食品理化检验实验指导书

食品理化检验实验指导书适用课程：食品理化检验（实验）食品理化检验实训食品检验技术（实验）食品检验技术实训食品卫生与营养检测（实验）食品卫生与营养检测综合实训实验部分TOC\o"1-5"\h\z\o"CurrentDocument"实验一常压干燥法测定面粉的水分含量 1\o"CurrentDocument"实验二面粉总灰分的测定 3.\o"CurrentDocument"实验三果汁饮料中总酸及pH的测定 5实验四牛乳中还原糖的测定 8.\o"CurrentDocument"实验五 酱油中氨基酸态氮的测定 1.0\o"CurrentDocument"实验六 索氏提取法测定花生中粗脂肪的含量 .12\o"CurrentDocument"实验七牛奶粗脂肪含量的测定 1.4实验八 酱油中氯化钠含量的测定 1.6\o"CurrentDocument"实验九 酸水解法测定火腿肠中脂肪含量 19\o"CurrentDocument"实验十油脂酸价、过氧化值测定 21\o"CurrentDocument"实验十一分光光度法测定火腿肠中亚硝酸盐的含量 23\o"CurrentDocument"实验十二硫代巴比妥酸比色法测定食品中的山梨酸含量 24\o"CurrentDocument"实验十三 水果中维生素C含量的测定 28\o"CurrentDocument"实验十四 果胶的提取 33\o"CurrentDocument"实验十五果胶的测定 35\o"CurrentDocument"实验十六高效液相使用技能训练（色谱法测定茶叶中提取物） 36\o"CurrentDocument"实验十七 银耳中SO2 （漂白剂）的含量测定 .40选做实验\o"CurrentDocument"实验一比重瓶法测定酱油的相对密度 42\o"CurrentDocument"实验二酶水解法测定食品中淀粉含量 43\o"CurrentDocument"实验三乳化剂一蔗糖脂肪酸酯中游离蔗糖的测定 45\o"CurrentDocument"实验四 白酒中甲醇的测定一一品红亚硫酸比色法 47实验五 紫外分光光度法测定鸡蛋中的维生素A .49实验六 薄层层析法测定果酱中苯甲酸、山梨酸的含量 51实验七纸层析法测定日胡萝卜素 53实验八 分光光度法测定海带中碘的含量 55实训部分模块一基本技能训练 57实训一常用电器的使用技能 57实训二常用的物理检验仪器使用技能训练 60实训三 酸度计和电动磁力搅拌器的使用技能 68实训四索氏提取器的安装和使用技能训练 73实训五微量凯氏定氮仪的安装和使用技能训练 .75实训六薄层板的制备技术和薄层分析的点样技术训练 77模块二综合实训 7.8实训一糕点产品的理化检测 78实训二 酱菜类产品的理化检测 7..9实训三 肉制品的理化检测 8..048实验十四果胶的提取一、目的要求1．学习从柑橘皮中提取果胶的方法。2．进一步了解果胶质的有关知识。二、实验原理果胶物质广泛存在于植物中，主要分布于细胞壁之间的中胶层，尤其以果蔬中含量为多。不同的果蔬含果胶物质的量不同，山楂约为 6.6%,柑橘约为0.7〜1.5%,南瓜含量较多，约为7%〜17%。在果蔬中，尤其是在未成熟的水果和果皮中，果胶多数以原果胶存在，原果胶不溶于水，用酸水解，生成可溶性果胶，再进行脱色、沉淀、干燥即得商品果胶。从柑橘皮中提取的果胶是高酯化度的果胶，在食品工业中常用来制作果酱、果冻等食品。三、实验器材烘箱、恒温水浴锅、布氏漏斗、抽滤瓶、玻棒、尼龙布、表面皿、精密pH试纸、（100mL、250mL）烧杯、电子天平、小刀、真空泵、柑橘皮（新鲜）。四、实验试剂95%乙醇、无水乙醇。