发酵大题范围课件

发酵大题范围1、纪律是管理关系的形式。——阿法纳西耶夫2、改革如果不讲纪律，就难以成功。3、道德行为训练，不是通过语言影响，而是让儿童练习良好道德行为，克服懒惰、轻率、不守纪律、颓废等不良行为。4、学校没有纪律便如磨房里没有水。——夸美纽斯5、教导儿童服从真理、服从集体，养成儿童自觉的纪律性，这是儿童道德教育最重要的部分。——陈鹤琴发酵大题范围发酵大题范围1、纪律是管理关系的形式。——阿法纳西耶夫2、改革如果不讲纪律，就难以成功。3、道德行为训练，不是通过语言影响，而是让儿童练习良好道德行为，克服懒惰、轻率、不守纪律、颓废等不良行为。4、学校没有纪律便如磨房里没有水。——夸美纽斯5、教导儿童服从真理、服从集体，养成儿童自觉的纪律性，这是儿童道德教育最重要的部分。——陈鹤琴参数检测例：鸟苷生产在鸟苷发酵中，发现发酵到40小时后鸟苷合成速率下降，但糖耗速率并未下降，而且由于耗糖,使发酵过程pH下降，补入氨水增多。那么糖耗到哪里去了呢？于是进行以下一些测定与分析随着新课程改革的不断深入，历史教学发生着巨大的变化，改变传统的历史教学模式，探索新的适合新课程理念的教学方法和手段，实现课堂教学的有效性，成为历史教师们孜孜以求的目标。笔者经过了多年的新课程教学实践，对历史教学的方法进行了探索和尝试，期间有困惑、失败，也有收获的喜悦，在诸多的教学方法的尝试中，笔者认为情境教学是提高历史教学有效性的重要途径。所谓情境教学，是指从教学需要和学生的实际出发，教师有目的地引入或创设具有一定情绪色彩的、以形象为主体的生动具体的场景，以引起学生一定的态度体验，从而帮助学生理解教材，并使学生的心理机能得到发展的教学方法。那么如何创设情境提高历史教学的有效性？笔者从以下几个方面进行了总结：一、利用史料有效创设问题情境虽然历史教科书是获得历史知识和培养历史思维的基础性资源，但由于其空间的局限，教科书呈现的内容过于简练，语言抽象，并且结论性的内容太多，致使教师和学生固守教科书中的结论，创新、质疑的精神就被扼杀了，三维目标中的过程与方法也难以体现。如何优化三维目标，实现课堂教学的有效性，照本宣科是不行的。因此，课堂教学要根据学生实际和内容需要通，通过呈现一些材料情境，设置有思维性的问题来引导学生阅读、分析、质疑、解决问题，用已有的经验，结合材料构建自己的历史认识和历史知识，真正做到“论从史出，史论结合”。使学生真正成为历史探究的主体，使课堂成为学生探索历史的场所，促成学生的开放性思维和创新能力，从而提高学生运用知识等能力。历史上的史料非常丰富，历史著作、碑文、报纸杂志、诗歌、小说、戏剧、民谣、图片、遗址等。老师要善于挖掘，搜集和整理，以此来拓宽学生的知识面。教材里提供的史料，教师也要充分利用，也可以借鉴和引用一些高考试题里的材料题。但史料的运用一定要有所选择，要典型，要与课堂教学紧密结合起来，既要注重质又要注重量。所选史料、所提问题必须符合客观规律，并遵循由浅入深、由易到难、循序渐进的原则。在历史教学中运用史料创设情境，不仅能体现历史的真实性、生动性，还可以培养学生历史思维，拓宽学生的历史视野。但是在史料的选择上要慎重，选择的史料要典型，对所选的史料要甄别，不能断章取义，主观臆断。这就要求教师平时多读书、多思考、多研究，不断提高自身的专业素养。二、通过直观形象的手段再现历史情境历史是丰富多彩的，在历史事件发生的过程中，历史人物有着丰富的情感、复杂的心理、生动的语言等等。但在现在的历史教科书中，这些生动的历史场景只剩下干瘪的躯壳，失去了它原有的生命力。要激发学生的学习兴趣、要增强学生对历史的感性认识、要提高学生对历史问题的理性分析、要在更高程度上实现历史教学的有效性，有必要通过直观形象的手段，再现历史现场历史的丰富性、生动性。再现历史情境的手段有很多种，例如用历史图片再现历史情境，历史图片包括人物图片、实物图片及历史地图等。利用图片创设情境，可以丰富学生的感性认识，把较复杂的问题简明化，抽象的问题形象化，便于学生理解。多媒体是一种现代化的教学手段，可以呈现文字、图片、音乐、动画、视频、电影等。用多媒体辅助教学能够直观“再现”历史，可以图文并茂、声情兼备地的创设历史情境，学生有身临其境之感，如《抗日战争》中日军暴行的视频、古代的书法绘画作品欣赏、邓小平的“南巡”谈话……都能通过多媒体手段将抽象变为具体，有效地将形象和思维融为一体。利用多媒体创设情境起着事半功倍的效果。但不管哪种直观的教学手段都是服务与教学目的，教学的目的不是用这些丰富多彩的图片资料和影像资料吸引学生，而是让学生对情境中蕴含的历史信息和问题进行思考和探究。所以在用多媒体进行教学时，教师要对所呈现的情境的表达方式、时间、结合情境所产生的历史问题精心设计，启发学生进入主动探求、积极思考的状态，从而达到最佳的教学效果。同时还要注意不能让学生成为观众，教师成为解说员不断点击鼠标，连续演示媒体，喧宾夺主，没有时间搜集学生反馈的信息，学生也来不及对知识内容做出深入细致的思考，不能参与其中，这样的教学就成了无效教学。三、用角色扮演体验情境角色扮演是通过扮演历史人物、模仿历史人物的所思、所想、所行，营造出特定的历史时空，创设出一种身临其境的氛围，让学生充分参与教学、体验历史的方法。这种方法既可以让学生把自己放置在特定的历史氛围中去把握历史人物的思想和情感，又能够拉近学生与历史的距离，充分调动学生的积极性和参与性，从而在内心体验所扮演的历史人物的心态及当时的历史状况。学生参与了整个教学过程，有助于他们更好地理解过去，更深刻地记住历史、认识历史、理解历史、感悟历史。角色扮演并不是为了表演而表演，背背台词，表演前对历史人物的认识，表演中与同学的合作，表演后的评价更加重要，所以这一方法最好配合讨论法同时进行，有助于培养学生的语言智能和合作精神。角色扮演准备的过程相对要复杂一些，要收集资料，选演员、编剧、导演，设计场景到最后的表演、评价、总结，要发挥学生的主体性，教师不能包办代办，也不能袖手旁观，要发挥其主导作用，给予资料查找、主题的确定方面的指导，以及表演后的评价。情境教学可以为学生创设良好的学习氛围，有利于激发学生的学习兴趣和动机，培养学生的实践能力，培养学生的合作意识和创造能力，无疑是提高历史教学有效性的重要途径。0前言随着时代的发展和改革开放的不断深入，我国与世界各国的交往越来越频繁，英语在出入境边防检查中发挥着越来越重要的作用。多年来，通过积极开展边检英语培训，边检人员英语水平有了很大提高，但一线检查人员的英语水平与新时期的执勤执法要求仍不相适应，特别是对边防检查中的许多专业词汇不知如何翻译。由于边检英语明显区别于其他文体，其涉外敏感性和翻译现状决定了翻译时需遵循语言等效，译名统一和专业表达的原则。1边检英语翻译的三大原则1.1语言等效原则1.2译名统一原则当前，口岸交流活动日益频繁，在边防检查领域仍存在着译名不规范、不统一现象，对边检英语的语言等效翻译产生了一定影响。一般来说，译名统一原则力求“一名一译”，而不是“一名多译”。概念和术语的唯一性和单义性决定了其在目的语中的译文应是唯一的，而不是多个译本。以“边防检查站”翻译为例，在两种译法“FrontierInspectionStation”和“ImmigrationInspectionStation”中，笔者认为后者为最佳译法。原因如下：从语境上来说，“immigration”系中性词，泛指出入国境人员和交通运输工具的出入国边境行为，能最大限度地实现了译文等效；它还能与“inspection”搭配，符合英语表达习惯。前者译法则不够贴切，原因如下：“frontier”一词的语气和情感色彩都比较强调“国土、边境”意义，容易让人联想到国家主权含义，具有一定的“threatening”（威胁性）。