《细菌形态学检查》教学课件

细菌形态学检查细菌形态学检查1形态学检查的目的：①从形态上识别细菌，为细菌分类与鉴别的根底；②了解被检标本中有无细菌；③直接从标本中观察到某些细菌，可对少数疾病初步诊断〔如结核，脑膜炎等〕。形态学检查的目的：21.普通光学显微镜原理自然光的波长为0.4μm；显微镜的最大分辨率为0.2μm〔前者的一半〕；肉眼的分辨率为0.2mm，故放大1000倍，使0.2μm放大到0.2mm。第一节显微镜〔microscope〕1.普通光学显微镜第一节显微镜〔mic3

2.暗视野显微镜

常用于活的微生物的动力检测

3.相差显微镜利用相差板的光栅作用，使光波穿过标本中密度不同的部位时，引起位相差，显出光的强度的明暗比照。应用于活菌的形态及某些内部构造的观察。4.荧光显微镜

以紫外光或蓝紫光作光源，因其波长比自然光短，故分辨率比普通显微镜要高。2.暗视野显微镜3.相差显微镜4.荧光显微镜45.电子显微镜：以强大的电子流代替光源，因电子流的波长仅为0.005nm，〔仅为可见光源的几万分之一〕，故其放大倍数可达10万-100万倍，可看清1nm的物体。电镜种类透射电镜：因电子的透射作用，可观察细菌，virus内部构造，通过荧屏显示。扫描电镜：因电子流对物体的外表进展扫描，可清楚的显露出物体的三维空间的立体构造，可用于对细菌，virus的构造观察。5.电子显微镜：扫描电镜：因电子流5仅用于细菌动力的观察。

1.压滴法

明视野法、暗视野法。

2.悬滴法

3.毛细管法：孔径0.5-1.0mm，长约60-70mm毛细管，以此管轻取细菌培养物，待液体进入后，两端火焰封融。用于厌氧菌的动力观察。注意：区别细菌的运动与布朗运动。第二节不染色细菌标本检查法仅用于细菌动力的观察。第二节不染色细菌标本检查6一：染料：大多是人工合成的含苯环或苯的有机物。色基：即连接在苯环上带双键的有色化学基团，它使染料带颜色，其色基越多，颜色越深如-NO2(硝基〕\-N=N-〔偶氮基〕助色基：不显色，它决定了染料与被染物之间的亲和性，且有酸、碱之分，决定了染料的酸碱性:-NH2〔碱性〕-OH〔酸性〕

第三节细菌染色标本的检查一：染料：大多是人工合成的含苯环或苯的有机物。第三节细7常用染料种类：

碱性染料：美兰，结晶紫，碱性复红等，色基带正电，易与带负电的被染物结合着色

酸性染料：伊红，酸性复红，刚果红，色基带负电

复合染料：可与cell浆结合

单纯染料：多为偶氮化合物，亲和力低，不溶于水，而溶于脂溶剂。常用染料种类：8二染色程序：根本步骤：涂片〔枯燥〕

固定染色〔初染、煤染、脱色、复染〕1.涂片制备：液体标本〔细菌培养液〕直接涂于玻片上；固体培养基上的培养物，取生理盐水涂片，涂成蚕豆大小的菌膜。二染色程序：1.涂片制备：92.固定：目的：①杀死细菌，使蛋白质凝固，易于着色②改变其通透性，利于染料进入③使菌体附着在玻片上④保持细菌原有的形态、构造方法：常用的火焰加热固定法。2.固定：103.染色：目的：加固初染媒染剂：石炭酸，碘液，明矾，酚等，也可加热。目的：使不该染上颜色的局部脱下颜色脱色剂：酸〔为碱的脱色剂〕碱〔为酸的脱色剂〕，还有甲醇，乙醇等脱色机制：影响蛋白质的电离程度，改变其电荷的性质或数量，从而影响细菌与染料结合的程度初染媒染脱色3.染色：目的：使不该染上颜色的局部脱下颜11〔比照染色〕常用染料：稀释复红、沙黄〔与紫色比照〕、美兰、苦味液〔与红色比照〕

复染〔比照染色〕复染12三：常用的染色法

〔一〕单染法：用一种染料染，细菌及周围局部都染成同一种颜色主要用于观察细菌的形态、大小、排列及简单的构造，如美兰染色，复红染色。〔二〕复染法：用两种以上的染料，将不同的细菌或同一细菌的不同构造染成不同的颜色。三：常用的染色法

