参考文稿讲稿

24卷6200512

中国生物医学工程学

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No廖中凯 周建业高中国医学中国协和医学阜外心血管病医院瓣膜研究室,摘要:目的观察脱细胞处理对牛心包体内生物相容性及钙化的影响并与戊二醛处理的牛心包进行比较材料和方法对新鲜牛心包随机分为三组,A、戊二醛处理组新鲜牛心包采0.5%的戊二醛进行处理B、新鲜牛心包组新鲜牛心包保存于抗生素液中C、脱细胞组新鲜牛心包酶去污剂联合脱细胞后保存于抗生素液中。上述处理后的牛心包经细菌培养,显示无细菌生长后,植入雄性小鼠皮下三周观察炎性浸润及钙化情况。用vonKossa钙染色检查进行定性分析原子吸收光谱检查进行钙含量定量分析。同时体外对三组牛心包进行力学和热皱缩温度进试。结果 三组间炎性浸润程度明显不同,0.5%的戊二醛处理组钙化程度明显增高,每克干72mP001,(1.41mgg干重)间钙化程度方面亦有显著统计学意义P<0.001)。组织学钙染色光镜下检查显示三组间黑色颗粒有明显差异,支持三组间钙含量定量结果的差异。戊二醛处理组的力学性能与优于新鲜组和脱细胞处理组,热皱缩温度高于新鲜组和脱细胞处理组。结论 新鲜牛心包脱细胞处理后钙化显著降低,免疫源性降低,有很好的生:脱细PericardiumwithDifferentTreatmentMethodsLIAOZhongKaiHUShengShou＊ZHOUJianYeGAOeatentsne,SciencesandPekingUnionMedicalCollege,Beijing00037)ObjectiveToevaluate Mteilsthreegroups,AgltaadeydetreatedgroupBfrehgroupC:accellulargroupAterconfirmednoinvivocalcificationTheywereexplantedthreeweekslater,thenusedvonKossastainandatomicabsorbentspectrumtoyzecalcificationqualitativelyandtativelyThemechanicpropertiesofthreegroupswereevauedesultsInflammatoryinfiltrationwasdifferentamongthreegroupsCalcfiaondifferenceswereCalcimTonusonfamatoryhro ＊＊通讯作者:Ealhss@63bj 中国生物医学工程学 24a号 文献标识码 文章编号02588021(2005)060747引牛心包材料在临应用广泛。例如作为血管补片、心脏瓣膜以及疝修补材料等。目前临床应用源性并防止酶对其降解,然而由于戊二醛的细胞毒性,导致牛心包材料在植入体内后不能形成有生物活性的组织,最终导致移植物衰竭和钙化。本研究响及机制的探讨,并评价其生物相容性。材料和牛心包与处从屠宰场新鲜的牛心包,冰盐水保存,8h～10h后剔除心包表面残留的脂肪及其他结缔组05B组浸泡于抗生素青霉素、链霉素、丁胺卡那霉素、B)溶液中C合脱细胞处理1。片上随机截取10个试条,然后在SANSCMT2502型拉力机上做拉伸实验。测试条件如下:25020m抗拉负荷抗拉强度和伸长率等指标。取650mm3mm的试条,以蒸馏水为介质,在GJ9D1型皮革收缩温度测定仪上测定其热皱缩温度。温度上升速度2℃min。采用小鼠,均为雄性,3周左右,体重25g～30g15只。分为A、B、C三组,A组4只,B组5只,组6只。将安定等体积混合,按氯胺酮30mgkg体重注入小鼠腹腔进行麻醉,在小鼠背部皮下植入心包片,片,每片约1010cm2

大小,组手术后一只,余14只小鼠饲养三周然后直接断颈处死小鼠,取出植入的牛心包片。标本检标本送HE染色及组织学钙vonKossa染色处9040h烘干标本精确称11V后过氧化氢充分氧化,溶液定容后采用日立Z800进行钙含量定量测定。结组织学HE染色检查结果显示小鼠机体对戊二醛处理A组牛心包的浸润程度最轻然后是脱细胞牛心包组C组,而新鲜组B组的浸润程度1AC1牛心包小鼠3HE染色100)

