吸光光度法测铁含量

吸光光度法:基于被测物质的分子对光具有选择吸收的特性而建立的分析方法。吸光光度法1.灵敏度高测定含量可低至10-4～10-6%

；

2.准确度好相对误差一般为2～5%

；3.快速简便

4.应用广泛特点:光的电磁波性质射线x射线紫外光红外光微波无线电波10-2nm10nm102nm104nm0.1cm10cm103cm105cm可见光：400~750nmX射线:0.1~10nm远紫外：10~200nm近紫外：200~400nm红外:750~106nm微波：0.1~100cm无线电波：1~1000m物质对光的选择性吸收例：

KMnO4溶液的光吸收曲线溶液颜色—紫红色525nm

（max=525nm，对绿光吸收最强）不同物质吸收光谱的形状以及max不同——定性分析的基础同一物质，浓度不同时，吸收光谱的形状相同，Amax不同——定量分析的基础溶液的颜色与光的选择性吸收透光率定义：全部吸收T=0.0%全部透射T=100.0%朗伯-比耳定律

b～cmc～g·

L–1或mol·

L–1

K

比例常数入射光波长物质的性质温度c：mol·

L–1

K

摩尔吸光系数

L·mol–1·cm-1c：g·L–1K

a吸光系数a

L·g–1·cm-1A＝bc工作曲线法c1c2c3c4c5cxA1A2A3A4A5Ax标准系列未知试液

00.40.81.21.6

c(ug/mL)A*0.800.600.400.200.00Axcx朗伯-比尔定律的分析应用吸光光度法测量条件的选择问：水样中微量铁含量的测定?(1)显色剂，显色条件（用量、酸度、温度、时间）、干扰离子(2)最佳测量波长（吸收曲线）(3)参比溶液(4)吸光度范围(5)工作曲线，(6)求未知样品含量332+桔红色max邻二氮菲一、显色剂及其影响因素

M+R⇌MR(被测组分)(显色剂)(有色化合物)

酸度曲线

显色剂用量曲线

温度-时间曲线

pHT1(℃)T2(℃)t(min)A有机溶剂离子的干扰等其它条件影响一、显色剂及其影响因素二、测量波长的选择无干扰，选择maxAA有干扰“吸收最大干扰最小”原则作用：调节仪器零点（A=0即T=100%），以消除溶剂、试液、试剂或比色皿等对入射光的反射或吸收带来的测量误差。

三.参比溶液的选择参比溶液的选择：

显色剂被测试液参比溶液1、无色无色溶剂（溶剂空白）2、有色无色不加试样的溶液(试剂空白)3、无色有色不加显色剂试液(试液空白)4、有色有色掩蔽被测组分后试液光度分析法及其仪器I0参比It样品入射光

I0透射光

It参比、样品溶液被测溶液的吸光度值在0.2～0.8范围内，使测定结果有较高的准确度，过大或过小应予以调节。而当A=0.434或T%=36.8时，测定的误差最小。为此可从以下三方面加以控制：一是改变试样的称样量，或采用稀释、浓缩、富集等方法来控制被测溶液的浓度；二是选择适宜厚度的吸收池；三是选择适当的显色反应和参比溶液。四、吸光度范围美国UNICO尤尼柯7200可见分光光度计

实验十五邻二氮菲吸光光度法测定铁的条件实验及

测铁含量一、目的要求：1.

掌握吸量管和分光光度计的使用方法2.掌握邻二氮菲吸光光度法测定铁的原理和方法3.掌握吸收曲线和标准曲线的绘制方法及其应用4.学会利用标准曲线求算摩尔吸光系数ε与待测液浓度的方法

朗伯-比耳定律:A=Kbc

A=εbcε：摩尔吸光系数(L·mol-1·cm-1)

pH2-9时，Fe2+与邻二氮菲生成稳定的橘红色络合物：采用工作曲线法求得Fe2+浓度。

Fe2++3phen=[(phen)3Fe]2+

其lgβ3=21.3；ε508=1.1×104L·mol-1·cm-1;λmax=510nm

当铁为三价时，用盐酸羟胺(NH2OH·HCl)还原

Fe3++2NH2OH·HCl=2Fe2++N2↑+4H++2H2O+2Cl-

实验条件：

①显色剂用量、溶液酸度、显色时间

②参比溶液

③选择λ测＝λmax

④温度、干扰离子等二、实验原理：三、实验内容：条件实验加入试剂\编号1（参比）4Fe3+标液(10µg/mL)0.006.00NH2OH·HCl/mL1.01.0Phen

/mL2.02.0NaAc/mL5.05.0稀释至/mL50.050.01、最佳测量波长的选择（吸收曲线A-λ图）注：（1）吸量管正确使用，标液配准，注意顺序，加试剂均须立即摇匀，静置。（2）波长变化，参比重新调零。选用1cm比色皿,以试剂空白为参比溶液,在440～560nm之间扫描，选择最佳测量波长(λmax)。λ(nm)440450460…505510515520…560A三、实验内容：试样微量铁测定加入试剂\编号1（参比）23456（试样）Fe3+标液(10µg/mL)0.002.004.006.008.00/待测原始试液/mL/////5.00NH2OH·HCl/mL1.01.01.01.01.01.0Phen

/mL2.02.02.02.02.02.0NaAc/mL5.05.05.05.05.05.0稀释至/mL50.050.050.050.050.050.0吸光度A0.001、标准溶液系列及待测试液配制及测量

（A～C图）

选用1cm比色皿以试剂空白为参比溶液，在所选择波长下，测2-6号吸光度。注：吸量管正确使用，标液配准，注意顺序，加试剂摇匀，静置10min。四、结果处理1、绘吸收曲线A-λ图，选择最佳测量波长2、绘标准曲线A-C(ug/mL)图3、求摩尔吸光系数ε

(L·mol-1·cm-1)4、求待测试液中铁含量(ug/mL)

(3位有效数字，注意换成原始溶液浓度)

注：excel/origin作图规范：背景空白，标尺合理,坐标单位，回归方程,线性相关系数五、思考题

P231:1、3吸光光度仪器的一般操作程序

a.仪器预热，放置溶液，选波长。（注意光面对准光路）选定合适的波长作为入射光(旋钮调节)b.调节即仪器零点（T=0）放入暗盒，按Mode到T档，按透光率T=0%c.调节参比零点（A=0）使光路对准参比溶液，按Mode至T调T=100.0%。d.测定将标准溶液或样品溶液推入光路，按Mode至A档，读取吸光度A。若波长重新设定，需参比重新调零；波长不变，不需重新调零。e