尿液检测整体化解决方案20072课件

马骏龙尿液检测整体化方案

－21世纪尿液分析的策略尿液分析概述

干化学分析有形成分分析整体化分析方案

一、尿液分析概述八一解放军总医院临床检验科尿液分析的历史

第一个使用显微镜检查尿液的人可能是法国律师Nicholas-ClaudeFabridePeiresc(1580-1637)，他本人既不是内科医生也不是外科医生，而是一个有着从天文到解剖多种兴趣的业余爱好者。首先在显微镜下观察到了结石患者尿液中的菱形结晶，并认为引起排尿刺激和疼痛的可能原因就是尿液中带锐角结晶。八一解放军总医院临床检验科尿液分析的历史

第一个使用干化学检查尿液的人是1850年巴黎化学家莫米纳(Mauraene)，首先发明了一种测定尿葡萄糖的试验。他使用氯化锡浸泡过的美丽奴羊毛的纤维作为试剂带。当一滴尿液加入到纤维上，将纤维加热，如果尿液中有葡萄糖存在，则纤维变黑。八一解放军总医院临床检验科尿液分析(ECLM分类)外观和气味分析化学分析（干化学＋湿化学）颗粒分析（手工＋自动）微生物分析（定性＋定量）八一解放军总医院临检科尿液常规分析的内容理学检查外观、气味、颜色、浊度、比重化学分析化学成分定性和半定量分析有形成分检查细胞、管型、结晶等检查八一解放军总医院临床检验科临床对尿液分析的要求更准

为临床提供准确可靠的实验结果更快

缓解检验科不断增多的标本压力为临床提供更为及时的检验报告更多

为临床提供更多的实验室诊断指标八一解放军总医院临检科尿液检测整体化的背景传统尿液分析的局限尿干化学检测所存在的问题尿沉渣镜检所存在的问题目前的发展现状客观定量分析的优势尿液整体化检测的必要性八一解放军总医院临床检验科尿液分析仪的种类干化学尿液分析仪有形成分尿液分析仪按测试项目分类按自动化程度分类显微图像分析仪流式细胞分析仪八一解放军总医院临床检验科干化学尿液分析仪组成机械系统光学系统

电路系统

卤钨灯滤光片分光检测系统发光二极管检测系统电荷耦合器件检测系统冷光源检测系统八一解放军总医院临床检验科干化学尿液分析仪原理多联试剂带光源微处理器转换器结果输出八一解放军总医院临床检验科干化学尿液分析仪原理测试原理的实质是光的吸收和反射。颜色越深，吸收光量值越大，反射光量值越小，则反射率越小；颜色越浅，吸收光量值越小，反射光量值越大，则反射率也越大。

Tm×CsR(%)=━━━━━━×100%Ts×Cm八一解放军总医院临床检验科干化学各参数检测原理

尿液分析仪通过三个波长(470nm，555nm和620nm)对尿液的反射率进行测定，其测定结果按内置程序进行换算，得出尿液颜色。1.尿液颜色2.尿液透明度

通过透光指数原理，采用尿液与蒸馏水的透射和折射光相比较，计算出尿液的浊度，其公式为

如果T＜1，则尿液浊度为清亮；如果1≤T＜2，则尿液浊度为微浊；如果T≥2，则尿液浊度为混浊。八一解放军总医院临床检验科折射计测定法

准确、定量值多聚电解质离子解离法

过筛、半定量值4.尿液比重标本必须新鲜，强碱导致结果改变。干扰物对两种测定方法的影响。不同pH值对尿液比重测定结果的影响1.0061.0081.0101.0121.0141.0161.0181.020345678910

折射仪法干化学法4.尿液比重不同浓度的葡萄糖对尿液比重测定结果的影响4.尿液比重尿糖(g/L)干化学法比重计法折射计法01.0101.0121.01351.0101.0151.015101.0101.0161.017151.0101.0191.019201.0101.0211.021八一解放军总医院临床检验科尿液pH对尿蛋白测定的影响成分蛋白不同对尿蛋白测定影响干扰物对尿蛋白测定的影响5.尿液蛋白pH指示剂蛋白质误差法