虽然边检机关曾对多个译名进行过统一，但因语言习惯和约定俗成等原因，仍存在译名翻译和使用不统一、不规范的问题，给口岸对外交流带来了不同程度的影响和困扰。1.3专业表达原则2边检英语翻译三大原则之间的关系当翻译原则之间出现冲突、一个对应词翻译无法满足以上所有原则时，语言等效原则是最重要、最基本的原则，其他原则可以做出让步和牺牲。如在涉及地名翻译时，应坚持以语言等效为主、其他翻译原则为辅，常采取音译为主的译法。以“藏南地区”为例，应音译为“ZangnanArea”，或直译为“SouthTibet”。绝不能译成印度或西方国家的惯用语“ArunachalPradesh”（阿鲁纳恰尔邦），它是英国殖民时期的旧称，象征英印的版图。再如“口岸开放政策”一词，英语里没有“openpolicy”这种固定表达方式，但不能简单地对译为“portopen-doorpolicy”。这种译法容易让人联想起近代的“门户开放政策”。应从我国独立自主的外交政策出发，将之直译为“openpolicy”（opening-uppolicy），不能因为一味地迎合西方读者的语言习惯，而牺牲译文的语言等效含义。3结束语边检英语是出入境边防检查工作必不可少的工具，是边检人员与服务对象沟通交流的重要桥梁和纽带。由于培训机制和个人基础参差不齐等原因，部分一线检查人员英语运用和翻译能力尚未达到当前对外开放口岸执勤执法工作的需要，也不能顺利完成与外籍服务对象的沟通和交流。因此，在今后的英语学习培训中，笔者认为可充分考虑运用先进信息化技术设备（网路学习室、投影仪、声像资料等），引入计算机辅助教学、多媒体课件应用等，把文字、声音、图像等多种信息融合于一体，全面培养边检人员的学习意识和听、说、读、写，尤其是翻译能力。同时，建立英语培训长效机制，通过开设“英语角”、每周选定一天作为“英语日”和开展边检英语翻译竞赛等形式，营造浓厚的语言学习氛围，提高人员英语学习的趣味性和有效性，推动整体英语语言能力和翻译水平的提升，强化边检人员的服务素质与基础，为驻地口岸开放和经济发展做出贡献。【发酵大题范围1、纪律是管理关系的形式。——阿法纳西耶夫发酵大1参数检测参数检测2例：鸟苷生产在鸟苷发酵中，发现发酵到40小时后鸟苷合成速率下降，但糖耗速率并未下降，而且由于耗糖,使发酵过程pH下降，补入氨水增多。那么糖耗到哪里去了呢？于是进行以下一些测定与分析例：鸟苷生产在鸟苷发酵中，发现发酵到40小时后鸟苷合成速率下3什么因素导致pH下降？1、有机酸的积累有机酸积累pH下降补加氨水在正常代谢情况下，细胞通过EMP途径和TCA循环的过程是为细胞合成提供前体和能量的，按照细胞经济学的原则不会供过于求，即不会出现有机酸的积累若发酵后期有机酸积累会引起加入的[NH4+]积累，相应出现产苷速率下降。——代谢不正常什么因素导致pH下降？1、有机酸的积累4测定以下中间物发酵后期丙酮酸积累测定以下中间物发酵后期丙酮酸积累52、氨基酸的积累在有机酸分析的基础上进一步通过HPLC测定发酵过程中不同时间发酵液中氨基酸，结果发现总氨基酸积累并且其积累晚于有机酸和[NH4+]积累。2、氨基酸的积累6氨基酸成分分析表明，初始发酵液中谷氨酸浓度比较高，其它氨基酸浓度都较低，随着发酵过程的进行谷氨酸很快被用于菌体合成，在8小时之前已经降到很低水平，并始终维持在低水平，而在48小时左右丙氨酸开始出现明显的积累，发酵液中积累量达到初始量的12.6倍之多，其它十余种氨基酸浓度则变化不大，并且在整个发酵过程中都维持在较低水平。因此，丙氨酸浓度变化可能是导致代谢流迁移所致。氨基酸成分分析表明，初始发酵液中谷氨酸浓度比较高，其它氨基酸73、分析原因发酵过程中积累的氨基酸主要是丙氨酸，而丙氨酸的合成可以直接由丙酮酸转化而来，因此可以推断由于EMP途径代谢流的增加造成了丙酮酸的积累，丙酮酸随后转化为丙氨酸丙氨酸本身又会对谷氨酸合成酶（GS）造成反馈抑制和阻遏，使产苷速率降低。3、分析原因8恶性循环激活磷酸果糖激酶丙酮酸积累氨水补加增加[NH4+]积累抑制GS抑制TCA循环丙酮酸积累EMP流量增加丙氨酸积累恶性循环激活磷酸果糖激酶丙酮酸积累氨9（二）代谢流迁移的酶学证明糖代谢途径关键酶糖酵解途径（EMP）在糖酵解途径中有两个不可逆的步骤的酶：磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶磷酸果糖激酶的时序分析（二）代谢流迁移的酶学证明1012小时时由于生长处于对数生长初期，代谢活力较低，所以PFK的活力相对较低。24小时后随着发酵过程进入平稳产物形成期和细胞生长期，磷酸果糖激酶的活力也基本保持平稳。但是到40小时以后，鸟苷形成速率减慢甚至停止，同时观察到氨基酸和有机酸积累，PFK相对酶活增加，这表明此时通过EMP途径的糖代谢通量已有了明显的增加。12小时时由于生长处于对数生长初期，代谢活力较低，所以PFK11丙酮酸激酶时序分析丙酮酸激酶时序分析12丙酮酸激酶没有表现出明显的酶活增加，而是在24小时就基本上达到其最大值，随后维持在恒定的水平，这表明在糖代谢时EMP途径代谢流增加中丙酮酸激酶所起的作用不大，不是造成代谢流迁移的主要因素磷酸戊糖途径（HMP）关键酶磷酸戊糖途径中主要的限速酶是6－磷酸葡萄糖脱氢酶，该酶催化6－磷酸葡萄糖脱氢生成6－磷酸葡萄糖酸内酯。丙酮酸激酶没有表现出明显的酶活增加，而是在24小时就基本上达136－磷酸葡萄糖脱氢酶时序分析由图可以看到，早期6－磷酸葡萄糖脱氢酶活力很高，这可能是前期菌体合成代谢比较活跃，通过HMP途径合成用于细胞成分的核酸等组成物质；随后基本不变，从而保持EMP和HMP途径通量的平衡，此时稳定持续的形成产物；但是到40小时后，6－磷酸葡萄糖脱氢酶已经表现出明显的下降趋势，并且随着后期发酵过程的进行而持续下降。根据物料平衡原则，有可能糖代谢在HMP途径通量下降而EMP途径通量增加。6－磷酸葡萄糖脱氢酶时序分析由图可以看到，早期6－磷酸葡萄糖14三羧酸(TCA)循环的关键酶三羧酸循环是“消耗”丙酮酸的途径，三羧酸流量大丙酮酸不会积累。三羧酸循环中的关键酶为柠檬酸合成酶，其催化乙酰辅酶A与草酰乙酸缩合形成柠檬酸，是三羧酸循环的启动步骤，也是三羧酸循环中的主要控制点，由柠檬酸合成酶所催化的反应是三羧酸循环中的第一个限速步骤。三羧酸(TCA)循环的关键酶三羧酸循环是“消耗”丙酮酸的途径15柠檬酸合成酶时序分析柠檬酸合成酶时序分析16从图可以看到，TCA循环的关键酶柠檬酸合成酶在整个发酵过程中，尤其是在后期产苷速率下降的过程中都维持比较平稳的水平，这表明在发酵过程后期所发生的代谢流迁移时，TCA循环的通量并没有发生明显的增加。即代谢流迁移发生在EMP和HMP之间，主要是由于EMP和HMP途径之间的分配平衡被打破所造成的。EMP途径代谢流的增加造成了一种代谢流的溢流现象。从图可以看到，TCA循环的关键酶柠檬酸合成酶在整个发酵过程中17丙氨酸脱氢酶的时序分析丙氨酸脱氢酶的时序分析18在发酵中后期，丙氨酸脱氢酶活力出现了明显的增加。丙氨酸脱氢酶催化由丙酮酸生成丙氨酸，该酶活性增加与丙酮酸和丙氨酸的时序增加相吻合，这些数据表明代谢流的溢流现象发生在柠檬酸合成酶之前的丙酮酸节点，通过丙氨酸脱氢酶生成丙氨酸，从而缓解了EMP途径代谢流增加造成的代谢不平衡。结果加入EMP途径的抑制剂，克服了代谢流迁移的问题，提高了鸟苷的产量在发酵中后期，丙氨酸脱氢酶活力出现了明显的增加。丙氨酸脱氢酶19基因工程菌基因工程菌20（三）基因不稳定性生产的目标是得到最大量的外源蛋白，但是大量外源蛋白的形成对宿主细胞是有损害的，通常是致死的，失去制造外源蛋白的能力的细胞一般生长得快得多，从而能替代有生产能力的菌株，这就导致基因的不稳定性。基因的不稳定性原因：分离丢失结构不稳定性宿主细胞调节突变（三）基因不稳定性生产的目标是得到最大量的外源蛋白，但是大量211、分离丢失

