临床生物化学和生物化学检验

第六章

诊断酶学P136-176蚌埠医学院生化与分子生物学教研室1教学目标[教学时数]6学时[掌握]血清酶的分类、生理变异、病生机制等，同工酶及其亚型测定，临床诊断中常用的血清酶及其同工酶，重要血清酶的测定、原理及评价。[熟悉]酶的有关酶基本知识，酶活性浓度的测定技术及酶的免疫化学测定。2

第一节血清酶

3一、血清酶的来源根据酶的来源及其在血浆中发挥催化功能的情况，将其分为：P143一般代谢酶组织专一酶血浆特异酶非血浆特异酶外分泌酶细胞酶一般代谢酶组织专一酶血浆特异酶非血浆特异酶外分泌酶细胞酶血清酶4

名称

血浆特异酶

非血浆特异酶

外分泌酶细胞酶一般代谢酶组织专一酶来源肝消化腺或其它外分泌腺

各组织器官

（无器官专一性）

肝

（有器官专一性）

种类凝血酶原、Ⅹ因子、Ⅻ因子、纤溶酶原、ChE、CER、LCAT、脂蛋白脂肪酶等

胰淀粉酶、胰脂肪酶、胰蛋白酶、ACP、ALP等LDH、AST、ALT、CK、MDH等

OCT等

5二、血清酶的去路酶蛋白在血管内的失活与降解（主要代谢去路）血清酶的半寿期（T1/2)：酶失活至原来活性一半所需时间。有助于了解同一疾病不同酶升高持续时间的差异。肝或网状内皮系统对血清酶的清除少数以酶原形式存在的血清酶类（凝血酶原、纤溶酶原）在活化后迅速被肝清除，网状内皮系统也可能参与血清酶（LD、AST、AMY、CK等）的清除。血清酶的排泄尿路是血清中低分子量酶的重要排泄途径，如胃蛋白酶原、淀粉酶（AMY）。转入其它体液只有血清酶的来源与去路保持平衡，才能维持酶活性保持相对恒定。但一些病理情况往往促使这种平衡被打破，导致血清酶活性的变化。P1436三、血清酶变化的病理机制（一）合成异常合成减少合成增多肝损害导致合成酶的能力受损（ChE、LCAT）酶基因变异引起酶合成减少（铜氧化酶）增生性疾病（骨骼疾病，ALP)恶性肿瘤（前列腺癌，ACP)酶的诱导作用（乙醇，γ-GT）P1447（二）释放增加（大多数血清酶增高的主要机制）细胞内外酶浓度的差异对于非血浆特异酶，细胞内外浓度差可在千倍以上，只要有少量细胞坏死或病变，血中酶浓度明显升高。对血浆特异酶，细胞病变很少引起血中酶浓度明显升高。酶的相对分子量（影响细胞内释出的关键）酶从细胞内释出的速度与酶的相对分子量成反比。如AMI时，血中最先升高的是CK（MW：85kD)，LD（MW：125kD)出现升高明显延迟。酶的组织分布含酶量高且血流丰富的组织器官，其细胞内酶进入血流的可能性大；除少数组织专一性酶以外，大多数血清酶不能特异反映某个特定组织的病变。但同工酶的发现大大提高酶检测的组织的特异性。酶在细胞内的定位及存在形式线粒体酶不易从细胞中释出，如ASTm的检测往往反映肝细胞的损伤程度，且是AMI中最后升高的酶，用于判断预后；有些酶在细胞内与结构蛋白结合，较难释放。ATPATP不足，细胞内酶容易释放。P1458（三）排出异常肾功能减退，血清AMY活性升高可能因酶排泄障碍而在血液中滞留。胆道梗阻，血清ALP升高的原因是梗阻区ALP合成加强，ALP排泄受阻而逆流入血。大多数酶，不存在以上的清除机制。P1459四、血清酶的生理差异（一）性别多数酶无差异，少数有差异男性高于女性：CK、ALP、γ-GT女性高于男性：LDH1（青年妇女）（二）年龄最明显的例子是ALP，新生儿血清中ALP略高于成人，1～5岁增至成人的2～3倍，然后逐渐下降，到10～15岁，ALP又明显升高，可达成人的3～5倍，20岁后降至成人值。（三）饮食血清中大多数酶不受进食影响，故测定酶活性不一定需要空腹采血。（四）运动激烈的肌肉运动可使血清中多种酶，如CK、LD、AST、ALD、ALT等活性升高。（五）妊娠（六）其它P14510第二二节节酶活性性浓度度的测测定技技术P146-P16011酶活性性浓度度的测测定技技术酶活性性浓度度概念念酶活性性浓度度测定定连续监监测法法检测测酶活活性浓浓度工具酶酶血清酶酶活性性浓度度测定定条件件的优优化酶活性性浓度度的单单位12一、酶酶活性性浓度度的概概念1.酶酶的特特性：：微量量性、高效性性等。直接测量非常困难（mmol/L或mg/dl）通过测定被加速化学反应的反应速率，来间接反映酶的浓度2.酶酶促反反应SSEE+ESEPE+PV＝dsdt或V＝dpdtES133.