在一定的条件下(pH为3.2时)，溴酚蓝产生出阴离子，与带阳离子的蛋白质(主要是白蛋白)结合发生颜色变化八一解放军总医院临床检验科

青霉素对尿蛋白测定结果的影响++++++++++++++++++磺柳酸法007001000100010001000干化学法(mg/L)8万4万2万1万500010000青霉素浓度(U/ml)

5.尿液蛋白八一解放军总医院临床检验科5.尿液蛋白八一解放军总医院临床检验科6.尿液葡萄糖葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法

葡萄糖氧化酶作用于葡萄糖，使其形成葡萄糖醛酸和过氧化氢，过氧化物酶催化过氧化氢，氧化色源(供氢体)生成有色化合物。酶法和班氏法方法学的差异维生素C对尿糖测定的影响八一解放军总医院临床检验科6.尿液葡萄糖八一解放军总医院临床检验科6.尿液葡萄糖八一解放军总医院临床检验科6.尿液葡萄糖维生素C对干化学法尿糖测定产生假阴性,班氏法假阳性。不同厂家生产的试带受维生素C的干扰不同;同一厂家生产的试带干扰实验项目也不相同。一般在静脉注入2g维生素C5h后，口服2片以下维生素C浓度不影响干化学检测。对策：用含维生素C检测的试带或用其它方法进行检测。八一解放军总医院临床检验科7.尿液酮体亚硝基铁氰化钠法。

在碱性条件下，亚硝基铁氰化钠可与尿液中的乙酰乙酸、丙酮(部分试剂带)起反应，呈现紫色。

尿液标本保存的变化干化学法与酮体粉法差异不同病程酮体成分的变化八一解放军总医院临床检验科8.尿液胆红质偶氮反应法

在强酸介质中，直接胆红质与二氯苯胺重氮盐起偶联反应生成红色的复合物，其反应过程是重氮盐作用胆红素中央使其裂开，再结合形成两分子的偶氮胆红素而呈现颜色变化。

尿液标本保存的变化干扰物的影响八一解放军总医院临床检验科8.尿液胆红质八一解放军总医院临床检验科9.尿胆原醛化反应法或重氮反应法

尿胆原和对-二甲氨基苯甲醛发生醛化反应生成樱红色的缩合物或尿胆原和对-甲氧基苯重氮四氟化硼发生重氮盐偶联反应生成胭脂红色的化合物。

尿液标本保存的变化干扰物的影响如胆色素原、吲哚、胆红素八一解放军总医院临床检验科10.尿亚硝酸盐亚硝酸盐还原法

亚硝酸盐可将膜块中的氨基磺胺(或氨基苯砷酸)重氮化而成重氮盐，后者与1,2,3,4-四氢并喹啉-3-酚(或N-萘基乙二胺)偶联，使膜块产生桃红色重氮盐,借以诊断患者是否被肠杆菌科细菌感染。

尿亚硝酸盐试验检测的条件尿液标本保存的变化干扰物的影响如维生素C八一解放军总医院临床检验科10.尿液亚硝酸盐八一解放军总医院临床检验科11.尿红细胞类过氧化物酶法

血红蛋白含有亚铁血红素，后者具有过氧化物酶样活性，作用于有机过氧化物和色源,可使无色的色源(联苯胺)变成蓝色的物质。尿液标本变化—体内、体外干扰物的影响—细菌、维生素C八一解放军总医院临床检验科11.尿液红细胞八一解放军总医院临床检验科11.尿液红细胞八一解放军总医院临床检验科11.尿液红细胞八一解放军总医院临床检验科11.尿液红细胞八一解放军总医院临床检验科12.尿白细胞白细胞酯酶法基于粒细胞胞浆内含有酯酶，此酶可作用于膜块中的吲哚酚酯，使其产生吲哚酚，后者与重氮盐反应形成紫色缩合物。尿液标本的变化—体内、体外检测方法的局限性—淋巴细胞干扰物的影响—胆红质、甲醛；先锋、庆大霉素八一解放军总医院临床检验科干化学法检测的优点操作简便，培训快捷同时多个项目分析(8~13项)检测速度快(60秒~120秒)试剂成本低