指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒子代菌的现象。为什么会出现质粒丢失呢？质粒可分为高拷贝质粒（>20拷贝/细胞）和低拷贝质粒（有时低到每个细胞一至二个拷贝）。低拷贝质粒有专门的机制保证在子代细胞中有相等的分配，高拷贝质粒通常很少遵循二分法分配到子代细胞。对于高拷贝质粒，绝大多数子细胞接受一些质粒，也有可能有的细胞没有接受质粒，出现质粒丢失。虽然形成无质粒细胞的可能性是低的（每百万细胞分裂中一个）。1、分离丢失指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒子代菌的现象22在大的反应器中含有非常多的细胞，总会存在无质粒细胞，例如1000L发酵液，每毫升有109个细胞，总共就有1015个细胞，那么在这个反应器中就含有109个无质粒细胞。质粒的分离丢失受许多环境因素影响，如溶氧、温度、培养基组成和恒化器中的稀释速率。许多质粒也会形成多聚体，它是相同质粒附着在一起形成一个单位。在大的反应器中含有非常多的细胞，总会存在无质粒细胞，例如1023分离丢失示意图分离丢失示意图242、质粒结构不稳定性

指外源基因从质粒上丢失或碱基重排、缺失所致工程菌性能的改变。如果质粒发生突变，仍保留了抗生素抗性基因，但不合成外源蛋白，那么这些突变株仍能在含有抗生素的培养基中生长。而且由于不合成外源蛋白，生长得比原来的工程菌更快，使得在这种培养物中带有突变质粒的菌占统治地位，这种培养情况就是结构不稳定性。2、质粒结构不稳定性指外源基因从质粒上丢失或碱基重排、缺失253、宿主细胞突变

宿主细胞的突变也会造成生产能力的下降。这些突变通常改变细胞调节，结果减少目标蛋白的合成。例如，控制外源蛋白表达的启动子，利用宿主细胞的启动子，如果宿主细胞启动子的改变，将大大改变质粒编码蛋白的生产水平。乳糖操纵子是常用是操纵子，通过加入乳糖或它的结构类似物（如IPTG）来启动表达，如果乳糖操纵子编码半乳糖苷透酶的基因发生突变就会阻止乳糖或乳糖的结构类似物进入细胞，从而不能启动细胞的表达。3、宿主细胞突变宿主细胞的突变也会造成生产能力的下降。这些264、生长速率占优势的不稳定性所有这三种因素的关键是变异了的宿主载体系统和原宿主-载体系统的生长速率不同。如果变异了的宿主载体系统比原来的宿主-载体系统有生长优势，那么变异了的系统将最终占优势，基因不稳定性就出现。

（四）表达的诱导基因工程菌的产物表达需要诱导，诱因主要有：温度诱导、乳糖或乳糖结构类似物诱导、氧饥饿诱导、葡萄糖饥饿诱导、甲醇诱导等。4、生长速率占优势的不稳定性所有这三种因素的关键是变异了的宿27提高质粒稳定性的方法

1、两阶段培养法：第一阶段使菌体生长至一定密度，第二阶段诱导外源基因的表达。在培养基中加入选择性压力如抗生素等，以抑制质粒丢失菌的生长。2、通过控制环境参数（温度、PH、培养基组分和溶解氧浓度），调节比生长速率，使工程菌生长具有优势。有些含质粒的菌对发酵环境的改变比不含质粒的菌反应慢，因而间歇改变培养条件以改变这两种菌的比生长速率，可以改善质粒的稳定性。提高质粒稳定性的方法28染菌染菌293、不同时间染菌对发酵的影响污染时间是指用无菌检测方法确准的污染时间，不是杂菌窜入培养液的时间。杂菌进入培养液后，需有足够的生长、繁殖的时间才能显现出来，显现的时间又与污染菌量有关。污染的菌量多，显现染菌所需的时间就短，污染菌量少，显现染菌的时间就长。3、不同时间染菌对发酵的影响污染时间是指用无菌检测方法确准的30（1）种子培养期染菌由于接种量较小，生产菌生长一开始不占优势，而且培养液中几乎没有抗生素（产物）或只有很少抗生素（产物）。因而它防御杂菌能力低，容易污染杂菌。如在此阶段染菌，应将培养液全部废弃。（1）种子培养期染菌由于接种量较小，生产菌生长一开始不占优势31（2）发酵前期染菌发酵前期最易染菌，且危害最大。原因发酵前期菌量不很多，与杂菌没有竞争优势；且还未合成产物（抗生素）或产生很少，抵御杂菌能力弱。在这个时期要特别警惕以制止染菌的发生。染菌措施可以用降低培养温度，调整补料量，用酸碱调pH值，缩短培养周期等措施予以补救。如果前期染菌，且培养基养料消耗不多，可以重新灭菌，补加一些营养，重新接种再用。（2）发酵前期染菌发酵前期最易染菌，且危害最大。32（3）发酵中期染菌

发酵中期染菌会严重干扰产生菌的代谢。杂菌大量产酸，培养液pH下降；糖、氮消耗快，发酵液发粘，菌丝自溶，产物分泌减少或停止，有时甚至会使已产生的产物分解。有时也会使发酵液发臭，产生大量泡沫。措施降温培养，减少补料，密切注意代谢变化情况。如果发酵单位到达一定水平可以提前放罐，或者抗生素生产中可以将高单位的发酵液输送一部分到染菌罐，抑制杂菌。（3）发酵中期染菌发酵中期染菌会严重干扰产生菌的代谢。杂菌33（4）发酵后期染菌发酵后期发酵液内已积累大量的产物，特别是抗生素，对杂菌有一定的抑制或杀灭能力。因此如果染菌不多，对生产影响不大。如果染菌严重，又破坏性较大，可以提前放罐。（4）发酵后期染菌发酵后期发酵液内已积累大量的产物，特别是抗34带图题带图题35谷氨酸正常发酵与异常发酵溶解氧变化谷氨酸正常发酵与异常发酵溶解氧变化36氧气氧气37实例一对黄色短杆菌生物合成氨基酸时发现：菌体的临界溶氧浓度为0.01mg/L当溶氧浓度低于1.0时，谷氨酸和天冬氨酸族氨基酸合成受到影响，但苯丙氨酸，缬氨酸和亮氨酸最佳合成的溶氧浓度分别为0.55、0.60和0.85。实例一对黄色短杆菌生物合成氨基酸时发现：菌体的临界溶氧浓度为38从合成途径中可知，谷氨酸和天冬氨酸族的氨基酸来自于三羧酸循环(TCA)的中间体，而苯丙氨酸、缬氨酸和亮氨酸来自于糖酵解的中间体，即来自于丙酮酸和磷酸稀醇式丙酮酸。从合成途径中可知，谷氨酸和天冬氨酸族的氨基酸来自于三羧酸循环39温度温度40在四环素发酵中，还发现生物热和菌的呼吸强度的变化有对应关系，特别是在80小时以前。从此实验中还可看到，当产生的生物热达到高峰时，糖的利用速度也最大。另外也有人提出，可从菌体的耗氧率来衡量生物热的大小。

