标准解读
《GB/T 27517-2011 鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性与经典毒株复合RT-PCR方法》是一项国家标准，旨在通过分子生物学技术——逆转录聚合酶链反应（RT-PCR），区分猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）中的高致病性株和经典株。该标准适用于兽医实验室、研究机构以及相关检测单位，在进行猪繁殖与呼吸综合征病毒监测或诊断时作为参考依据。
根据文档内容，本标准详细描述了实验所需材料及其规格要求、样本采集处理流程、RNA提取步骤、引物设计原则、扩增条件设定、产物分析方法等关键环节。其中特别强调了使用特定引物对不同类型的PRRSV进行特异性扩增的重要性，以便于后续通过凝胶电泳等方式观察到差异化的条带模式来实现准确鉴别。
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- 现行
- 正在执行有效
- 2011-11-21 颁布
- 2012-03-01 实施
文档简介
ICS11220
B41.
中华人民共和国国家标准
GB/T27517—2011
鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性
与经典毒株复合RT-PCR方法
AmultiplexRT-PCRmethodtodifferentiatethehighly
pathogenicandclassicalporcinereproductiveand
respiratorysyndromevirus
2011-11-21发布2012-03-01实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布
中国国家标准化管理委员会
中华人民共和国
国家标准
鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性
与经典毒株复合RT-PCR方法
GB/T27517—2011
*
中国标准出版社出版发行
北京市朝阳区和平里西街甲号
2(100013)
北京市西城区三里河北街号
16(100045)
网址
:
服务热线
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年月第一版
20122
*
书号
:155066·1-44035
版权专有侵权必究
GB/T27517—2011
前言
本标准按照给出的规则起草
GB/T1.1—2009。
本标准由中华人民共和国农业部提出
。
本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口
(SAC/TC181)。
本标准起草单位河南省动物疫病预防控制中心
:。
本标准主要起草人吴志明闫若潜张志凌张健荆汝顶刘光辉赵明军曹杰伟钱勇程俊贞
:、、、、、、、、、、
赵雪丽张盼
、。
Ⅰ
GB/T27517—2011
鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性
与经典毒株复合RT-PCR方法
1范围
本标准规定了检测以基因组非结构蛋白编码区缺失个氨基酸为特征的猪繁殖与呼吸综
Nsp230
合征病毒高致病性毒株与非缺失个氨基酸的猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株复合鉴别
30RT-PCR
诊断方法
。
本标准适用于疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒感染猪血清及临床病料等样品中的病毒核
(PRRSV)
酸检测
。
2试剂和仪器设备
除另有规定外所用生化试剂均为分析纯提取所用试剂均应使用无酶的容器进行
,。RNARNA
分装
。
21试剂
.
211拭子悬液见附录组织悬液见附录以上试剂常温保存
..(A),(A),。
212阿氏液见附录裂解液核酸电泳缓冲液见附录氯仿
..(A),(TriZol),1×TAE(A),,0.01mol/L
的见附录处理水见附录以上试剂保存
(pH7.2)PBS(A),DEPC(A),4℃。
213异丙醇乙醇分子量标准电泳上样缓冲液以上试剂保存
..,75%,DNA,6×,-20℃。
214阳性对照阴性对照见附录
..、(A)。
215复合扩增用上下游引物序列参见附录
..RT-PCR、B。
216鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性与经典毒株复合反应体系组成说明及使用
..RT-PCR、
注意事项参见附录
C。
22仪器设备
.
扩增仪高速冷冻离心机离心力在g以上核酸电泳仪和水平电泳槽恒温水浴锅
PCR,(12000),,,
冰箱冰箱单道微量移液器
2℃~8℃,-20℃,(0.5μL~10μL;2μL~20μL;20μL~200μL;100μL~
组织匀浆器或研钵凝胶成像系统或紫外透射仪真空干燥器非必备
1000μL),,(),()。
3样品的采集处理存放及运输
、、
31样品采集及处理过程的注意事项
.
采样过程中样本不得交叉污染采样及样品处理过程中应戴一次性手套口罩帽子
,、、。
32样品的采集及处理
.
321拭子样品
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