八一解放军总医院临床检验科干化学检查的局限性

白细胞：肾移植病人淋巴细胞不表现酯酶红细胞：受其它还原物质的影响造成假阴性细菌：只能检测革兰氏阴性杆菌

……

不能检测管型、结晶等病理成分干化学只是定性结果，不能用于疗效的监测

结论：不能代替镜检八一解放军总医院临床检验科标本放置时间影响干化学测定结果影响:

pH:酸→碱乙酰乙酸→丙酮胆红素→胆绿素尿胆原→尿胆素糖、蛋白→分解，细胞→破坏

原则：新鲜尿液且留尿后越早检查越好规定:

留取尿液后2h之内检查对策:

门诊患者:随机尿;住院患者:二次晨尿八一解放军总医院临床检验科尿液干化学分析仪的质控干化学法质控物的选择配套的质控物“正常”、“异常”两种质控物干化学法质控方法常规法偏倚累加法八一解放军总医院临床检验科尿液干化学分析仪的质控干化学法质控常规法操作方法使用“正常”和“异常”两种浓度的质控物按常规操作程序一天内至少进行1次测定。失控原则质控物某一膜块的测定结果与“靶值”±1个膜块内是允许的，否则为失控。尿液干化学分析仪的质控干化学法质控偏倚累加法操作方法使用“正常”和“异常”两种浓度的质控物按常规一天内至少进行1次测定，以每个项目测定值与靶值进行比较,与靶值等级相同记为“0”;高于靶值1个等级记为“+1”,低于靶值1个等级记为“-1”，最后将所有正、负偏倚项目测试结果相加。失控原则以偏倚和“±2”作为双偏倚质控图的警告线,以偏倚和“±3”作为双偏倚质控图的失控线。

1.超过“±3”为失控；2.连续四天超过警告线为失控；3.连续五天递增或递减为失控。尿液干化学分析仪的质控干化学法质控偏倚累加法八一解放军总医院临床检验科干化学尿红、白细胞筛选的前提

规范的尿沉渣镜检是保证尿液分析结果准确的基础，原则上每个尿液标本都采用这种方法检查，但目前化验室人员少，工作量大，每天有几十甚至于几百个标本需要及时报告，要使用规范的镜检及时地发出报告是困难的，最好寻找一个简单、快速的方法进行过筛，即将完全正常的标本筛去后，对异常的标本进行规范性检查。干化学尿液分析仪提供了过筛的手段。干化学检查尿红、白细胞与镜检关系八一解放军总医院临床检验科干化学尿红、白细胞筛选的概念

所谓过筛就是在仪器、试带符合实验要求，检验环境相对稳定的条件下制定的一个标准，达到此标准可视为尿沉渣成份在正常范围内，可免去进一步显微镜检查。如果一个标本经过干化学、镜检两种方法检查，干化学结果符合过筛标准，镜检结果在正常范围内，说明过筛是正确的。干化学结果超过过筛标准，镜检结果也异常，也说明过筛标准是正确的。干化学结果异常，镜检结果正常视为假阳性，反之干化学结果正常，镜检结果异常视为假阴性。干化学检查尿红、白细胞与镜检关系八一解放军总医院临床检验科干化学尿红、白细胞筛选的原则