酶酶活性性浓度度即酶所催催化的的化学学反应应的反反应速速率，用酶促促反应应中单单位时时间内内底物物的减减少量量或产产物的的生成成量来来计算算。注意：只有当当酶所所催化化的反反应速速度仅仅与[E]成成正正比，，而不不受其其它因因素影影响时时，即即在酶酶促反反应的的零级期期，才能根根据酶酶所催催化的的化学学反应应速率率来确确切表表示酶酶活性性浓度度的大大小。。P14614实际上上是通通过检检测酶酶活性性浓度度间接接反映映酶的的量，，因为为直接接检测测酶的的质量量浓度度要求求的实实验条条件及及技术术条件件非常常高，，价格格昂贵贵，不不适用用于临临床检检测，，因此此测定定酶活活性浓浓度是是临床床酶学学分析析最为为常见见的方方法，，具有有迅速速、灵灵敏、、成本本低等等特点点。但仅在在上述述前提提下，，只能能在反反应的的零级级期，，即只只有在在酶促促反应应的最最适条条件下下，才才能真真实地地代表表酶含含量。。因此此可根根据酶酶促反反应进进程曲曲线，，采用用合理理的方方法进进行酶酶活性性浓度度的检检测。。15零级一级[P][S]V＝dpdt反应级级数时间4.酶酶促反反应进进程延滞期期线性期期非线性性期P147LagphaseZeroorderLinearphaseFirstorder酶促反反应时时间进进程曲曲线16单试剂剂测定定体系系酶促促反应应进程程曲线线P14817结论：为了计算酶酶活性浓度度，必须根根据线性反反应期（零零级反应期期）的反应应速率才能能准确计算算出酶活性性浓度否则则将导致误误差。酶活性浓度度测定就是是要使酶促促反应的初初速度达到到Vmax，即在过过量底物存存在下的零零级反应期期的V，此此时V与[E]之间间有线性关关系。P14818二、酶活性性浓度测定定方法（一）按检检测方法分分类1、量气法法其原理是通通过测量一一封闭反应应系统中气气体变化后后的气体体体积或压力力，从而计计算出气体体的变化量量适用于测定定在反应中中产生或消消耗气体体的酶2、分光光光度法酶促反应的的底物与产产物结构不不同，光吸吸收谱也有有差异，不不仅能在可可见光范围围测定有色色溶液的浓浓度，还能能在紫外光光波长范围围测定特异异的带有双双键或环状状结构的无无色物质3、荧光法法和放射性性核素法通过荧光光光度计测定定酶促反应应生成荧光光物质的速速率，此速速率与酶浓浓度成正比比4、其它方方法P14619（二）按反反应时间分分类1、定时法（取样法、、终点法、、两点法））优点：简单，测定时酶促反应已被终止，故比色计或分光光度计无需保温设备，显色剂的选择不考虑对酶活性的影响。缺点：无法知道在整个酶促反应进程中是否都是零级反应。注意：应先做预实验找出酶促反应速率恒定的时期，确定线性时间；保证酶和底物在所选定的温度下作用时间要精确。P14820定时法，早期测定定酶活性浓浓度的方法法，大多是是使酶作用用一段时间间，然后加加入强酸、、强碱、蛋蛋白沉淀剂剂等终止酶酶促反应，，测定这段段时间内底底物的减少少量或产物物的生成量量，计算酶酶促反应的的平均速度度。连续监测法法，即指连续测测定酶促反反应过程中中某一产物物或底物浓浓度随时间间变化的多多点数据，，求出酶促促反应初速速度，间接接计算出酶酶活性浓度度的方法。。其是临床床测定酶活活性浓度最最常用方法法。212、连续监测法法（动力学法法、速率法法）优点：容易找到直直线区域，，选择线性性反应期来来计算酶活活性，不需终止反反应。缺点：线性反应期期因酶种类类和反应条条件而异，，必须用实实验方法进进行确定，，必须选取取酶促反应应的最适反反应条件，，需要有可可以连续监监测的设备备。P1493、平衡法法目前临床应应用较少，，通过测定定酶促反应应开始至反反应达到平平衡时产物物或底物浓浓度的总变变化量来求求出酶活性性浓度的方方法。22三、连续监监测法测定定酶活性浓浓度（一）种类类1.直接法法不终止酶促促反应条件件下，直接接通过测定定反应体系系中底物或或产物理化化性质的变变化（如：：A、荧光光、旋光性性，pH、、电导率、、粘度等）），从而计计算出酶活活性浓度。。评价方法简单，，但只有底底物与产物物之间，在在理化性质质方面有显显著性差异异时，才能能使用直接接法，只有有很少一部部分酶能用用直接法测测定。P14923（1）目目前以分光光光度法最最为广泛，，利用340nm处吸吸光度的变变化测定各各种脱氢酶酶。NAD(P)++H+NAD(P)H

