214

..

最大耐受浓度maximumtoleratedconcentrationMTC

;

受试物引起小于死亡率的最高试验浓度

10%