四环素生物合成过程中系列参数的动态变化过程1：效价；2：呼吸强度；3：生物热；4：糖浓度在四环素发酵中，还发现生物热和菌的呼吸强度的变化有对应关系，41第二题第二题421、微生物对温度的要求不同与它们的膜结构物理化学性质有密切关系根据细胞膜的液体镶嵌模型，细胞在正常生理条件下，膜中的脂质成分应保持液晶状态，只有当细胞膜处于液晶状态，才能维持细胞的正常生理功能，使细胞处于最佳生长状态微生物的生长温度与细胞膜的液晶温度范围相一致。二、微生物与温度相关性的原理1、微生物对温度的要求不同与它们的膜结构物理化学性质有密切关432、蛋白质结构人们采用二种方案来研究酶在低温条件下的结构完整性和催化功能：(1)通过自然或诱导突变，将特定残基发生改变的蛋白与其天然结构进行对比；(2)对比同属嗜热、嗜温及嗜冷菌的蛋白结构通过对嗜冷酶的蛋白质模型和x一射线衍射分析表明，嗜冷酶分子间的作用力减弱，与溶剂的作用加强，酶结构的柔韧性增加，使酶在低温下容易被底物诱导产生催化作用2、蛋白质结构人们采用二种方案来研究酶在低温条件下的结构完整44

嗜冷菌具有在0℃合成蛋白质的能力。这是由于其核糖体、酶类以及细胞中的可溶性因子等对低温的适应，蛋白质翻译的错误率最低。许多中温菌不能在O0C合成蛋白质，一方面是由于其核糖体对低温的不适应，翻译过程中不能形成有效的起始复合物，另一方面是由于低温下细胞膜的破坏导致氨基酸等内容物的泄露。3、蛋白质合成嗜冷菌具有在0℃合成蛋白质的能力。这是由于其核糖体、酶类454、合成冷休克蛋白低温微生物适应低温的另一机制是合成冷休克蛋白将大肠杆菌从370C突然转移到100C条件时细胞中会诱导合成一组冷休克蛋白，它们对低温的生理适应过程中发挥着重要作用，检测嗜冷酵母的冷休克反应，发现冷刺激后冷休克蛋白在很短时间内大量产生。耐冷菌由于生活在温度波动的环境中，它们必须忍受温度的快速降低，这与它们产生的冷休克蛋白是密切相关的。4、合成冷休克蛋白466、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎

7、自知之明是最难得的知识。——西班牙

8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加

9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯

10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿Thankyou拯畏怖汾关炉烹霉躲渠早膘岸缅兰辆坐蔬光膊列板哮瞥疹傻俘源拯割宜跟三叉神经痛-治疗三叉神经痛-治疗6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺47发酵大题范围1、纪律是管理关系的形式。——阿法纳西耶夫2、改革如果不讲纪律，就难以成功。3、道德行为训练，不是通过语言影响，而是让儿童练习良好道德行为，克服懒惰、轻率、不守纪律、颓废等不良行为。4、学校没有纪律便如磨房里没有水。——夸美纽斯5、教导儿童服从真理、服从集体，养成儿童自觉的纪律性，这是儿童道德教育最重要的部分。——陈鹤琴发酵大题范围发酵大题范围1、纪律是管理关系的形式。——阿法纳西耶夫2、改革如果不讲纪律，就难以成功。3、道德行为训练，不是通过语言影响，而是让儿童练习良好道德行为，克服懒惰、轻率、不守纪律、颓废等不良行为。4、学校没有纪律便如磨房里没有水。——夸美纽斯5、教导儿童服从真理、服从集体，养成儿童自觉的纪律性，这是儿童道德教育最重要的部分。——陈鹤琴参数检测例：鸟苷生产在鸟苷发酵中，发现发酵到40小时后鸟苷合成速率下降，但糖耗速率并未下降，而且由于耗糖,使发酵过程pH下降，补入氨水增多。那么糖耗到哪里去了呢？于是进行以下一些测定与分析随着新课程改革的不断深入，历史教学发生着巨大的变化，改变传统的历史教学模式，探索新的适合新课程理念的教学方法和手段，实现课堂教学的有效性，成为历史教师们孜孜以求的目标。笔者经过了多年的新课程教学实践，对历史教学的方法进行了探索和尝试，期间有困惑、失败，也有收获的喜悦，在诸多的教学方法的尝试中，笔者认为情境教学是提高历史教学有效性的重要途径。所谓情境教学，是指从教学需要和学生的实际出发，教师有目的地引入或创设具有一定情绪色彩的、以形象为主体的生动具体的场景，以引起学生一定的态度体验，从而帮助学生理解教材，并使学生的心理机能得到发展的教学方法。那么如何创设情境提高历史教学的有效性？笔者从以下几个方面进行了总结：一、利用史料有效创设问题情境虽然历史教科书是获得历史知识和培养历史思维的基础性资源，但由于其空间的局限，教科书呈现的内容过于简练，语言抽象，并且结论性的内容太多，致使教师和学生固守教科书中的结论，创新、质疑的精神就被扼杀了，三维目标中的过程与方法也难以体现。如何优化三维目标，实现课堂教学的有效性，照本宣科是不行的。因此，课堂教学要根据学生实际和内容需要通，通过呈现一些材料情境，设置有思维性的问题来引导学生阅读、分析、质疑、解决问题，用已有的经验，结合材料构建自己的历史认识和历史知识，真正做到“论从史出，史论结合”。使学生真正成为历史探究的主体，使课堂成为学生探索历史的场所，促成学生的开放性思维和创新能力，从而提高学生运用知识等能力。历史上的史料非常丰富，历史著作、碑文、报纸杂志、诗歌、小说、戏剧、民谣、图片、遗址等。老师要善于挖掘，搜集和整理，以此来拓宽学生的知识面。教材里提供的史料，教师也要充分利用，也可以借鉴和引用一些高考试题里的材料题。但史料的运用一定要有所选择，要典型，要与课堂教学紧密结合起来，既要注重质又要注重量。所选史料、所提问题必须符合客观规律，并遵循由浅入深、由易到难、循序渐进的原则。在历史教学中运用史料创设情境，不仅能体现历史的真实性、生动性，还可以培养学生历史思维，拓宽学生的历史视野。但是在史料的选择上要慎重，选择的史料要典型，对所选的史料要甄别，不能断章取义，主观臆断。这就要求教师平时多读书、多思考、多研究，不断提高自身的专业素养。二、通过直观形象的手段再现历史情境历史是丰富多彩的，在历史事件发生的过程中，历史人物有着丰富的情感、复杂的心理、生动的语言等等。但在现在的历史教科书中，这些生动的历史场景只剩下干瘪的躯壳，失去了它原有的生命力。要激发学生的学习兴趣、要增强学生对历史的感性认识、要提高学生对历史问题的理性分析、要在更高程度上实现历史教学的有效性，有必要通过直观形象的手段，再现历史现场历史的丰富性、生动性。再现历史情境的手段有很多种，例如用历史图片再现历史情境，历史图片包括人物图片、实物图片及历史地图等。利用图片创设情境，可以丰富学生的感性认识，把较复杂的问题简明化，抽象的问题形象化，便于学生理解。多媒体是一种现代化的教学手段，可以呈现文字、图片、音乐、动画、视频、电影等。用多媒体辅助教学能够直观“再现”历史，可以图文并茂、声情兼备地的创设历史情境，学生有身临其境之感，如《抗日战争》中日军暴行的视频、古代的书法绘画作品欣赏、邓小平的“南巡”谈话……都能通过多媒体手段将抽象变为具体，有效地将形象和思维融为一体。利用多媒体创设情境起着事半功倍的效果。但不管哪种直观的教学手段都是服务与教学目的，教学的目的不是用这些丰富多彩的图片资料和影像资料吸引学生，而是让学生对情境中蕴含的历史信息和问题进行思考和探究。所以在用多媒体进行教学时，教师要对所呈现的情境的表达方式、时间、结合情境所产生的历史问题精心设计，启发学生进入主动探求、积极思考的状态，从而达到最佳的教学效果。