仅在260nm处有吸收峰

在260、340nm处有吸收峰340nm处A的变变化可以反反映反应体体系中NAD(P)H量的增增减，进而而反映酶活活性浓度。。（2）利用用一类人工合合成的所谓色色原性底物，，其本身为无色色或微黄色，，酶作用后生生成有色化合合物。P14924（1）在原反反应体系中加加入一些试剂剂，其只和酶酶反应物迅速速作用，产生生可被检出的的物质，但该该试剂不和酶酶反应，也不不影响酶的活活性。SPE+试剂可被检出的物物质（2）酶偶联联法目前应用最多多，即在原反应应体系中加入入另一些酶试试剂，所进行行的酶促反应应和被测酶反反应偶联起来来。P14925（二）酶偶联联反应反应模式ABPExEi被测酶被测酶始发反应始发反应指示反应指示酶指示反应指示酶ABCPExEaEi辅助酶辅助反应酶偶联体系辅助酶辅助反应P149261.酶偶联联反应时相酶偶联反应一一开始不能反反映酶活性，，在反应中存存在几个时相相。以临床常常规酶学分析析中常见的ALT的检测测为例，在该该酶偶联体系系中的指示酶酶为脱氢酶，，反应原理如如下：L-丙氨酸＋＋α-酮戊二酸α-丙酮酸＋L-谷氨酸酸α-丙酮酸＋NADH乳乳酸＋＋NAD+ALTLDH此时反应的方方向由NADH转变为NAD，随反反应进行，A应随之而下下降，通过检检测反应产物物A在340nm处A的的变化速率，，可以检测指指示酶反应。。P150ALT双试剂剂法测定中，，首先使血清清与缺少α-酮戊二酸的的底物溶液混混合，37°C保温5m，将将样品中所含含的内源性α-酮酸消耗完完。然后再加加入α-酮戊二酸启启动ALT催催化的反应。。27反应一开始加加入的试剂1中只有丙氨氨酸，不存在在α-酮戊二酸，，在此时相中中，存在于样样品中的干扰扰物质（内源源性α-酮酸）消耗耗完。加入试剂2（（即α-酮戊二酸））启动反应，，在初始阶段段，产物α-丙酮酸开始始出现，并逐逐渐增多，但但处于较低水水平，指示酶酶反应速度也也较低，不能能代表待测酶酶的Vx。随着产物α-丙酮酸增加加到一定程度度，Ex和Ei反应V相相同，达到稳稳态期。此阶阶段340nm处A出现现明显的线性性变化。最后由于底物物的消耗，反反应V逐渐减减慢，偏离线线性。P150282.酶偶联反应注注意事项(1)延滞期应越短短越好，测定定时间要避开开此期。(2)不是所所有的酶都适适合用酶偶联联法进行测定定，酶偶联反反应V应超过过或等于Vx，Ei反应应必须是一级级反应，即指指示酶反应速速率和测定酶酶的产物B浓浓度成正比。。只有使用大大量的Ei及及其Km值很很小时才能做做到。(3)从经济济方面考虑应应选用一些来来源容易且价价格便宜的酶酶（指示酶））制剂。(4)适当的的指示酶的用用量，反复实实验法确定，，即做到酶偶偶联速率不随随酶量的增加加而升高，并并在所选的最最适条件下，，指示酶偶联联反应速率和和酶活性浓度度成正比。