第四章微生物生长与生活环境演示文稿

第四章微生物生长与生活环境演示文稿第一页，共二十三页。（优选）第四章微生物生长与生活环境第二页，共二十三页。第一节微生物纯培养二、微生物纯培养技术1、稀释平板分离法：倾注平板法和涂布平板法。基本过程：（1）梯度稀释过程；（2）分离培养过程涂布倾注梯度稀释过程10-110-210-310-410-510-6第三页，共二十三页。第四页，共二十三页。2、单细胞挑取法：从待分离材料中挑取一个细胞来培养，从而获得纯培养的过程。第一节微生物纯培养二、微生物纯培养技术第五页，共二十三页。3、平皿划线法用接种环沾少许待分离的材料，在培养基表面进行多次平行划线，使微生物细胞分开生长以获得微生物纯培养的过程。第一节微生物纯培养二、微生物纯培养技术第六页，共二十三页。三、微生物无菌操作与接种技术培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。在实验室检验中的各种接种必须是无菌操作。（1）培养基与接菌工具的灭菌（2）保证接菌过程的无菌操作第七页，共二十三页。灭菌方法一、高温灭菌湿热灭菌干热灭菌：干燥条件，160℃维持1-2h。高压蒸汽灭菌法：密闭条件下，水加热蒸发形成高压的同时产生高温。利用高温杀死菌。巴斯德消毒法：采用60-70℃的温度处理15-30min

的消毒方法。间歇灭菌法：100℃，30-60min

冷却，37℃培养1d反复三次第八页，共二十三页。1、紫外线：杀菌波长范围：240—300nm杀菌力最强范围：255—265nm

二、辐射紫外线杀菌特点：穿透力差，用作表面消毒或空气灭菌，30min灭菌95%以上2、放射性同位素：Co60等，主要用于诱变产生新品种第九页，共二十三页。（一）纯培养的保存第一节微生物纯培养四、纯培养的保存与复壮保存过程的注意点：防止杂菌污染。1、传代保存法2、液体石蜡覆盖保存法3、载体保存法4、悬液保存法5、寄主保存法6、冷冻保存法第十页，共二十三页。（二）纯培养的衰退与复壮第一节微生物纯培养四、纯培养的保存与复壮衰退的原因：衰老、变异衰退的表现：生长缓慢优良性状的丧失抗逆性下降衰退的预防：控制传代频率创造良好的培养条件采取有效的保存方式复壮选优汰劣第十一页，共二十三页。一、微生物生长量的测定第二节微生物纯培养群体生长规律微生物生长量的测定微生物数量的测定显微镜直接计数法平板计数法比浊法称重法含N量测定法DNA含量测定法ATP含量测定法代谢活性法微生物重量的测定第十二页，共二十三页。(一)微生物数量的测定

1、显微镜直接计数法使用细菌计数板或血球计数板在显微镜下直接计数。

优点：操作简便，计数直观。一、微生物生长量的测定第二节微生物纯培养群体生长规律第十三页，共二十三页。2、平板计数法对样品稀释培养，据形成的菌落数计数。

优点：传统计数方法。对设备要求不高。一、微生物生长量的测定第二节微生物纯培养群体生长规律10-310-510-410-6第十四页，共二十三页。３、比浊计数法根据细菌悬浮液的吸光度测定其数量。优点：简便，直接。一、微生物生长量的测定第二节微生物纯培养群体生长规律第十五页，共二十三页。(二)微生物重量的测定

1、称重法用离心或过滤的方法将菌体从培养基中分离、冼净，称湿重或干重。优点：简单可靠。一、微生物生长量的测定第二节微生物纯培养群体生长规律在活性污泥法中采用的指标：（1）混合液悬浮固体(MLSS)（粗放测定）

污泥—干燥----称重(W1)（2）挥发性悬浮固体(MLVSS)（相对准确）

上述已称重污泥-----马福炉(500度2小时)----冷却---称重(W2)第十六页，共二十三页。(二)微生物重量的测定

2、含氮量测定法

根据样品中菌体蛋白质含量计算微生物重量的方法。

一、微生物生长量的测定第二节微生物纯培养群体生长规律原理：（1）微生物蛋白质含量稳定（2）氮是蛋白质的稳定成分

(蛋白质量=6.25×总含N量)优点：测定准确。“？”第十七页，共二十三页。第二节微生物纯培养群体生长规律（1）分批培养（2）连续培养第十八页，共二十三页。二、细菌分批培养群体生长规律第二节微生物纯培养群体生长规律分批培养(batchculture)：将少量的菌体接种到一定体积的液体培养基中，在适宜的条件下培养，最后一次性收获的过程。第十九页，共二十三页。生长曲线(growthcurve)代表细菌在新的适宜的环境中生长、繁殖、衰老、死亡的动态变化。生长曲线：以培养时间为横坐标，以细菌的数目的对数为纵坐标绘制成的曲线图。第二十页，共二十三页。

根据细菌生长繁殖速率将生长曲线分四个阶段：第二节微生物纯培养群体生长规律缓慢期对数期稳定期衰亡期二、细菌分批培养群体生长规律第二十一页，共二十三页。第二节微生物纯培养群体生长规律缓慢期（延迟期、滞留适应期）滞留适应期二、细菌分批培养群体生长规律特点：分裂迟缓。产生及影响缓慢期长短的因素１、培养基成分２、菌株的遗传性３、接种量４．接种时的机械损伤引第二十二页，共二十三页。第二节微生物纯培养群体生长规律对数期（指数生长期）特点：（1）代谢活性强（2）世代时短而稳定对数生长期二、细菌分批培养群体生长规律Nt=2nN0n=3.33(lgNt-lgN0)G=t/n=0.30