0.2mol/L盐酸溶液：18mLHCl溶于1000mL蒸储水中。6mol/L氨水：向100mL市售氨水（25-28%）中加入19mL水。五、操作步骤1.称取新鲜柑橘皮20g（干品为8g）,用清水洗净后，放入250mL烧杯中，加120mL水，加热至90c保温5〜10min,使酶失活。用水冲洗后切成3〜5mm大小的颗粒，用 50℃左右的热水漂洗，直至水为无色，果皮无异味为止。每次漂洗都要把果皮用尼龙布挤干，再进行下一次漂洗。2．将处理过的果皮粒放入烧杯中，加入 0.2mol/L的盐酸以浸没果皮为度，调溶液的pH2.0〜2.5之间。加热至90C,在恒温水浴中保温40min,保温期间要不断地搅动，趁热用垫有尼龙布 （100目）的布氏漏斗抽滤，收集滤液。3.滤液冷却后，用6mol/L氨水调至pH3〜4,在不断搅拌下缓缓地加入95%乙醇溶液，加入乙醇的量为原滤液体积的1.5倍（使其中酒精的质量分数达50%〜60%）。酒精加入过程中即可看到絮状果胶物质析出， 静置20min后，用尼龙布（100目）过滤制得湿果胶。4．将湿果胶转移于 100mL烧杯中，加入 30mL无水乙醇洗涤湿果胶，再用尼龙布过滤、挤压。将脱水的果胶放入表面皿中摊开，在60〜70c烘干。将烘干的果胶磨碎过筛，制得干果胶。六、注意事项.脱色中如抽滤困难可加入2%〜4%的硅藻土作助滤剂。2．湿果胶用无水乙醇洗涤，可进行 2次。3．滤液可用分馏法回收酒精。七、问题与思考1．从橘皮中提取果胶时，为什么要加热使酶失活？2．沉淀果胶除用乙醇外，还可用什么试剂？3．在工业上，可用什么果蔬原料提取果胶？实验十五果胶的测定一、实验目的了解并掌握果胶的检测方法。二、实验原理利用果胶酸钙不溶于水的特性，先使果胶质从样品中提取出来，再加氯化钙使成果胶酸钙沉淀，测定重量并换算成果胶质重量。三、实验器材1、仪器天平、恒温水浴锅、烘箱、电炉、刀、(250mL、500mL)烧杯、100mL量筒、滤纸2、试剂1N醋酸溶液：取58.3mL冰醋酸加水到1L。2N氯化钙溶液：取111.2更水氯化钙加水溶解成500mL。0.1N氢氧化钠溶液：称取4g氢氧化钠加水溶解成1L。(4)硫酸(5)桔子皮四、操作方法称取新鲜桔子皮30g-50g,用清水洗净后，放入250mL烧杯中，力口85C-90c热水使酶灭活，之后切成3-5mm的颗粒，再漂洗一次，挤干加入硫酸没过桔子皮，搅拌均匀，放入恒温水浴锅，每10-15min搅拌一次，搅拌一小时，呈粘稠状，再进行过滤，全部滤液移入250mL容量瓶中，加水定容。吸取滤液25mL于500mL烧杯中，加入0.1N氢氧化钠溶液100mL,放置0.5h,再加入1N醋酸溶液50ml。5min后加入2N氯化钙溶液50mL,放置lh,加热沸腾5min后，立即用烘干至恒重的滤纸过滤，用热水洗涤至无氯离子为止(可用硝酸银溶液检查无白色沉淀)。然后把带滤渣的滤纸放在预先烘干至恒重的称量瓶内，105c烘箱中烘至恒重。五、实验结果按下式计算：果胶质(％)0,9235G-250100W25式中：G——滤渣重量(g),W——样品重量(S),0.9235果胶酸钙换算为果胶质的系数。实验十六高效液相使用技能训练（色谱法测定茶叶中提取物）一、实验目的1、掌握高效液相色谱仪的原理。2、掌握高效液相色谱仪的操作方法、注意事项以及维护保养 。二、实验原理液相色谱分离系统由两相——固定相和流动相组成。液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键合固定相（或在惰性载体表面涂上一层液膜）、离子交换树脂或多孔性凝胶；流动相是各种溶剂。被分离混合物由流动相液体推动进入色谱柱。