P15029（三）干扰因因素(1)其他酶酶和物质的干干扰(2)酶的污污染(3)非酶反反应(4)分析容容器的污染(5)沉淀形形成解决方法之一一可通过试剂剂空白管检出出并加以校正正，另一个有有效途径就是是不用单一试试剂而改用双双试剂测定酶酶活性。P15130四、工具酶工具酶：酶学学分析中作为为试剂用于测测定化合物浓浓度或酶活性性浓度的酶。。指示酶和辅助助酶作为反应应系统中的试试剂。（一）工具酶酶（二）常用工工具酶常用工具酶多多为氧化还原原酶类工具酶纯度不不必要求过高高工具酶中杂质质的含量有一一定的限制P15231（三）工具酶酶参与的指示示反应临床生化检验验中，很多项项目的测定往往往使用有工工具酶参与的的类似的反应应原理－－共共通（通用））反应途径。。1.偶联H2O2的工具酶及其其指示反应葡萄糖尿酸胆固醇甘油丙酮酸葡萄糖氧化酶尿酸氧化酶胆固醇氧化酶甘油氧化酶丙酮酸氧化酶H2O2以H（e）为受体的指示酶以NAD(P)H为辅酶参与的指示酶触酶POD(最常用）P1522H2O2+4-AAP+酚醌亚胺(红色)+4H2OPOD32例：葡葡萄糖糖氧化化酶法法测定定血清清葡萄萄糖Glu＋O2＋H2OGA＋H2O2H2O2＋4-AAP＋＋酚H2O＋O2＋红色色醌类类化合合物GODPOD葡萄糖糖氧化化酶（（glucoseoxidase，，GOD））利用用O2和H2O将Glu氧化化成GA，，并释释放H2O2，过氧氧化物物酶（（peroxidase，POD）在在色原原性氧氧受体体存在在时将将H2O2分解为为H2O和O2，并将将色原原性氧氧受体体4-AAP和和酚去去氢缩缩合为为红色色醌类类化合合物，，即Trinder反应应。红红色醌醌类化化合物物的量量与Glu含量量成正正比。。即POD催催化下下，H2O2氧化芳芳香族族胺色色素原原生成成有色色色素素，此此类色色素原原供氢氢体包包括：：OT、DAB、ODA、TMB。332.NAD(P)+或NAD(P)H偶偶联的的脱氢氢酶及及其指指示反反应许多氧氧化还还原反反应，，尤其其是作作为工工具酶酶如LD、、GLD、、G6PD等参参与时时，常常将底底物的的H去去除后后传递递给NAD(P)+形成NAD(P)H。借借助NAD(P)H340nm处处特征征性的的光吸吸收，，借此此用分分光光光度法法检测测。如：葡葡萄糖糖、尿尿素、、β-羟丁酸酸、甘甘油三三酯、、甲醇醇、血血氨、、ALT、AST、LD、、GLD、、CK、ALD、G6PD、、ICD等等。例：尿素＋H2O2NH3＋CO2NH3＋α-酮戊二酸＋NADH＋H+谷氨酸＋NAD+＋H2O尿素酶GLDP152P+NAD(P)H+H+PH2+NAD(P)+

