临床微生物学和微生物学检验课件

临床微生物学和微生物学检验2022/12/20临床微生物学和微生物学检验临床微生物学和微生物学检验2022/12/13临床微生物学和1教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生实验课时：4学时课程类型：专业实验课课程要求：必修每组人数：2人临床微生物学和微生物学检验教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生临床微生物学和微生物学2实验目的和要求掌握纸片扩散法（K－B法）的原理、操作方法等、结果判断、意义及质量控制；熟悉肉汤稀释法抗生素敏感性试验的原理、操作方法、结果判断及意义等；了解稀释法的质量控制。临床微生物学和微生物学检验实验目的和要求掌握纸片扩散法（K－B法）的原理、操作方法等、3实验内容常用抗菌药物敏感性试验与耐药检测方法介绍。纸片扩散法。肉汤稀释法。

临床微生物学和微生物学检验实验内容常用抗菌药物敏感性试验与耐药检测方法介绍。临床微生物4一、常用抗菌药物敏感性试验与耐药检测方法介绍纸片扩散法（Kirby-Bauertest）稀释法（dilutiontest）E试验法（Etest）联合药物敏感试验特殊耐药菌及耐药酶的表型检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的检测β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶检测等临床微生物学和微生物学检验一、常用抗菌药物敏感性试验与耐药检测方法介绍纸片扩散法（Ki5二、纸片扩散法（K-B法）

原理：含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑制浓度（minimalinhibitoryconcentration，MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。临床微生物学和微生物学检验二、纸片扩散法（K-B法）原理：临床微生物学和微生物学检验6抑菌圈

含药纸片

临床微生物学和微生物学检验抑菌圈含药纸片临床微生物学和微生物学检验7方法：菌液制备：挑取孵育16-24h的血平板上数个菌落置于生理盐水管中，校正浓度至0.5麦氏标准；涂布接种：无菌棉拭蘸取菌液，在试管壁旋转挤去多余菌液后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60º，最后沿平板内缘涂抹1周；贴含药纸片：平板在室温下干燥3-5min，用无菌镊子将含药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心相距应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm；孵育：35ºC16-18h，量取抑菌圈直径。临床微生物学和微生物学检验方法：临床微生物学和微生物学检验8结果判读：用刻度尺量取抑菌圈直径，根据CLSI（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute）标准判读结果；报告：细菌对该抗生素是敏感（susceptible，S）；耐药（resistant，R）；还是中介（intermediate，I）。临床微生物学和微生物学检验结果判读：临床微生物学和微生物学检验9临床微生物学和微生物学检验临床微生物学和微生物学检验10表1金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性试验评价结果抗菌药物纸片含药量抑菌圈直径(mm)相应MIC值(μg/ml)耐药中介敏感耐药敏感青霉素10U≤28—≥29β-内酰胺酶≤0.12苯唑西林1μg≤1011～12≥13≥4≤2万古霉素30μg——≥15—≤4庆大霉素10μg≤1213～14≥15≥8≤4红霉素15μg≤1314～22≥23≥8≤0.5克林霉素2μg≤1415～20≥21≥4≤0.5磺胺药1.25/23.75μg≤1011～15≥16≥8/152≤2/38临床微生物学和微生物学检验表1金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性试验评价结果纸片含药量11三、肉汤稀释法原理：以水解酪蛋白（MH）液体培养基将抗生素做不同浓度的稀释，然后种入待检细菌，定量测定抗菌药物对被测菌的最低抑菌浓度（MIC）或最低杀菌浓度（MBC）。临床微生物学和微生物学检验三、肉汤稀释法原理：临床微生物学和微生物学检验12方法：试管编号：取26只试管排成两排（测试菌排，质控菌排）每排13支编号。另取3支试管，分别标记上“肉汤对照”、“测试菌生长对照”和“质控菌生长对照”等对照。抗菌药物稀释：用MH肉汤倍比稀释抗菌药物至13管，稀释后使每管含抗菌药物稀释液2ml。肉汤对照、测试菌生长对照、质控菌生长对照管：分别加入MH肉汤2ml。临床微生物学和微生物学检验方法：临床微生物学和微生物学检验13方法：菌液制备：生理盐水校正测试菌和质控菌至0.5麦氏比浊标准，再用MH肉汤稀释到107CFU/ml；加菌液：用微量加样器取0.1ml稀释菌液由低到高加于各排试管中，其最终的接种量为5×105CFU/ml。测试菌排、测试菌生长对照管加测试菌液；质控菌排、质控菌生长对照管加质控菌液。孵育：35ºC24h观察结果。临床微生物学和微生物学检验方法：临床微生物学和微生物学检验14结果：测试菌（或质控菌）不出现肉眼可见生长的最低药物浓度为该药对测试菌（质控菌）的MIC。临床微生物学和微生物学检验结果：临床微生物学和微生物学检验15临床微生物学和微生物学检验临床微生物学和微生物学检验16演讲完毕，谢谢听讲!再见，seeyouagain2022/12/20临床微生物学和微生物学检验演讲完毕，谢谢听讲!再见，seeyouagain202217临床微生物学和微生物学检验2022/12/20临床微生物学和微生物学检验临床微生物学和微生物学检验2022/12/13临床微生物学和18教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生实验课时：4学时课程类型：专业实验课课程要求：必修每组人数：2人临床微生物学和微生物学检验教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生临床微生物学和微生物学19实验目的和要求掌握纸片扩散法（K－B法）的原理、操作方法等、结果判断、意义及质量控制；熟悉肉汤稀释法抗生素敏感性试验的原理、操作方法、结果判断及意义等；了解稀释法的质量控制。临床微生物学和微生物学检验实验目的和要求掌握纸片扩散法（K－B法）的原理、操作方法等、20实验内容常用抗菌药物敏感性试验与耐药检测方法介绍。纸片扩散法。肉汤稀释法。