〔一〕单染法：13由丹麦细菌学家ChristainGram首创，已有100多年的历史。

染料：结晶紫、卢戈氏碘液、95%酒精、稀释石炭酸复红

1.革兰染色法〔Gramstain):由丹麦细菌学家ChristainGram首创，已有114原理：〔1〕等电点学说：革兰阳性菌ph2-3,低于革兰阴性菌ph4-5。〔2〕化学学说：革兰阳性菌含大量核糖核酸镁盐。〔3〕通透性学说：革兰阳性菌cellwall因肽聚糖厚，脂类少，通透性低，酒精不易进入脱色，相反革兰阴性菌肽聚糖少，含脂多，易被酒精溶解，使cellwall通透性升高。原理：15结晶紫〔初染〕卢戈氏碘液〔媒染〕95%酒精〔脱色〕稀释石炭酸复红〔复染〕1min水洗1min水洗1min水洗结果：意义：方法：结晶紫〔初染〕卢戈氏碘液〔媒染〕95%酒精〔脱色〕稀释石炭162.抗酸染色〔acid-faststain〕原理：分枝杆菌一般不易着色，假设用5%石炭酸复红加温并延长染色时间，可染上红色，又因其菌体中含有分枝菌酸，可抵抗3%盐酸酒精的脱色，仍保持红色，故称为抗酸菌。2.抗酸染色原理：分枝杆菌一般不易着色，假设用5%石17

方法：石炭酸复红〔初染〕盐酸酒精脱色碱性美兰〔复染〕1min加热至冒蒸汽5min涂片、枯燥、固定方法：石炭酸复红〔初染〕盐酸酒精脱色碱性美兰〔复染〕1m18结果：意义：结果：19细胞壁染色：染液：10％鞣酸溶液、0.5％结晶紫溶液方法：涂片自然枯燥→鞣酸染15min，水洗→结晶紫染3~5min，水洗→待干，镜检。结果：细胞壁〔细菌的周边〕染成紫色，内部无色；无细胞壁的细菌〔L型菌〕整个菌体染成紫色。3.特殊染色法鞭毛染色法芽孢染色法荚膜染色法异染颗粒染色法3.特殊染色法鞭毛染色法芽孢染色法20《细菌形态学检查》教学课件21《细菌形态学检查》教学课件22《细菌形态学检查》教学课件23《细菌形态学检查》教学课件24《细菌形态学检查》教学课件25《细菌形态学检查》教学课件26《细菌形态学检查》教学课件27透射电镜透射28扫描电镜扫描电镜29《细菌形态学检查》教学课件30革兰阴性菌〔红色〕革兰阳性菌〔紫色〕革兰阴性菌〔红色〕革兰阳性菌〔紫色〕3112312332图一图二图一图二33鞭毛染色法鞭毛染色法34荚膜染色法荚膜染色法35第一章细菌的形态与构造一、细菌的大小和形态细菌的根本形态：球形、杆状、螺形菌二、细菌的构造根本构造：细胞壁、细胞膜、细胞质、核质特殊构造：鞭毛、菌毛、荚膜、芽胞三、细菌L型复习第一章细菌的形态与构造一、细菌的大小和形态复习36

细菌形态学检查细菌形态学检查37形态学检查的目的：①从形态上识别细菌，为细菌分类与鉴别的根底；②了解被检标本中有无细菌；③直接从标本中观察到某些细菌，可对少数疾病初步诊断〔如结核，脑膜炎等〕。形态学检查的目的：381.普通光学显微镜原理自然光的波长为0.4μm；显微镜的最大分辨率为0.2μm〔前者的一半〕；肉眼的分辨率为0.2mm，故放大1000倍，使0.2μm放大到0.2mm。第一节显微镜〔microscope〕1.普通光学显微镜第一节显微镜〔mic39

2.暗视野显微镜

常用于活的微生物的动力检测

3.相差显微镜利用相差板的光栅作用，使光波穿过标本中密度不同的部位时，引起位相差，显出光的强度的明暗比照。应用于活菌的形态及某些内部构造的观察。4.荧光显微镜

以紫外光或蓝紫光作光源，因其波长比自然光短，故分辨率比普通显微镜要高。2.暗视野显微镜3.相差显微镜4.荧光显微镜405.电子显微镜：以强大的电子流代替光源，因电子流的波长仅为0.005nm，〔仅为可见光源的几万分之一〕，故其放大倍数可达10万-100万倍，可看清1nm的物体。电镜种类透射电镜：因电子的透射作用，可观察细菌，virus内部构造，通过荧屏显示。扫描电镜：因电子流对物体的外表进展扫描，可清楚的显露出物体的三维空间的立体构造，可用于对细菌，virus的构造观察。5.电子显微镜：扫描电镜：因电子流41仅用于细菌动力的观察。