34五、血血清酶酶活性性浓度度测定定条件件的优优化方法仪器设设备试剂自动生生物化化学分分析仪仪参数数设置置标本的的采集集、运运输与与保存存P15335标本的的采集集、运运输与与保存存溶血：：细胞胞内酶酶而言言，细细胞内内外浓浓度差差异大大；所所以应应及时时进行行分离离，静脉采采血后后应在在1～～2h内分分离血血清。抗凝剂剂：利利用草草酸盐盐、枸枸橼酸酸盐、、EDTA抗凝凝的血血浆一一般不不用作作酶活活性测测定；；肝素素对ALT、AST、CK、、LD、ACP检测测均无无影响响，可可用于于急诊诊；临临床多多用血清为首选选测定定标本本。温度：：大部部分酶酶在低低温中中比较较稳定定，一一般在在血清清分离离当天天测定定，否否则应应放冰冰箱冷冷藏；；通常在在0～～4°C下使用用、处处理及及保存存，除了了一些些冷变变性的的酶；；液氮氮可作作为酶酶学测测定时时血清清标本本及质质控长长期保保存的的方法法。P15536六、酶酶活性性浓度度单位位（一））酶活活性单单位惯用单单位用首先先报告告该种种酶测测定方方法的的临床床酶学学家的的名字字来命命名其其单位位，即即使同同一种种酶因因方法法不同同而有有数种种活性性单位位，参参考值值差别别很大大。国际单单位1963年年，1IU＝1μmol/min（（25°C及其他他最适适条件件下））1976年年，1U＝1μmol/min（特特定条条件下下）1979年年，1Katal＝＝1mol/s（规规定条条件下下），，1U＝16.67nKatalP15637（二））酶活活性浓浓度单单位以每单单位体体积所所含的的酶活活性单单位数数表示示；各国学学者习习惯用用U/L表表示体体液中中酶催催化活活性浓浓度，，1U/L=16.67nKatal/L正常上上限（（upperlimitsofnormal，ULN）倍倍数把酶测测定值值转换换为正正常上上限值值的倍倍数；；易于比比较解解释来来自不不同方方法的的结果果，利利于各各实验验室间间质评评调查查；可将ULN进一一步适适当分分级，，制定定出轻轻度、、中度度及重重度增增加的的范围围，使使检测测结果果更加加一目目了然然；P15638（三三））酶酶活活性性浓浓度度计计算算连续续监监测测法法检检测测酶酶活活性性浓浓度度时时，，使使用用摩摩尔尔消消光光系系数数（（ε）。。其其定定义义为为：：特特定定条条件件下下，，一一定定波波长长的的光光，，光光径径为为1.0cm时时，，通通过过所所含含吸吸光光物物质质的的浓浓度度为为1.00mol/L时时的的吸吸光光度度。。连续续监监测测法法测测定定在在线线性性范范围围内内每每分分钟钟吸吸光光度度的的变变化化（（ΔA/min））U/L＝ΔAmin×V×106ε×v×LΔA—吸光度变化106

—把mol换算成μmolv—样品量（ml）L

—比色杯光径（cm）V—反应体系体积（ml）ε—摩尔消光系数（cm2

·mol-1）P15739自动动生生物物化化学学分分析析仪仪测测定定同同一一酶酶，，条条件件固固定定时时，，从从理理论论上上讲讲V，，v和和L均均为为固固定定值值，，ε为常常数数，，则则可可将将公公式式简简写写为为：：U/L＝ΔAmin×KV×106ε×v×LK=K为为酶酶活活性性浓浓度度定定量量系系数数主要要用用于于临临床床酶酶活活性性测测定定的的计计算算与与校校正正K值值设设置置应应考考虑虑酶酶的的参参考考值值上上限限及及测测定定时时间间两两方方面面，，这这些些均均与与仪仪器器测测定定的的噪噪音音有有关关。。P15840第三节节酶的免疫疫化学测测定41一、报告告方式酶活性浓浓度单位位：U/L质量浓度度单位：：ng/ml，，μg/L二、优点点灵敏度高高特异性高高能用于检检测一些些不表现现酶活性性的酶蛋蛋白特别适用用于同工工酶的检检测样品中其其他方法法不易测测出的少少量或痕痕量酶不受体液液中其它它物质的的影响酶原或去去辅基酶酶蛋白P16042三、缺点点要制备足足够量多多的提纯纯酶作为为抗原和和具有免免疫化学学性质的的抗血清清步骤多，，操作繁繁琐测定成本本高P16143第四节节同工酶及及其亚型型测定44一、概念念同工酶（（isoenzyme）同一种属属中由不不同基因因或等位位基因所所编码的的多肽链链单体、、纯聚体体或杂化化体，具具有相同同的催化化功能，，但其分分子组成成、空间间构象、、理化性性质、生生物学性性质以及及器官分分布和细细胞内定定位不同同的一类类酶。亚型（isoform）即指基因因在编码码过程中中由于翻翻译后修修饰的差差异所形形成的多多种形式式的一类类酶，往往往在基基因编码码产物从从细胞内内释入血血浆时因因肽酶作作用降解解而形成成。P16145二、分析方法法临床同工酶的的分析可分为为两步首先精确地分分离出某酶的的各同工酶组组分测定酶的总活活性和各同工工酶或亚型组组分的活性P16246二、分析方法法（一）电泳法法原理使用最为广泛泛简便、快速、、分离效果好好、不破坏酶酶的天然构象象可分为：乙酸酸纤维素薄膜膜电泳、聚丙丙烯酰胺凝胶胶电泳、等电电聚焦电泳及及毛细管电泳泳测定步骤为：：区带分离、、活性显色和和检测结果方法同工酶氨基酸酸组成不同（（一级结构不不同），pI不同，电泳泳迁移率也就就不同，电泳泳可将其分开开。P16347显色染料偶氮染料四唑盐离子型化合物物，易溶于水水，难溶于一一般的有机试试剂，利用其其进行的偶合合反应，生成成不同颜色的的偶氮色素进进行同工酶谱谱检测受氢体作用，，四唑盐可被被还原成紫红红色的formazan，常用的有有：NBT、、INT、MTT等。其其中NBT使使用最多。扫描定量光密度计荧光计P16348（二）色谱法法柱色谱法离子交换色谱谱亲和色谱商品化微型色色谱柱P16449（三）免疫分分析法免疫抑制法免疫沉淀法其它免疫学方方法

