GB/T 31808-2015向日葵白锈病菌检疫鉴定方法

ICS6502001

B16..

中华人民共和国国家标准

GB/T31808—2015

向日葵白锈病菌检疫鉴定方法

DetectionandidentificationofAlbugotragopogonisPers.S.F.Gra

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2015-07-03发布2015-11-27实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

中华人民共和国

国家标准

向日葵白锈病菌检疫鉴定方法

GB/T31808—2015

*

中国标准出版社出版发行

北京市朝阳区和平里西街甲号

2(100029)

北京市西城区三里河北街号

16(100045)

网址

:

服务热线

:400-168-0010

年月第一版

20159

*

书号

:155066·1-49963

版权专有侵权必究

GB/T31808—2015

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由全国植物检疫标准化技术委员会提出并归口

(SAC/TC271)。

本标准起草单位中华人民共和国新疆出入境检验检疫局新疆生产建设兵团农业技术推广总站

:、。

本标准主要起草人张祥林王翀赵冰梅王文正张江国乾义柯

:、、、、、。

Ⅰ

GB/T31808—2015

向日葵白锈病菌检疫鉴定方法

1范围

本标准规定了向日葵白锈病菌的检疫鉴定方法

。

本标准适用于向日葵种子和植株中向日葵白锈病菌的检疫和鉴定

。

2仪器和用具

生物显微镜体视显微镜超净工作台高压灭菌器高速离心机制冰机全温水浴扩增仪

、、、、、、、PCR、

电泳仪凝胶成像仪往复式振荡器培养皿烧杯酒精灯三角瓶载玻片盖玻片镊子剪刀量筒

、、、、、、、、、、、、

吸管

。

3试剂

乳酸苯酚甘油棉蓝藏红花次氯酸钠十二烷基硫酸钠三羟甲基氨基甲烷盐

、、、、、(NaClO),(SDS),-

酸氯化镁乙二胺四乙酸四钠盐氢氧化钠醋酸钠

(Tris-HCl),(MgCl2),(EDTA),(NaOH),(NaOAc),

氯化钾十六烷基三甲基溴化铵无水乙醇苯酚三氯甲烷

(KCl),(CTAB),(Ethanol),(Phenol),(Chloro-

异丙醇异戊醇核酸染料蛋白酶Taq

form),(Isopropanol),(Isoamylalcohol),(SYBRGreenⅠ),K,

聚合酶Taq脱氧核糖核苷三磷酸分子量标记

DNA(DNApolymerase),(dNTP),DNA(DNA

电泳缓冲液

Marker),TAE(TAEbuffer)。

4检疫鉴定方法

41田间症状检查

.

在向日葵现蕾中期至盛花期到向日葵隔离种植区或大田进行调查观察向日葵植株发病情况

,,。

42种子带菌检查

.

选取瘪小的向日葵种子置于干净三角瓶中加入清水和少量洗衣粉在往复式振荡器

5g,,200mL,

上振荡倒去洗涤液再加入等量的清水重复洗涤次次直至洗净向日葵种子上的种衣剂

10min,,,3~5,

如无种子包衣可省略此步晾干剥开向日葵种子将果皮和种仁一起放入装有乳酚油的烧杯中酒

(,),,,,

精灯下煮沸冷却后在解剖镜下用镊子剥取内果皮和种皮放入一干净培养皿中加入少量棉蓝

3min,,,-

藏红花染色液静置左右用乙醇清洗后用镊子夹取内果皮或种皮置于载玻片上加一滴乳酚

,5h,95%,,

油作浮载剂盖片镜检

,。

43病原菌形态观察

.

用干净刀片刮取少量向日葵病叶背面或叶柄花盘等的白色疱斑中的病菌置于载玻片上在生

(、),,

物显微镜下观察该病菌形态特征记录孢囊梗孢子囊卵孢子的形状及大小

,、、。

将制备的向日葵内果皮或种皮玻片置于生物显微镜下观察病