郝老师课件单克隆抗体的制备

单克隆抗体的制备应急处置：洗、挤、消毒24小时内接种疫苗，5针，28天内打完咬伤较严重者先注射狂犬病病毒抗毒血清和破伤风杆菌抗毒血清，后接种疫苗。阅读思考常规抗体的缺点？为什么血清中分离的抗体纯度低？B2B3B1浆1浆1浆1浆2浆2浆2浆3浆3浆3常规抗体（多克隆抗体）抗原123纯度低、特异性差、产量低

1、单克隆抗体由一个B淋巴细胞增殖分化形成的浆细胞群产生的抗体。化学性质单一，特异性强。被免疫过的B细胞（浆细胞）设想：骨髓瘤细胞B细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞：既能产生特异性抗体，又能无限增殖科勒米尔斯坦细胞融合技术细胞培养

抗原2、单克隆抗体制备过程B1、B2、B3…多种淋巴细胞骨髓瘤细胞（设定为A）+PEG选择培养基BBAB1AB2AB3…AA细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基喋呤阻断。试验用骨髓瘤细胞（缺陷型）只有D途径，没有S途径。杂交瘤细胞克隆化培养抗体检测产生特定抗体的杂交瘤细胞获取单克隆抗体体内制备单克隆抗体体外制备优点：特异性强、灵敏度高、可大量制备将以下单克隆抗体的制备步骤排序3、单克隆抗体的应用①用于治疗疾病和运载药物，如生物导弹131I制备甲胎蛋白的单克隆抗体，与药物结合，定向运输到癌细胞位置。癌细胞膜具特殊蛋白质，甲胎蛋白、癌胚蛋白。“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物②作为诊断试剂：人绒毛膜促性腺激素的单抗通用名批准时间类型识别抗原适应症Muromonab-CD31986mouseCD3急性肾移植移植排斥Daclizumab;Basiliximab1997;1998humanized/chimericIL-2R(CD25)急性肾移植移植排斥Rituximab;Tositumomab;Ibritumomab1997;2002;2003mouse/chimericCD20B细胞-非何杰金氏淋巴瘤、类风湿性关节炎Alemtuzumab2001humanizedCD52慢性B淋巴细胞性白血病Gemtuzumabozogamicin2000chimericCD33急性粒细胞性白血病Edrecolomab*1995mouseEP-CAM结、直肠癌Trastuzumab1998humanizedHER-2HER-2过表达的转移性乳腺癌Cetuximab2004humanizedEGFR转移性结肠癌、头颈部癌症Bevacizumab2004;2006humanizedVEGF转移性结肠癌,年龄相关性黄斑病变Infliximab1998;2002chimeric/humanTNF-α节段性回肠炎、类风湿关节炎,银屑病性关节炎;强直性脊柱炎Efalizumab2003humanizedCD11a银屑病Natalizumab2004humanα4整合素多发性硬化症Omalizumab2003humanizedIgE过敏性哮喘Abciximab1994chimericGPⅡb/Ⅲa冠心病血小板Palivizumab1998humanizedRSV呼吸道合胞病毒感染科勒米尔斯坦

杂交瘤技术是上世纪方法学上的一个重大突破，开创了大量生产具有专一特异性的单克隆抗体的新纪元。1984年米尔斯坦和柯勒被授予诺贝尔生理学或医学奖。

骨髓瘤细胞（缺陷型）

多种细胞筛选

杂交瘤细胞B淋巴细胞（多种）选择培养基特定抗原注射动物引起免疫反应加PEG

克隆化培养，抗体检测筛选产生