以干化学法检查结果红细胞、白细胞、尿蛋白、亚硝酸盐都为阴性，颜色、透明度正常六项指标联合作为过筛镜检的标准。即符合此标准可视为沉渣中红、白细胞及管型在正常范围内免除镜检，但此标准不适合泌尿系统疾病和以镜检结果作为诊断依据如结石、结晶等或观察疗效时的患者。干化学检查尿红、白细胞与镜检关系八一解放军总医院临床检验科干化学尿红、白细胞筛选标准的来源干化学检查尿红、白细胞与镜检关系八一解放军总医院临床检验科干化学尿红、白细胞筛选标准的来源干化学检查尿红、白细胞与镜检关系八一解放军总医院临床检验科干化学尿红、白细胞筛选标准的选择干化学检查尿红、白细胞与镜检关系八一解放军总医院临床检验科干化学尿红、白细胞筛选标准的选择干化学检查尿红、白细胞与镜检关系八一解放军总医院临床检验科干化学检查尿红、白细胞与镜检关系

造成的“假阳性”现象的原因所谓“假阳性”、“假阴性”是以显微镜检查为基础的。由于干化学是检测细胞胞浆内涵物来确定细胞的有无。在实际工作中可能存在下列问题：①由于尿液在膀胱贮存时间过长，导致红、白细胞破坏，细胞内含物释放到尿液中，造成干化学阳性，镜检阴性的所谓干化学检查的“假阳性”现象。②尿液中污染甲醛或高浓度胆红质或使用某些药物和肌红蛋白、易热酶、细菌、含氧化剂的消毒剂导致干化学真正的假阳性。八一解放军总医院临床检验科干化学过筛的适用范围局限性肾科及泌尿系科病人的尿液不适合于干化学过筛，要全部显微镜检查。以镜检结果作为诊断依据(如结石、结晶和肿瘤细胞)或观察疗效时，不宜使用干化学方法作为过筛。由于干化学分析干扰因素较多且不可避免的有一定的假阴性或假阳性，因此要结合临床表现，判断结果，决不可只看干化学分析，忽视镜检。尿液的外观(特别是颜色、浊度)与尿沉渣有一定相关关系，当尿液外观异常时，应注意显微镜检查。三、有形成分分析八一解放军总医院临检科尿液有形成分的内容细胞成分：各种细胞管型成分：各种管型结晶成分：各种结晶其它成分：细菌、寄生虫、酵母菌、精子、粘液丝临床医生的特殊成分八一解放军总医院临检科尿液有形成分的检测方法非定量检查法离心镜检法直接镜检法其他检查法定量检查法计数板法仪器检测法其他检查法尿沉渣镜检美国临床实验室标准委员会(NCCLS)(1991年)欧洲临床实验室标准委员会(ECCLS)(1997年)日本临床实验室标准委员会(JCCLS)(1995年)中华医学会(CCCLS)(1995年武夷山会议）许多国家制定的尿沉渣显微镜检查法的推荐方法或试行方案，其中包括尿液标本的采集、保存、运输；标本的制作（包括特殊的离心管和标准尿板，离心力的要求，载玻片的标准)操作规程及报告方式(XX个细胞/μl)等，这些方法学的改进使实验结果更精确，更准确，更有实验结果动态分析的可比性。

项目NCCLSECCLSJCCLS中国标本要求晨尿，<2小时推荐<4小时推荐<2小时晨尿，<1小时标本量10、12、15ml10、20ml10ml10ml离心管透明带刻度有盖尖底一次性试管透明有10ml和0.2ml刻度的尖底试管带刻度的离心管离心机要求带自动锁盖的恒温水平式离心机水平式离心机水平式离心机离心时间5min5min5min5min离心力400g400g500g1500转/min留取沉渣量依照产品而定依照产品而定0.2ml0.2ml检查量依照产品而定依照商品规格15μl20μl载波片依照产品而定依照商品规格18mm×18mm18mm×18mm显微镜要求光学显微镜相差或偏光显微镜光学显微镜光学显微镜镜检要求推荐采用湿片法推荐湿片法推荐采用湿片法染色要求推荐活体染色活体染色不必采用染色报告方式每ml细胞数量每微、毫升或升细胞数量以视野均值报告细胞以低～高数量/视野报告尿沉渣显微镜检查规范操作比较