组织学钙染色光镜下显示0.5%的戊二醛处理A2AB、C)。2牛心包小鼠3vonKossa染色100)05%的戊二醛处理组A组每克干重牛心包平均含钙量71.2mg,较其他两组有明显差异P<001,新鲜牛心包组B组和脱细胞组C组间钙P.01,1钙元素原子吸收光谱单位mgg干重分 x 7202 220 0 =87 P<0=9 P<0=5 P<06 廖中凯等不同方法处理的牛心包生物相容性和钙化结果分

体外力学性能BC比较其抗拉负荷、抗拉强度、伸长率等无显著性差P00,A显著性差异见表2。2不同方法处理牛心包力学性能比较x±s,n10)分ABC抗拉负荷N2423894283Mp20263324323伸长453883860937024 A86068006C67805℃。BC两组无显著性差异。A组与BC两组相比较有显著性差异P001。讨牛心包采用戊二醛处理,产生交联以减少宿主移植物的反应,包括减少抗原性并改善移植物的使用2。由于其细胞毒性导致在植入体内后不能形成有生物活性的组织,最终导致移植物衰竭和钙化,一些患者因此不得不再次进行手术,为了解决移植物衰竭和钙化的问题,国内外学者对此进行了有益的探索。其一是戊二醛处理的牛心包进行减毒处理,戊二醛含量,并在其上种植血管内皮细胞以达到形成有活性的生物组织,取得了一定进展仍有待长期观察;同时对钙化的机制进行了研究,有些学者认为钙化与氨基酸羧基游离端有一定关系。另外通过对内纤维间隙及细胞是钙化的早期部位3。氨基酸氨基问题。钙化也是组织经戊二醛处理后形成的死细胞不能维持细胞内低钙水平的直接结果,最终在富含磷脂的细胞膜和它们的残余物处形成钙磷结晶,胶原和弹性蛋白也开始钙化。组织的钙化有宿主、移植物和机械作用这些复杂的因素参与。在缺乏结构基质生理修复机制的情况下,非钙化的降解也作

他方法处理牛心包来解决移植物衰竭和钙化问题,例如脱细胞方法,光氧化方法等等。本研究采用酶去污剂联合脱细胞处理牛心包,主要是因为脱细胞处理方其免疫源性而保留了牛心包本身的纤维结构成分,而纤维结构成分是牛心包力学性能的重要组成部分,因此脱细胞并不对牛心包的力学强度产生明显影响,实验结果也显示新鲜牛心包脱细胞二醛处理后力学性能明显增强,主要是通过增加6。胶原蛋白残基如氨基端与羧基端在戊二醛作用下发生化学交联反应,胶原纤维彼此联接后力学性能得到了增强。从这次实验HE染色的结果来看,小鼠机体对戊二醛处理A组牛心包的浸润程度最轻,然后是脱细胞牛心包组C组,而新鲜组B组,可能与牛心包戊二醛处理后胶原纤维产生交联后组织间隙变小,炎症细胞很难浸润渗透到牛心包组织内部,而且残留的醛基有细胞毒性,机体的细胞很难在戊二醛处理后的牛心包内存活;脱细胞处理后去除了细胞成分,细胞上的抗原也被除去,因而机体对其炎症反应程度减轻,同时炎症细胞以外的细胞也可以进入到牛心包组织内部,而新鲜的牛心包因有细胞成分存在,有很强的免疫源性,可以见到明显的淋巴细胞,浸润程度也最重。钙化A组高于脱细胞牛心包组C组及新鲜组B组,脱细胞过程中去除了细胞膜成分细胞膜的磷脂可以与钙结合形成钙盐结晶因此钙化程度减少可能与之有关同时原子吸收光谱的钙含量结果亦有显著的差异这也说明了定量和定性结果具有一致性。结新鲜牛心包脱细胞处理后体内钙化显著降低,免疫源性降低有很好的生物相容性。参考[]周建业,,,等.牛心包材料脱细胞的初步究[J].中国循环,99143):76.[2]AranL,LeeC,EarlesKetalAnnvrobovnepercardalheocopablyesngsyse[J]JHearValveDs998May,7

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