根据各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异进行分离。色谱分离的实质是样品分子（以下称溶质）与溶剂（即流动相或洗脱液）以及固定相分子间的作用，作用力的大小，决定色谱过程的保留行为。根据分离机制不同，液相色谱可分为：液固吸附色谱、液液分配色谱、化合键合色谱、离子交换色谱以及分子排阻色谱等类型。三、材料、试剂及仪器设备色谱级甲醇、茶叶、高效液相色谱仪四、实验步骤1、过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。2、对抽滤后的流动相进行超声脱气 10-20分钟。3.、打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。4、进入HPLC控制界面主菜单，点击manual,进入手动菜单。5、有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在 manual菜单下，先点击purge,再点击start,冲洗时速度不要超过10mL/min。6、调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure,选用合适的流速，点击on,走基线，观察基线的情况。7、设计走样方法。点击file,选取select?users?and?methods可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new?method选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。8、进样和进样后操作。选定走样方法，点击 start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击 postrun,可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。9、关机时，先关计算机，再关液相色谱。五、实验结果分析谱图六、注意事项使用试管的问题试管的洁净问题。如果因使用不洁净的试管，便会影响试验结果的准确性。例如，在用甲醇作溶剂来溶解样品时，所用的小试管是用橡胶塞来做盖子的，因此，在每次进样时，都有一个保留时间固定的干扰峰存在，后经证实，此干扰峰是由甲醇浸泡橡胶塞而溶下的组分所产生，换用玻璃试管后，干扰峰消除。塑料试管的溶解问题。在利用此种试管提取样品时，有些有机溶剂 (如氯仿等 )对管壁有溶解现象， 这些被溶解下来的物质有时也能在检测器上产生信号，从而干扰样品的测定。这时，可用相同的实验条件先行试验一下，看看不含被抽提物时，提取液在检测器上能否产生干扰信号，如确有干扰信号存在，就只能换用耐有机溶剂的玻璃试管了。被测样品在试管壁上的吸附问题。这个问题也应引起注意，否则也会影响测试结果的准确性，在治疗药物监测(TherapeuticDrugMonitoring,TDM)中，有些被测药物如阿米替林，丙咪嗪等易吸附在玻璃试管的管壁上，因此，操作中宜采用聚丙烯管，为防止提取中吸附现象的发生，可采用 0.5%的已二胺已烷液做为提取剂，可有效地防止吸附。操作进样阀的问题在高效液相色谱法的试验过程中，有时会有异常色谱峰的出现以及重现性不好的问题，这主要是由于操作方法不当所引起，要想解决此类问题，需从以下几个方面入手。进样量的控制。用进样阀来进样时，阀内的样品环是定量的， (一般分析型进样阀的样品环体积为20ul)，由于进样时，注射到进样阀内的样品溶液在样品环的管路中有径向的速度梯度 (即管轴处比管壁处的液流速度快 )。