利用同工酶的一种亚基与相应抗体结合后，酶活性受到抑制，测定加与不加抗体前后样品中酶活性的变化

利用分离提纯的同工酶作抗原制备的抗体与含该型同工酶的待测样品混合，在一定条件下抗原抗体复合物形成沉淀，离心后测定上清液中其它型别的酶活性，将加入抗体前测得的总活性减去上清液酶活性，即可求出被沉淀的同工酶的活性。免疫电泳、RIA、EIA和CLIAP16450（四）动力学学分析法底物特异性分分析法抑制剂分析法法pH分析法热失活分析法法（五）蛋白酶酶水解法P16551三、同工酶检检测意义提高酶诊断的的特异性提高诊断的灵灵敏度对某些疾病的的预后有评价价价值有些同工酶有有明显的组织织分布和细胞胞内定位差异异有些同工酶的的变化可在总总酶变化之前前发生线粒体酶的测定52第五节临床常用血清清酶分析53一、转氨酶（（Aminotransferases）及其同工酶酶丙氨酸氨基转转移酶(Alanineaminotransferases，，ALT)/谷丙转氨氨酶GPT天冬氨酸氨基基转移酶(Aspartateaminotransferases，AST/谷谷草转氨酶酶GOT1.催化反应应L-丙氨酸＋α-酮戊二酸α-丙酮酸＋L-谷氨酸L-天冬氨酸＋α-酮戊二酸α-草酰乙酸＋L-谷氨酸ALTAST两种酶均需要要磷酸吡哆醛醛（VitB6）为辅基基，不含磷酸酸吡哆醛的酶酶蛋白为脱辅辅基酶蛋白，，无催化活性性。P166542.组织分布布ALT大量存存在于肝组织织，其次为肾、、心、骨骼肌肌等。其有两两种活性同工工酶，α(ALTs)、β(ALTm)，分别存在细细胞质及线粒粒体中。肝细细胞中ALT大多存在细细胞质，少量量在线粒体，，肝细胞坏死死时血清中以以ALTs为为主。AST存在多种器官官，按含量多多少为心、肝、骨骼肌和肾。。其有两种同同工酶ASTs、ASTm，分别存在细细胞质及线粒粒体中。细胞胞轻度损伤ASTs显著著升高，而严严重损伤时ASTm大量出现现于血清中。。血中AST升高多来自自心脏或肝脏脏损伤。P166553.标本溶血标本不能能用于检测宜用血清，4℃冰箱中可贮存存1星期，活活性无明显改改变。4.临床意义ALT是反映映肝损伤的一一个灵敏指标标急性肝炎早期期升高，ALT>AST；急性肝炎恢复复指标Deritis比值可用用于肝炎诊断断、鉴别诊断断及判断转归归酶胆分离是肝肝细胞坏死先先兆P16756AST主要用用于肝脏疾病病的诊断AMI发病6-8h即升升高，48-60h达高高峰，4-5d恢复正常常。由于AST在AMI时升高迟于于CK，恢复复早于LD，，故目前诊断断AMI价值值不大。急性肝炎，AST升高程程度不及ALT；慢性肝肝炎，特别肝肝硬化、慢性性活动性肝炎炎时，AST升高程度超超过ALT。。P16757二、γ-谷氨酰转移酶酶及其同工酶酶γ-谷氨酰转转移酶（γ-glutamyltranspeptid,γ-GT/GGT）1.催化反反应又称：γ-谷谷氨酰转肽酶酶（γ-GTP/GGTP)一种含巯基的的线粒体酶，可催化γ-谷氨酰基从从GSH或其其它含γ-谷谷氨酰基化合合物中转移至至另一肽或氨氨基酸分子上上。