临床微生物学和微生物学检验实验内容常用抗菌药物敏感性试验与耐药检测方法介绍。临床微生物21一、常用抗菌药物敏感性试验与耐药检测方法介绍纸片扩散法（Kirby-Bauertest）稀释法（dilutiontest）E试验法（Etest）联合药物敏感试验特殊耐药菌及耐药酶的表型检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的检测β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶检测等临床微生物学和微生物学检验一、常用抗菌药物敏感性试验与耐药检测方法介绍纸片扩散法（Ki22二、纸片扩散法（K-B法）

原理：含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑制浓度（minimalinhibitoryconcentration，MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。临床微生物学和微生物学检验二、纸片扩散法（K-B法）原理：临床微生物学和微生物学检验23抑菌圈

含药纸片

临床微生物学和微生物学检验抑菌圈含药纸片临床微生物学和微生物学检验24方法：菌液制备：挑取孵育16-24h的血平板上数个菌落置于生理盐水管中，校正浓度至0.5麦氏标准；涂布接种：无菌棉拭蘸取菌液，在试管壁旋转挤去多余菌液后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60º，最后沿平板内缘涂抹1周；贴含药纸片：平板在室温下干燥3-5min，用无菌镊子将含药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心相距应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm；孵育：35ºC16-18h，量取抑菌圈直径。临床微生物学和微生物学检验方法：临床微生物学和微生物学检验25结果判读：用刻度尺量取抑菌圈直径，根据CLSI（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute）标准判读结果；报告：细菌对该抗生素是敏感（susceptible，S）；耐药（resistant，R）；还是中介（intermediate，I）。临床微生物学和微生物学检验结果判读：临床微生物学和微生物学检验26临床微生物学和微生物学检验临床微生物学和微生物学检验27表1金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性试验评价结果抗菌药物纸片含药量抑菌圈直径(mm)相应MIC值(μg/ml)耐药中介敏感耐药敏感青霉素10U≤28—≥29β-内酰胺酶≤0.12苯唑西林1μg≤1011～12≥13≥4≤2万古霉素30μg——≥15—≤4庆大霉素10μg≤1213～14≥15≥8≤4红霉素15μg≤1314～22≥23≥8≤0.5克林霉素2μg≤1415～20≥21≥4≤0.5磺胺药1.25/23.75μg≤1011～15≥16≥8/152≤2/38临床微生物学和微生物学检验表1金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性试验评价结果纸片含药量28三、肉汤稀释法原理：以水解酪蛋白（MH）液体培养基将抗生素做不同浓度的稀释，然后种入待检细菌，定量测定抗菌药物对被测菌的最低抑菌浓度（MIC）或最低杀菌浓度（MBC）。临床微生物学和微生物学检验三、肉汤稀释法原理：临床微生物学和微生物学检验29方法：试管编号：取26只试管排成两排（测试菌排，质控菌排）每排13支编号。另取3支试管，分别标记上“肉汤对照”、“测试菌生长对照”和“质控菌生长对照”等对照。抗菌药物稀释：用MH肉汤倍比稀释抗菌药物至13管，稀释后使每管含抗菌药物稀释液2ml。肉汤对照、测试菌生长对照、质控菌生长对照管：分别加入MH肉汤2ml。临床微生物学和微生物学检验方法：临床微生物学和微生物学检验30方法：菌液制备：生理盐水校正测试菌和质控菌至0.5麦氏比浊标准，再用MH肉汤稀释到107CFU/ml；加菌液：用微量加样器取0.1ml稀释菌液由低到高加于各排试管中，其最终的接种量为5×105CFU/ml。测试菌排、测试菌生长对照管加测试菌液；质控菌排、质控菌生长对照管加质控菌液。孵育：