同时还要注意不能让学生成为观众，教师成为解说员不断点击鼠标，连续演示媒体，喧宾夺主，没有时间搜集学生反馈的信息，学生也来不及对知识内容做出深入细致的思考，不能参与其中，这样的教学就成了无效教学。三、用角色扮演体验情境角色扮演是通过扮演历史人物、模仿历史人物的所思、所想、所行，营造出特定的历史时空，创设出一种身临其境的氛围，让学生充分参与教学、体验历史的方法。这种方法既可以让学生把自己放置在特定的历史氛围中去把握历史人物的思想和情感，又能够拉近学生与历史的距离，充分调动学生的积极性和参与性，从而在内心体验所扮演的历史人物的心态及当时的历史状况。学生参与了整个教学过程，有助于他们更好地理解过去，更深刻地记住历史、认识历史、理解历史、感悟历史。角色扮演并不是为了表演而表演，背背台词，表演前对历史人物的认识，表演中与同学的合作，表演后的评价更加重要，所以这一方法最好配合讨论法同时进行，有助于培养学生的语言智能和合作精神。角色扮演准备的过程相对要复杂一些，要收集资料，选演员、编剧、导演，设计场景到最后的表演、评价、总结，要发挥学生的主体性，教师不能包办代办，也不能袖手旁观，要发挥其主导作用，给予资料查找、主题的确定方面的指导，以及表演后的评价。情境教学可以为学生创设良好的学习氛围，有利于激发学生的学习兴趣和动机，培养学生的实践能力，培养学生的合作意识和创造能力，无疑是提高历史教学有效性的重要途径。0前言随着时代的发展和改革开放的不断深入，我国与世界各国的交往越来越频繁，英语在出入境边防检查中发挥着越来越重要的作用。多年来，通过积极开展边检英语培训，边检人员英语水平有了很大提高，但一线检查人员的英语水平与新时期的执勤执法要求仍不相适应，特别是对边防检查中的许多专业词汇不知如何翻译。由于边检英语明显区别于其他文体，其涉外敏感性和翻译现状决定了翻译时需遵循语言等效，译名统一和专业表达的原则。1边检英语翻译的三大原则1.1语言等效原则1.2译名统一原则当前，口岸交流活动日益频繁，在边防检查领域仍存在着译名不规范、不统一现象，对边检英语的语言等效翻译产生了一定影响。一般来说，译名统一原则力求“一名一译”，而不是“一名多译”。概念和术语的唯一性和单义性决定了其在目的语中的译文应是唯一的，而不是多个译本。以“边防检查站”翻译为例，在两种译法“FrontierInspectionStation”和“ImmigrationInspectionStation”中，笔者认为后者为最佳译法。原因如下：从语境上来说，“immigration”系中性词，泛指出入国境人员和交通运输工具的出入国边境行为，能最大限度地实现了译文等效；它还能与“inspection”搭配，符合英语表达习惯。前者译法则不够贴切，原因如下：“frontier”一词的语气和情感色彩都比较强调“国土、边境”意义，容易让人联想到国家主权含义，具有一定的“threatening”（威胁性）。虽然边检机关曾对多个译名进行过统一，但因语言习惯和约定俗成等原因，仍存在译名翻译和使用不统一、不规范的问题，给口岸对外交流带来了不同程度的影响和困扰。1.3专业表达原则2边检英语翻译三大原则之间的关系当翻译原则之间出现冲突、一个对应词翻译无法满足以上所有原则时，语言等效原则是最重要、最基本的原则，其他原则可以做出让步和牺牲。如在涉及地名翻译时，应坚持以语言等效为主、其他翻译原则为辅，常采取音译为主的译法。以“藏南地区”为例，应音译为“ZangnanArea”，或直译为“SouthTibet”。绝不能译成印度或西方国家的惯用语“ArunachalPradesh”（阿鲁纳恰尔邦），它是英国殖民时期的旧称，象征英印的版图。再如“口岸开放政策”一词，英语里没有“openpolicy”这种固定表达方式，但不能简单地对译为“portopen-doorpolicy”。这种译法容易让人联想起近代的“门户开放政策”。应从我国独立自主的外交政策出发，将之直译为“openpolicy”（opening-uppolicy），不能因为一味地迎合西方读者的语言习惯，而牺牲译文的语言等效含义。3结束语边检英语是出入境边防检查工作必不可少的工具，是边检人员与服务对象沟通交流的重要桥梁和纽带。由于培训机制和个人基础参差不齐等原因，部分一线检查人员英语运用和翻译能力尚未达到当前对外开放口岸执勤执法工作的需要，也不能顺利完成与外籍服务对象的沟通和交流。因此，在今后的英语学习培训中，笔者认为可充分考虑运用先进信息化技术设备（网路学习室、投影仪、声像资料等），引入计算机辅助教学、多媒体课件应用等，把文字、声音、图像等多种信息融合于一体，全面培养边检人员的学习意识和听、说、读、写，尤其是翻译能力。同时，建立英语培训长效机制，通过开设“英语角”、每周选定一天作为“英语日”和开展边检英语翻译竞赛等形式，营造浓厚的语言学习氛围，提高人员英语学习的趣味性和有效性，推动整体英语语言能力和翻译水平的提升，强化边检人员的服务素质与基础，为驻地口岸开放和经济发展做出贡献。【发酵大题范围1、纪律是管理关系的形式。——阿法纳西耶夫发酵大48参数检测参数检测49例：鸟苷生产在鸟苷发酵中，发现发酵到40小时后鸟苷合成速率下降，但糖耗速率并未下降，而且由于耗糖,使发酵过程pH下降，补入氨水增多。那么糖耗到哪里去了呢？于是进行以下一些测定与分析例：鸟苷生产在鸟苷发酵中，发现发酵到40小时后鸟苷合成速率下50什么因素导致pH下降？