因此，要想使样品环中充满样品溶液，从而使用进样阀来准确地定量，则必须使进样量大于样品环体积的2倍。如果用注射器来控制进样量，则最大只能注射样品环体积1/2的量，这样才能防止部分样品由溢流管溢出从而导致定量分析的误差。进样阀的清洁问题。如果样品环中有上次进样时样品的残留，必然会污染下次注射进的样品，为防止这种现象的发生，应按下列步骤操作： a.进样阀有2个位置，INJECT和LOAD。首先在LOAD位置时，以注射器将流动相注入进样阀内清洗几次，每次用量大约40ul;b.然后将进样阀板手扳至INJECT位置时，再以流动相清洗几次，每次用量还是 40ul;c.最后，再将样品注射到进样阀里。按照上述的步骤操作，可以避免由进样阀引起的污染，从而使干扰峰消除并提高分析结果的准确性。进样阀溢流管的堵塞。有时，进样阀的溢流管会发生堵塞现象，向进样阀内注射样品时，注射针推不动。此故障是由于溢流管的堵塞所致。堵塞的原因多半是由于溶解样品的流动相用的是盐溶液，而其中的盐在溢流管的排空端口处结晶所致。此时，可用小烧杯盛少量蒸馏水对溢流管口稍加浸泡，端口处盐的结晶就能被溶解掉，故障排除。如能在每次进样完成之后，用蒸馏水反复冲洗至溢流管中的盐分全部冲出，则可避免此故障的发生。流动相(MOBLLEPHASE)的问题甲醇和乙腈在高效液相色谱分析法中常常被用来配制流动相。高效液相色谱法中常用的试剂最好是高等级的专用试剂，如色谱纯试剂。在要求不太严格时，优级纯甚至分析纯的试剂也能用。高效液相色谱分析法中常用的是紫外检测器，因此，从降低基线噪音和提高分析灵敏度上来考虑，应该使用紫外吸收小且杂质含量少的色谱纯试剂。(1)流动相的过滤。配制好的流动相在使用前一定要先用 0.5um孔径的微孔滤膜来过滤。这是因为溶液中含有很多肉眼难以发现的微小颗粒，如果不把它们滤除掉，就会堵塞泵口、柱头上的过滤器，这样就堵塞了流动相的正常通道，使色谱柱的阻力增加，柱压升高，柱效下降。碰到这种情况时，要换用经过滤的流动相，并将堵塞的滤器拆下来浸泡在 20%的硝酸水溶液中以超声波清洗机清洗20分钟，以除去滤片上的堵塞物。(2)流动相的脱气。流动相在使用前必须脱气，以尽可能的除去溶解在流动相中的气体，否则，这些气体会使柱填料的性能降低，还能够对检测器的信号产生很大的干扰。脱气有多种方法，如超声脱气、真空脱气、氮气脱气等。真空脱气法和氮气流脱气法是目前最常用的脱气法。水和甲醇混合后会产生大量的气泡，如果不脱气就使用，气泡就会进入色谱柱和检测器，并将影响分析工作的正常进行。色谱柱的使用和保养色谱柱是高效液相色谱仪最主要的部件，被测物质能否被很好的分离和测定，色谱柱的性能起着决定性的作用。因此，在日常工作中，应特别注意色谱柱的正确使用和维修保养，以延长色谱柱的使用寿命。(1)使用预柱和保护柱。预柱(pre-column)安装于泵和进样器之间，它给色谱柱中的流动相提供了完全的平衡，并防止了对柱填料有破坏作用的组分或污染物进入色谱柱。保护柱 (guardcolumn)可以阻挡能够牢固地吸附于色谱柱上的组分进入色谱柱，保护柱应与色谱柱的填料相同。预柱和保护柱可以经常更换，而不需要经常更换色谱柱，这就延长了色谱柱的使用寿命。防止气体进入色谱柱。有些色谱柱 (如凝胶柱 )是不允许气泡进入的，否则将会使柱效降低甚至形成微小的难以驱除的气室。因此，为了防止气泡进入色谱柱，一定要使用经过脱气的流动相，并且要严格按照下列步骤来安装色谱柱。a.拆卸下色谱柱入口处的密封螺丝，观察是否有溶剂渗出； b.如有溶剂渗出，即可将色谱柱接到管路上，以避免气泡的进入； c.