镜检标准方法八一解放军总医院临检科何种情况下需要镜检医生提出要求的；检验科规定的需要镜检的，如泌尿科、肾病科、内分泌科（糖尿病患者)，应用免疫抑制剂及妊娠妇女；任何一项理学、化学的检验结果是异常的（干化学过筛标准：尿液颜色、浊度、红细胞、白细胞、蛋白、亚硝酸盐全部正常）。八一解放军总医院临检科传统镜检法影响因素分析前标本已变化标本混合不当离心尿量差异离心时间和速度差异沉渣量差异检查量差异计数池和盖片差异视野数和位置差异有形成分识别差异视野大小差异八一解放军总医院临检科传统镜检法的局限费时费力重复性差，离心的差异等不同检验人员间的差异大实验室间结果不具可比性难以标准化尿液细胞定量分析方法学比较八一解放军总医院临检科尿液镜检中无法避免的问题八一解放军总医院临床检验科镜检误差的分析八一八一解放军总医院临检科规范化尿液离心检查法对于检查尿液病理性有形成分是泌尿系统疾病诊断的理想方法，但不适用于尿液有形成分定量分析。未离心多体积镜检定量方法能较准确反映沉渣有形成分的实际浓度。尿液分析仪UF-100和AVE-763由于计数细胞数量多，能准确反映尿液的真实情况。

尿液细胞定量分析方法比较八一解放军总医院临检科尿液定量分析的必要性卫生部临检中心检验操作新的要求定量的重要性

——满视野或半定量范围太广

——临床需要监察病程的进展和治疗效果新的医疗环境要求检验数据联网比对和交流检验结果由主观判断升华到客观判断减少误差，提高可信性八一解放军总医院临检科尿液有形成分检查发展前景流式细胞术原理—UF-100

●自动化程度高

●客观定量的优势

●检测速度快显微镜形态—AVE-763

●自动化程度高，操作简便

●有形成分图文并茂

八一解放军总医院临检科流式尿液分析仪发展及应用流式尿液分析仪发展及检测原理SYSMEX尿液分析仪发展史SYSMEX尿液分析仪检测原理流式尿液分析仪的应用UF-100参考值的设置UF-100检测参数的临床应用使用过程中注意事项八一解放军总医院临检科YELLOWIRIS1987UA-10001990UA-20001993UF-1001995UF-501998图象处理技术流式细胞技术SYSMEX尿液分析仪发展史八一解放军总医院临检科UF-100尿液分析仪技术荧光染色技术激光散射技术电阻抗技术八一解放军总医院临检科9-氮杂菲(Phenanthridine)染色DNA和RNA发射荧光为:

橙色对死细胞胞膜穿透性强羰花青(Carbocyanine)细胞膜、核膜以及线粒体等膜性物质被染色发射荧光为：绿色UF-100尿液分析仪染料八一解放军总医院临检科FscFlFlwFscwFlFl2Fscw250ch250chRBCWBCFscFscUF-100尿液分析仪分析原理八一解放军总医院临检科UF-100尿液分析仪检测参数八一解放军总医院临检科UF-100尿液分析仪检测参数UF-100健康人群尿红细胞检测结果UF-100健康人群尿白细胞检测结果UF-100健康人群尿上皮细胞检测结果UF-100健康人群尿管型检测结果UF-100健康人群尿有形成分结果检测项目性别0～12岁13～55岁56岁以上红细胞男性0～17女性0～210～27白细胞男性0～120～16女性0～210～36上皮细胞男性0～60～8女性0～110～400～22管型男性0～0.60～1.0女性0～0.60～0.8八一解放军总医院临检科日本正常人群UF参考值调查八一解放军总医院临检科反映红细胞大小RBCP70Fsc定义为在前向散射光通道中，70%