GSH＋氨基基酸γ-谷氨酰氨氨基酸＋半胱胱氨酰甘氨酸酸GGTP167582.组织分分布肾脏中含量最最多，其次为为胰、肺、肝肝等。血清中中的GGT主主要来自肝胆胆。3.标本GGT较稳定定，室温下可可放置2d，，4℃可存放1w，-20℃可储存1y；RBC中中几乎无GGT，因此溶溶血标本可以以检测。P167594.临床床意义有助肝胆疾病病的鉴别诊断断与ALP联合合进行肝脏疾疾病检测胆道疾病，GGT阳性率率高，而且升升高明显，可可高达5-30ULN，，肝实质疾病病是GGT一一般只是中度度升高，可达达2-5ULN。若ALP升高高而GGT正正常，则完全全排除ALP的肝来源，，若ALP和和GGT都增增加，则应先先排除肝外引引起GGT增增加的原因，，一旦排除，，则GGT增增高为肝病所所致。(1)肝肝胆疾病检出出阳性率最高高的酶(2)用于于判断恶性肿肿瘤有无肝转转移(3)乙醇醇、巴比妥类类药物等可诱诱导GGT的的升高。P16860三、肌酸激激酶及其同工工酶和亚型肌酸激酶（creatinekinase，CK）1.催化化反应CK催化肌酸酸和ATP或或磷酸肌酸和和ADP之间间的磷酸转移移的可逆性反反应，所产生的磷酸酸肌酸含高能能磷酸键，是是肌肉收缩时时能量的直接接来源。磷酸肌酸＋ADP肌酸＋ATPCKP168612.组织织分布广泛分布于全全身，在骨骼骼肌含量最高高，其次是心心肌和脑。CK由两种不不同亚基（M，B）组成成的二聚体，，细胞质中存存在三种同工工酶：CK-BB(CK1)、CK-MB(CK2)、CK-MM(CK3)，线粒体中中存在CK-Mt(CK4)，其电泳速速率最慢。CK同工酶又又可分为不同同亚型，CK-MM有三三种亚型，CK-MM1，CK-MM2，CK-MM3，电泳速率依依次减慢；CK-MB有有CK-MB2和CK-MB1两种亚型。3.标本本不得用溶血标标本，RBC中含有AK，可干扰测测定，引起测测定值偏高；；测定样品宜宜用血清或肝肝素抗凝血浆浆，其它抗凝凝剂都抑制CK活性。P168624.临床意义CK及其同工工酶和亚型是是目前临床上上测定次数最最多的酶之一一，主要用于于心肌、骨骼骼肌和脑疾患患的诊断。(1)AMI的早期期诊断总CK在AMI诊断中意义不大CK-MB为诊断AMI的金指标CK-MM3/CK-MM1>1.0为诊断AMI的标准（排除急性骨骼肌损伤）CK-MB2>1.9U/L或CK-MB2/CK-MB1>1.5为诊断AMI的标准之一(2)全全身疾病特别别是肌肉疾病病时，CK极极度升高P16963四、乳酸脱氢氢酶及其同工工酶和亚型乳酸脱氢酶（lactatedehydrogenase，LD/LDH）1.催化反反应LD催化乳酸酸氧化成丙酮酮酸，同时将将氢转移给辅辅酶而成为NADH，依依条件不同而而有可逆性。。L-乳酸＋NAD+丙酮酸＋NADH＋H+pH8.8～9.8Ph7.4～7.8P169642.组织分分布