如无溶剂渗出时，表明色谱柱的此端已经进去空气了，此时，可将色谱柱的出口端接到进样阀上，以流动相来反方向冲洗色谱柱，以便将柱内的空气排除。最好以0.2mL/min的小流量来冲色谱柱，如果溶剂的流速太快或者是压力突然的上升都将会导致柱性能的降低；d.如果流出的溶剂里不含有气泡，说明柱内的气体已经被排出了，再将色谱柱以正确的方向接好，这样气泡就进不到色谱柱里面了。色谱柱的清洗。为了不使被测物质和杂质停留在色谱柱中，在每次的样品分析工作完成之后，都应及时地清洗色谱柱。首先要用对被测样品洗脱能力强的溶剂来洗脱色谱柱，以分析工作中常用的反相色谱分析法为例，因其先流出的物质是极性大的物质，此时应用 100%的甲醇或使用异丙纯、四氢呋喃等极性稍弱的溶剂将吸附在柱内的极性小的物质洗脱下来，洗脱液的用量一般为柱体积的20倍即可。如果流动相是缓冲溶液，则应先用蒸馏水来冲洗色谱柱，以冲掉柱内的盐，然后再用合适的溶剂来冲洗。(4)色谱柱的存放。如果色谱柱暂时不用，存放时要注意以下几点： a.几天之内的短期放置，应先用溶剂冲洗好色谱柱 (如凝胶柱则用蒸馏水来冲洗 )，再把色谱柱的两头用密封螺丝密封好即可。b.如果色谱柱长期不用，仅用上述方法来处理就不行了，这时应使用色谱柱使用说明书中所指明的溶剂来充满色谱柱，反相柱一般使用甲醇，正相柱则可用正已烷或庚烷，而凝胶柱则不能用水了，因柱内如果有微生物的生长则会使柱效降低，此时应用0.05%的NaNs水溶液(防腐剂)来冲洗色谱柱，再将色谱柱封严。色谱柱长期放置时，一定要将色谱柱的两端封严，以防止由于溶剂挥发而造成的柱填料干缩现象，因这可导致柱效的严重降低。c.色谱柱应贮存在室温下，如果放置于 0c以下的环境里，柱内就会结冰，这也将导致柱效的降低。实验十七银耳中 SO2（漂白剂）的含量测定一、实验目的了解食品中 SO2（漂白剂）的检验方法。二、实验原理SO2遇水生成亚硫酸。以碘标准溶液滴定亚硫酸至呈现蓝色，以所消耗标准溶液的体积计算SO2含量。三、实验仪器与试剂仪器：酸式滴定管（棕色）、容量瓶（100mL、250mL、1000mL）、烧杯、分析天平、电子天平、漏斗、铁架台、移液管（1mL、10mL、25mL、50mL）、250mL碘量瓶、电炉试剂：1、1mol/LKOH溶液：准确称取5.6gKOH,加水溶解后转移至100mL容量瓶中，定容。2、硫酸溶液（ 1+3）：1体积的硫酸 +3体积的蒸馏水，配制时把硫酸慢慢沿容器壁倒到水里面，边加入边搅拌，冷却后即可使用。3、0.01mol/L1/2I2标准溶液：（1）配制：称取 1.3g碘及3.5g碘化钾，溶于100mL水中，稀释定容至1000mL,摇匀，贮存于棕色瓶中。（2）标定：量取35.00~40.00mL配制好的碘溶液，置于碘量瓶中，力口150mL水（15~20℃），用硫代硫酸钠标准滴定溶液 [（Na2S2O3）=0.01mol/L]滴定，近终点时加2mL淀粉指示液（10g/L），继续滴定至溶液蓝色消失。同时做水消耗碘的空白试验：取250mL水（15~20C）,力口0.05mL~0.20mL配制好的碘溶液及2mL淀粉指示液 （10g/L），用硫代硫酸钠标准滴定溶液 [（Na2S2O3）=0.01mol/L]滴定至溶液蓝色消失。1%淀粉溶液：称取可溶性淀粉1克，加5毫升蒸馏水，调成糊状，再加蒸馏水80毫升，加热，使其溶解，最后用蒸馏水稀释至100毫升。四、实验步骤在小烧杯内称取试样20g（精确至小数点后第二位），用蒸储水浸泡20min,用纱布过滤，将浸泡液转移至 250mL容量瓶中，然后加蒸馏水至总容量的1/2，加塞振荡，再加蒸馏水至刻度，摇匀。待瓶内液体澄清后，用移液管吸取澄清液 50mL，注入250mL碘量瓶中，再加入1mol/LKOH溶液25mL。将瓶内混合液用力振荡后放置10min,然后一边振荡，一边加入硫酸溶液10mL（1+3）和0.1%淀粉液1mL。以碘标准液滴定至呈现蓝色并于0.5min内不退色为止。同时，按上述方法做一空白试验。