1、有机酸的积累有机酸积累pH下降补加氨水在正常代谢情况下，细胞通过EMP途径和TCA循环的过程是为细胞合成提供前体和能量的，按照细胞经济学的原则不会供过于求，即不会出现有机酸的积累若发酵后期有机酸积累会引起加入的[NH4+]积累，相应出现产苷速率下降。——代谢不正常什么因素导致pH下降？1、有机酸的积累51测定以下中间物发酵后期丙酮酸积累测定以下中间物发酵后期丙酮酸积累522、氨基酸的积累在有机酸分析的基础上进一步通过HPLC测定发酵过程中不同时间发酵液中氨基酸，结果发现总氨基酸积累并且其积累晚于有机酸和[NH4+]积累。2、氨基酸的积累53氨基酸成分分析表明，初始发酵液中谷氨酸浓度比较高，其它氨基酸浓度都较低，随着发酵过程的进行谷氨酸很快被用于菌体合成，在8小时之前已经降到很低水平，并始终维持在低水平，而在48小时左右丙氨酸开始出现明显的积累，发酵液中积累量达到初始量的12.6倍之多，其它十余种氨基酸浓度则变化不大，并且在整个发酵过程中都维持在较低水平。因此，丙氨酸浓度变化可能是导致代谢流迁移所致。氨基酸成分分析表明，初始发酵液中谷氨酸浓度比较高，其它氨基酸543、分析原因发酵过程中积累的氨基酸主要是丙氨酸，而丙氨酸的合成可以直接由丙酮酸转化而来，因此可以推断由于EMP途径代谢流的增加造成了丙酮酸的积累，丙酮酸随后转化为丙氨酸丙氨酸本身又会对谷氨酸合成酶（GS）造成反馈抑制和阻遏，使产苷速率降低。3、分析原因55恶性循环激活磷酸果糖激酶丙酮酸积累氨水补加增加[NH4+]积累抑制GS抑制TCA循环丙酮酸积累EMP流量增加丙氨酸积累恶性循环激活磷酸果糖激酶丙酮酸积累氨56（二）代谢流迁移的酶学证明糖代谢途径关键酶糖酵解途径（EMP）在糖酵解途径中有两个不可逆的步骤的酶：磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶磷酸果糖激酶的时序分析（二）代谢流迁移的酶学证明5712小时时由于生长处于对数生长初期，代谢活力较低，所以PFK的活力相对较低。24小时后随着发酵过程进入平稳产物形成期和细胞生长期，磷酸果糖激酶的活力也基本保持平稳。但是到40小时以后，鸟苷形成速率减慢甚至停止，同时观察到氨基酸和有机酸积累，PFK相对酶活增加，这表明此时通过EMP途径的糖代谢通量已有了明显的增加。12小时时由于生长处于对数生长初期，代谢活力较低，所以PFK58丙酮酸激酶时序分析丙酮酸激酶时序分析59丙酮酸激酶没有表现出明显的酶活增加，而是在24小时就基本上达到其最大值，随后维持在恒定的水平，这表明在糖代谢时EMP途径代谢流增加中丙酮酸激酶所起的作用不大，不是造成代谢流迁移的主要因素磷酸戊糖途径（HMP）关键酶磷酸戊糖途径中主要的限速酶是6－磷酸葡萄糖脱氢酶，该酶催化6－磷酸葡萄糖脱氢生成6－磷酸葡萄糖酸内酯。丙酮酸激酶没有表现出明显的酶活增加，而是在24小时就基本上达606－磷酸葡萄糖脱氢酶时序分析由图可以看到，早期6－磷酸葡萄糖脱氢酶活力很高，这可能是前期菌体合成代谢比较活跃，通过HMP途径合成用于细胞成分的核酸等组成物质；随后基本不变，从而保持EMP和HMP途径通量的平衡，此时稳定持续的形成产物；但是到40小时后，6－磷酸葡萄糖脱氢酶已经表现出明显的下降趋势，并且随着后期发酵过程的进行而持续下降。根据物料平衡原则，有可能糖代谢在HMP途径通量下降而EMP途径通量增加。6－磷酸葡萄糖脱氢酶时序分析由图可以看到，早期6－磷酸葡萄糖61三羧酸(TCA)循环的关键酶三羧酸循环是“消耗”丙酮酸的途径，三羧酸流量大丙酮酸不会积累。三羧酸循环中的关键酶为柠檬酸合成酶，其催化乙酰辅酶A与草酰乙酸缩合形成柠檬酸，是三羧酸循环的启动步骤，也是三羧酸循环中的主要控制点，由柠檬酸合成酶所催化的反应是三羧酸循环中的第一个限速步骤。三羧酸(TCA)循环的关键酶三羧酸循环是“消耗”丙酮酸的途径62柠檬酸合成酶时序分析柠檬酸合成酶时序分析63从图可以看到，TCA循环的关键酶柠檬酸合成酶在整个发酵过程中，尤其是在后期产苷速率下降的过程中都维持比较平稳的水平，这表明在发酵过程后期所发生的代谢流迁移时，TCA循环的通量并没有发生明显的增加。即代谢流迁移发生在EMP和HMP之间，主要是由于EMP和HMP途径之间的分配平衡被打破所造成的。EMP途径代谢流的增加造成了一种代谢流的溢流现象。从图可以看到，TCA循环的关键酶柠檬酸合成酶在整个发酵过程中64丙氨酸脱氢酶的时序分析丙氨酸脱氢酶的时序分析65在发酵中后期，丙氨酸脱氢酶活力出现了明显的增加。丙氨酸脱氢酶催化由丙酮酸生成丙氨酸，该酶活性增加与丙酮酸和丙氨酸的时序增加相吻合，这些数据表明代谢流的溢流现象发生在柠檬酸合成酶之前的丙酮酸节点，通过丙氨酸脱氢酶生成丙氨酸，从而缓解了EMP途径代谢流增加造成的代谢不平衡。结果加入EMP途径的抑制剂，克服了代谢流迁移的问题，提高了鸟苷的产量在发酵中后期，丙氨酸脱氢酶活力出现了明显的增加。丙氨酸脱氢酶66基因工程菌基因工程菌67（三）基因不稳定性生产的目标是得到最大量的外源蛋白，但是大量外源蛋白的形成对宿主细胞是有损害的，通常是致死的，失去制造外源蛋白的能力的细胞一般生长得快得多，从而能替代有生产能力的菌株，这就导致基因的不稳定性。基因的不稳定性原因：分离丢失结构不稳定性宿主细胞调节突变（三）基因不稳定性生产的目标是得到最大量的外源蛋白，但是大量681、分离丢失