LD是一种含锌的糖酵解酶，广泛存在于人体各组织中，以肝、心肌、肾、肌肉、RBC含量最高。LD是由两种不同亚基（M和H）组成的四聚体，形成5种结构不同的同工酶，即LD1(H4)，LD2(H3M)，LD3(H2M2)，LD4(HM3)和LD5(M4)。1.以LD1为主，主要在心肌，可占总LD活性50％以上，也存在于RBC内；2.以LD5为主，以横纹肌为代表，肝脏中也有；3.以LD3为主，存在于脾肺。一般成年人血中LD同工酶存在如下规律：LD2>LD1>LD3>LD4>LD5，部分正常儿童血中可见LD1>LD2。653.标本本一般用血清，，用血浆需离离心去除血小小板（血小板板中含有大量量的LD），，采血后迅速速分离血清；；因RBC中中LD含量比比血清高100倍以上，，不宜用溶血标标本。LD4、LD5宜冷冷变性性，不不应放放在冰冰箱中中，25℃放2-3d，LD活活性变变化不不大。。664.临临床意意义亚急性性心肌肌梗死死诊断断有一一定价价值，，但其其特异异性差差；(1)诊诊断心心脏疾疾病心肌梗梗死和和心肌肌炎时时以LD1和LD2升高为为主，，大多多数AMI患者者血中中会出出现““反转转比率率”，，即LD1>LD2；(2)诊诊断肝肝脏疾疾病肝细胞胞损伤伤时常常出现现LD5>LD4;急性肝肝炎时时LD1LD2相对下下降，，LD5升高；；慢性性肝炎炎时LD5升高，，且LD1<LD3；肝硬硬化时时为LD2下降和和LD5升高；；肝癌癌时LD5升高，，但LD1>LD3；(3)诊诊断骨骨骼肌肌疾病病骨骼肌肌损伤伤时常常出现现LD5>LD4;P17067五、碱碱性磷磷酸酶酶及其其同工工酶碱性磷磷酸酶酶（alkalinephosphatase，ALP/AKP）1.催催化反反应一种含含锌的的糖蛋蛋白，，在碱碱性环环境中中（pH10.0））可以以水解解各种种天然然及人人工合合成的的磷酸酸单酯酯化合合物。。2.组组织分分布ALP广泛泛存在在于各各组织织器官官中，，其含含量以以肝脏脏为最最多，，其次次为肾肾、胎胎盘、、小肠肠和骨骨骼等等。血血清中中的ALP主要要来自自肝脏脏和骨骨骼。。生长期期儿童童血清清内ALP主要要来自自成骨骨母细细胞和和生长长中的的骨软软骨细细胞，，少量量来自自肝。。P170683.标标本本空腹采采血，避免免脂肪肪餐的的影响响；样样品用用血清清，不能用用明显显溶血血标本本；在室室温或或冰箱箱放置置，活活性逐逐渐升升高，，可增增加5-10％％，应应在采采血当当日测测定。。4.临床意意义很多骨骨骼疾疾病如如变形形性骨骨炎等等患者者血中中ALP升升高，，我国国常用用于早早期诊诊断佝佝偻病病和软软骨病病。(1)诊诊断骨骨骼性性疾病病(2)诊断断肝胆胆系统统疾病病，尤尤其是是黄疸疸急性肝肝炎时时ALP增增高达达2-5ULN，肝肝硬化化、胆胆石症症和肿肿瘤引引起的的胆汁汁淤积积，ALP增高高达5-20ULN。90％％以上上肝外外胆道道阻塞塞患者者血清清ALP升升高，，升高高程度度和阻阻塞程程度、、病变变程度度成正正比。。P17069六、酸酸性磷磷酸酶酶及其其同工工酶酸性磷磷酸酶酶（acidphosphatase，ACP）1.催催化反反应作用类类似ALP的磷磷酸酶酶（最最适pH在在7.0以以下））2.组组织织分布布ACP存在在于人人体不不同组组织，，如前前列腺腺、红红细胞胞、血血小板板、肾肾脏、、肝脏脏、脾脾脏、、胃、、肌肉肉及骨骨髓中中，以以前列列腺含含量最最多。。正常常男性性血清清中ACP约有有1/3-1/2来来自前前列腺腺。3.标标本本血清或或肝素素抗凝凝血浆浆，37℃或偏碱碱时灭灭活很很快，，pH降至至6.5以以下，，酶比比较稳稳定。。