的non-lysed红细胞群处的前向散射光强度的值正常红细胞：100ch小红细胞：80ch八一解放军总医院临检科反映红细胞大小八一解放军总医院临检科反映红细胞大小变异度RBC-Fsc-DW定义为所有non-lysed红细胞的中间范围60%的细胞群的分布宽度反映RBCFsc直方图的分布宽度大小不均一的：

50ch，较宽大小均一的：

50ch，较窄八一解放军总医院临检科反映红细胞大小变异度八一解放军总医院临检科新的参数对红细胞形态作判断八一解放军总医院临检科新的参数对红细胞形态作判断八一解放军总医院临检科UF-100对血尿来源的判断ToruHyodoetal.JpnJNephrol.37，1995

UF-100：敏感性100％，特异性92.54%*镜检法：敏感性95.83%，特异性93.33%马骏龙，丛玉隆等.中华医学检验杂志20,1997

UF-100：敏感性100％，特异性78.2%

*Hyodo所选非肾小球病变对象排除了血尿同时伴菌尿病人八一解放军总医院临检科干扰问题

—采样的规范化生物参考值的设定

-目前还没见权威杂志发表国内参考值假阳性的报警

-结晶、细菌、真菌、精子等干扰UF-100应用中的三大问题八一解放军总医院临检科UF-100主要干扰因素红细胞结晶、细菌、真菌、精子白细胞

真菌、精子、细菌、上皮细胞管型精子、真菌、上皮细胞、粘液丝

干扰物对UF-100检测结果影响草酸钙结晶

多数有结晶提示红细胞图形多数较宽，且有多个波峰RBC-P70Fsc>100chRBC-Fsc-DW>50ch干扰物对UF-100检测结果影响酵母菌

多数有酵母菌提示红细胞图形多数较窄，且有峰尖RBC-Fsc-DW较小干扰物对UF-100检测结果影响酵母菌

多数有酵母菌提示红细胞图形多数较窄，且有峰尖RBC-Fsc-DW较小干扰物对UF-100检测结果影响细菌多数有细菌提示，检测总粒子数较高红细胞图形多数较窄，且有峰尖，整个形状偏左RBC-P70Fsc较小RBC-Fsc-DW较小八一解放军总医院临检科减少UF干扰的必要条件新鲜尿—及时检测

门诊患者—随机尿；病房—二次晨尿推荐检测时间—2小时无菌，一次性有盖容器—防止污染采尿规范—减少污染

男:中段尿；女:后段尿—舍弃初段尿执行仪器操作程序—保证质量

仪器复检设置UF-CHECK的应用—质控监控UF环境稳定—状态良好UF-100检测的优劣先进的设备

正确的使用方法是非常重要的!正确的使用;

得到准确的结果!不合理的使用;

可能产生许多麻烦！♪♪oh!veryfast!Oops!Oops!八一解放军总医院临检科尿液显微镜智能分析仪AVE-763尿液分析仪发展及检测原理AVE-763尿液分析仪发展史AVE-763尿液分析仪检测原理AVE-763液分析仪的应用AVE-763参考值的设置AVE-763临床应用八一解放军总医院临检科长沙爱威公司2002年8月，AVE-761；2003年3月，AVE-762；2004年7月，AVE-763，2006年4月，即将生产出AVE-763B。尿液显微镜智能分析仪发展

本仪器的软件系统，通过CCD采集大量尿液标本中各种有形成份图像进行处理、分析后，针对各种类成份如细胞、管型、结晶等几十种专用特征参数（如大小、轴比、形状、纹理、梯度、颜色、灰度等等），提取大量数据进行运算统计，训练更新、建立模型；应用时，CCD采集显微镜下目标图像后，传入计算机，对其各种特征数据进行统计、聚类、拟合，参照已建立的模型，自动识别出该图像所代表的实物。尿液显微镜智能分析仪检测原理八一解放军总医院临检科八一解放军总医院临检科AVE-763分析仪工作流程进样充池低倍过筛（视野数可设置）低倍定位分类计数（管型、上皮）高倍识别分类计数报告清洗阴性阳性八一