五、实验结果五、实验结果氧化硫含量XV1V2 C0.0325氧化硫含量X—1 2 1000m式中：X样品中二氧化硫总含量，g/KgVi滴定样品时消耗1/2I2标准溶液的体积，mLV2空白试验消耗1/2I2标准溶液的体积，mLC1/2I2标准溶液的浓度，mol/Lm样品的质量，g0.0321/2SO2的毫摩尔质量，g/mmol六、思考题银耳中为彳f么会有SO2存在？选做实验实验一比重瓶法测定酱油的相对密度、实验目的掌握相对密度的测定原理及密度瓶的操作方法二、实验原理密度瓶具有一定的容积，在一定温度下，用同一密度瓶分别称量等体积的酱油和蒸储水的质量，两者之比即为酱油的相对密度。三、实验仪器和试剂普通密度瓶 水浴锅温度计滤纸 分析天平酱油蒸储水乙醇乙醴四、实验操作方法1.把密度瓶用自来水洗净，再依次用乙醇、乙醴洗涤，烘干并冷却后，精密称重mo02、将密度瓶装满酱油，盖上瓶盖，置于20c水浴中浸0.5小时，使瓶内酱油的温度达到20C,用滤纸条吸去毛细管溢出的酱油后取出。用滤纸小心把瓶外擦干，置天平室内30分钟后称量m2。3、将酱油倾出，洗净密度瓶，装入煮沸 30分钟并冷却到20c以下的蒸储水，按上法操作。测出同体积20c蒸储水的质量mi0五、计算：,20m2m0d20mim0,20 ,20ddd200.99823式中：m0空密度瓶质量gmi 密度瓶和水的质量gm2 密度瓶和酱油的质量g0.9982320C时水的密度g/cm3实验二酶水解法测定食品中淀粉含量一、实验目的1、了解并掌握斐林试剂直接滴定法测定淀粉含量的基本原理及操作要点。2、学会滴定法的基本操作技能。二、实验原理样品经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成双糖，再用盐酸将双糖水解成单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉。三、实验器材仪器：天平、恒温水浴锅、电炉、(100mL、250mL)容量瓶、移液管(5ml、10ml)、碱式滴定管、250ml三角瓶、酒精灯、漏斗、玻璃珠、100mL量筒、250mL烧杯试剂：(1)淀粉酶溶液(5g/L):称取淀粉酶0.5g,力口100mL水溶解，加入数滴甲苯或三氯甲烷，防止长霉，贮于冰箱中。碘溶液：称取3.6g碘化钾溶于 20mL水中，加入1.3g碘，溶解后加水稀释至100mL。乙醚。(4)乙醇(85%):85ml乙醇加15m。(5)其余试剂同食品中蔗糖的测定方法。四、实验步骤样品处理称取2.00~5.00小羊品，置于放有折叠滤纸的漏斗内，先用50mL乙醴分5次洗除脂肪，再用约100mL乙醇(85%)洗去可溶性糖类，将残留物移入250mL烧杯内，并用50mL水洗滤纸及漏斗，洗液并入烧杯内，将烧杯置沸水浴上加热 15min,使淀粉糊化，放冷至60c以下，加20mL淀粉酶溶液，在55~60C保温1h,并时时搅拌。然后取1滴此液加1滴碘溶液，应不显现蓝色，若显蓝色，再加热糊化并加 20mL淀粉酶溶液，继续保温，直至加碘不显蓝色为止。加热至沸，冷后移入 250mL容量瓶中，并加水至刻度，混匀，过滤，弃去初滤液。取 50mL滤液，置于250mL锥形瓶中，加5mL盐酸(1+1),装上回流冷凝器，在沸水浴中回流1h,冷后加2滴甲基红指示液，用氢氧化钠溶液(200g/L)中和至中性，溶液转入100mL容量瓶中，洗涤锥形瓶，洗液并入100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀备用。测定按食品中还原糖的测定方法操作。同时量取50mL水及与样品处理时相同量的淀粉酶溶液，按同一方法做试剂空白试验。五、实验结果与计算