指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒子代菌的现象。为什么会出现质粒丢失呢？质粒可分为高拷贝质粒（>20拷贝/细胞）和低拷贝质粒（有时低到每个细胞一至二个拷贝）。低拷贝质粒有专门的机制保证在子代细胞中有相等的分配，高拷贝质粒通常很少遵循二分法分配到子代细胞。对于高拷贝质粒，绝大多数子细胞接受一些质粒，也有可能有的细胞没有接受质粒，出现质粒丢失。虽然形成无质粒细胞的可能性是低的（每百万细胞分裂中一个）。1、分离丢失指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒子代菌的现象69在大的反应器中含有非常多的细胞，总会存在无质粒细胞，例如1000L发酵液，每毫升有109个细胞，总共就有1015个细胞，那么在这个反应器中就含有109个无质粒细胞。质粒的分离丢失受许多环境因素影响，如溶氧、温度、培养基组成和恒化器中的稀释速率。许多质粒也会形成多聚体，它是相同质粒附着在一起形成一个单位。在大的反应器中含有非常多的细胞，总会存在无质粒细胞，例如1070分离丢失示意图分离丢失示意图712、质粒结构不稳定性

指外源基因从质粒上丢失或碱基重排、缺失所致工程菌性能的改变。如果质粒发生突变，仍保留了抗生素抗性基因，但不合成外源蛋白，那么这些突变株仍能在含有抗生素的培养基中生长。而且由于不合成外源蛋白，生长得比原来的工程菌更快，使得在这种培养物中带有突变质粒的菌占统治地位，这种培养情况就是结构不稳定性。2、质粒结构不稳定性指外源基因从质粒上丢失或碱基重排、缺失723、宿主细胞突变

宿主细胞的突变也会造成生产能力的下降。这些突变通常改变细胞调节，结果减少目标蛋白的合成。例如，控制外源蛋白表达的启动子，利用宿主细胞的启动子，如果宿主细胞启动子的改变，将大大改变质粒编码蛋白的生产水平。乳糖操纵子是常用是操纵子，通过加入乳糖或它的结构类似物（如IPTG）来启动表达，如果乳糖操纵子编码半乳糖苷透酶的基因发生突变就会阻止乳糖或乳糖的结构类似物进入细胞，从而不能启动细胞的表达。3、宿主细胞突变宿主细胞的突变也会造成生产能力的下降。这些734、生长速率占优势的不稳定性所有这三种因素的关键是变异了的宿主载体系统和原宿主-载体系统的生长速率不同。如果变异了的宿主载体系统比原来的宿主-载体系统有生长优势，那么变异了的系统将最终占优势，基因不稳定性就出现。

（四）表达的诱导基因工程菌的产物表达需要诱导，诱因主要有：温度诱导、乳糖或乳糖结构类似物诱导、氧饥饿诱导、葡萄糖饥饿诱导、甲醇诱导等。4、生长速率占优势的不稳定性所有这三种因素的关键是变异了的宿74提高质粒稳定性的方法

1、两阶段培养法：第一阶段使菌体生长至一定密度，第二阶段诱导外源基因的表达。在培养基中加入选择性压力如抗生素等，以抑制质粒丢失菌的生长。2、通过控制环境参数（温度、PH、培养基组分和溶解氧浓度），调节比生长速率，使工程菌生长具有优势。有些含质粒的菌对发酵环境的改变比不含质粒的菌反应慢，因而间歇改变培养条件以改变这两种菌的比生长速率，可以改善质粒的稳定性。提高质粒稳定性的方法75染菌染菌763、不同时间染菌对发酵的影响污染时间是指用无菌检测方法确准的污染时间，不是杂菌窜入培养液的时间。杂菌进入培养液后，需有足够的生长、繁殖的时间才能显现出来，显现的时间又与污染菌量有关。污染的菌量多，显现染菌所需的时间就短，污染菌量少，显现染菌的时间就长。3、不同时间染菌对发酵的影响污染时间是指用无菌检测方法确准的77（1）种子培养期染菌由于接种量较小，生产菌生长一开始不占优势，而且培养液中几乎没有抗生素（产物）或只有很少抗生素（产物）。因而它防御杂菌能力低，容易污染杂菌。如在此阶段染菌，应将培养液全部废弃。（1）种子培养期染菌由于接种量较小，生产菌生长一开始不占优势78（2）发酵前期染菌发酵前期最