胶质细胞-明胶酶谱法protocal_第1页
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明胶酶谱相关溶液及试剂的配(1)5%浓缩胶(现配现用30%1mol/LTris-HCL(10%(2)10%分离胶(现配现用10%1%(3)4×上样缓冲液（4oC保存0.32%Tris-50%3.2、5×Tris-甘氨酸电极缓冲液：三蒸水配制，其中含0.125mol/LTris-HCL1.25mol/L0.5%SDS，完全溶解后调pH8.3，室温保存，用时5倍。2.5%TritonX–100、50mmol/LTris-HCL5mmol/LCaCl21μmol/LZnCl2，完全溶解后调pH7.6、漂洗液：三蒸水配制，其中含50mmol/LTris-HCL、5mmol/LCaCl21μmol/LZnCl2，完全溶解后调pH7.650mmol/LTris-HCL5mmol/CaCl21μmol/LZnCl20.02%Brij-35，完全溶解后调pH7.6，室温保存。0.05%R-250、30%10%乙、脱色液ABC30%20%、10%10%、10%、5%，混匀后室温保存。明胶酶谱法实验、取6孔板中对数生长期的肿瘤细胞用无RPMI1640培养基冲洗3次，每孔中加入1ml无RPMI1640培养基，实验分组，加入干预因素，37oC、5%CO224h。后–80°C保存备用。、BCA样品上样的蛋白质量相同4×上样缓冲液5ul混合总体积不足20ul用、20ul/孔上样，4°C、100VSDS电泳（我放在一个盆子里面，72KD92KD合适大小的凝胶放置于洗脱液中振4次（当然需要蛋白分子marker了啊15min。220min37°C48h、染色液中摇震荡染色3h、将凝胶依次置于脱色液A、B、C中，在摇分别震荡脱色0.5h、1h、72KD92KD处为白色条带，照相，GGTCCCCCCACTGCTGGCCCTT

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