1.压滴法

明视野法、暗视野法。

2.悬滴法

3.毛细管法：孔径0.5-1.0mm，长约60-70mm毛细管，以此管轻取细菌培养物，待液体进入后，两端火焰封融。用于厌氧菌的动力观察。注意：区别细菌的运动与布朗运动。第二节不染色细菌标本检查法仅用于细菌动力的观察。第二节不染色细菌标本检查42一：染料：大多是人工合成的含苯环或苯的有机物。色基：即连接在苯环上带双键的有色化学基团，它使染料带颜色，其色基越多，颜色越深如-NO2(硝基〕\-N=N-〔偶氮基〕助色基：不显色，它决定了染料与被染物之间的亲和性，且有酸、碱之分，决定了染料的酸碱性:-NH2〔碱性〕-OH〔酸性〕

第三节细菌染色标本的检查一：染料：大多是人工合成的含苯环或苯的有机物。第三节细43常用染料种类：

碱性染料：美兰，结晶紫，碱性复红等，色基带正电，易与带负电的被染物结合着色

酸性染料：伊红，酸性复红，刚果红，色基带负电

复合染料：可与cell浆结合

单纯染料：多为偶氮化合物，亲和力低，不溶于水，而溶于脂溶剂。常用染料种类：44二染色程序：根本步骤：涂片〔枯燥〕

固定染色〔初染、煤染、脱色、复染〕1.涂片制备：液体标本〔细菌培养液〕直接涂于玻片上；固体培养基上的培养物，取生理盐水涂片，涂成蚕豆大小的菌膜。二染色程序：1.涂片制备：452.固定：目的：①杀死细菌，使蛋白质凝固，易于着色②改变其通透性，利于染料进入③使菌体附着在玻片上④保持细菌原有的形态、构造方法：常用的火焰加热固定法。2.固定：463.染色：目的：加固初染媒染剂：石炭酸，碘液，明矾，酚等，也可加热。目的：使不该染上颜色的局部脱下颜色脱色剂：酸〔为碱的脱色剂〕碱〔为酸的脱色剂〕，还有甲醇，乙醇等脱色机制：影响蛋白质的电离程度，改变其电荷的性质或数量，从而影响细菌与染料结合的程度初染媒染脱色3.染色：目的：使不该染上颜色的局部脱下颜47〔比照染色〕常用染料：稀释复红、沙黄〔与紫色比照〕、美兰、苦味液〔与红色比照〕

复染〔比照染色〕复染48三：常用的染色法

〔一〕单染法：用一种染料染，细菌及周围局部都染成同一种颜色主要用于观察细菌的形态、大小、排列及简单的构造，如美兰染色，复红染色。〔二〕复染法：用两种以上的染料，将不同的细菌或同一细菌的不同构造染成不同的颜色。三：常用的染色法

〔一〕单染法：49由丹麦细菌学家ChristainGram首创，已有100多年的历史。

染料：结晶紫、卢戈氏碘液、95%酒精、稀释石炭酸复红

1.革兰染色法〔Gramstain):由丹麦细菌学家ChristainGram首创，已有150原理：〔1〕等电点学说：革兰阳性菌ph2-3,低于革兰阴性菌ph4-5。〔2〕化学学说：革兰阳性菌含大量核糖核酸镁盐。〔3〕通透性学说：革兰阳性菌cellwall因肽聚糖厚，脂类少，通透性低，酒精不易进入脱色，相反革兰阴性菌肽聚糖少，含脂多，易被酒精溶解，使cellwall通透性升高。原理：51结晶紫〔初染〕卢戈氏碘液〔媒染〕95%酒精〔脱色〕稀释石炭酸复红〔复染〕1min水洗1min水洗1min水洗结果：意义：方法：结晶紫〔初染〕卢戈氏碘液〔媒染〕95%酒精〔脱色〕稀释石炭522.抗酸染色〔acid-faststain〕原理：分枝杆菌一般不易着色，假设用5%石炭酸复红加温并延长染色时间，可染上红色，又因其菌体中含有分枝菌酸，可抵抗3%盐酸酒精的脱色，仍保持红色，故称为抗酸菌。2.抗酸染色原理：分枝杆菌一般不易着色，假设用5%石53

方法：石炭酸复红〔初染〕盐酸酒精脱色碱性美兰〔复染〕1min加热至冒蒸汽5min涂片、枯燥、固定方法：石炭酸复红