AA0.950V1

m AA0.9250100100%式中：X一样品中淀粉的含量，g/100g;100%Ai—测定用样品中还原糖的含量,mg;A2一试剂空白中还原糖的含量,mg;0.9-还原糖（以葡萄糖计）换算成淀粉的换算系数;m一样品质量，g;Vi—测定用样品处理液的体积，mL。六、说明淀粉酶水解具有选择性，只水解淀粉不水解其他多糖，水解后可通过过滤除去其他多糖，测定不受其他多糖的影响，测定结果准确，但操作费时。淀粉酶使用前应检查其活力，以确定水解时淀粉酶的添加量。实验三乳化剂—蔗糖脂肪酸酯中游离蔗糖的测定一、实验目的学会采用微量滴定法测定蔗糖脂肪酸酯中游离蔗糖的含量。二、实验原理样品中的游离蔗糖经萃取后水解成还原糖，在加热条件下，取一定量样品试液加到碱性酒石酸铜溶液中，以次甲基蓝为指示剂，根据加入样品前后葡萄糖标准溶液的滴定体积之差，计算还原糖量，并乘上一个系数换算成蔗糖含量。三、药品试剂1、正丁醇2、盐酸溶液（ 1+1）：水和最浓的盐酸 （36%）的体积比一比一混合。3、200g/L氢氧化钠溶液：称取200gNaOH,溶于水并稀释至1000mL。4、50g/L氯化钠溶液：称取50gNaCl,溶于水并稀释至1000mL。5、1g/L甲基红指示液：称取 0.1g甲基红溶于100mL乙醇溶液中。6、碱性酒石酸铜甲液称取15g硫酸铜（CuSO4?5H2。）及0.05g次甲基蓝，溶于水并稀释至1000mL。7、碱性酒石酸铜乙液称取50g酒石酸钾钠及 75g氢氧化钠溶于水中，加4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000mL,贮存于带橡胶塞的玻璃瓶内。8、1mg/mL葡萄糖标准溶液精确称取1.000g经过98〜100c干燥至恒重的纯葡萄糖，用水溶解后加 5mL盐酸，用水稀释至 1000mL。9、乳化剂 —蔗糖脂肪酸酯四、主要仪器恒温水浴锅、分析天平（感量 0.0001g）、锥形瓶 （250mL）、分液漏斗 （125mL）、容量瓶（100mL）、玻璃珠若干、碱式滴定管（25mL）、酒精灯、100mL量筒、（5mL、10mL）移液管、漏斗五、操作步骤1、样品处理称取2g样品，精确至0.0002g,置入锥形瓶中，力口40mL正丁醇，水浴加热溶解后转入125mL分液漏斗中，然后每次用20mL60〜70c的氯化钠溶液（50g/L）萃取2次，分离时界面如有悬浮物可离心分离。合并萃取液于 100mL容量瓶中，加2mL盐酸溶液（1+1）,于68〜70c水浴加热30min,冷却后加2滴甲基红指示液，用氢氧化钠溶液 （200g/L）中和至黄色，再加水至刻度，摇匀过滤，待测。2、标定碱性酒石酸铜溶液吸取碱性酒石酸铜甲、乙溶液各5mL于250mL锥形瓶中，加10mL水及2

粒玻璃珠，从滴定管滴加9mL葡萄糖标准溶液，控制在2min内加热至沸，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积，同时平行操作三次，取其平均值，计算每10mL（甲、乙液各5mL）碱性洒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量（mg）。3、样品溶液预测吸取碱性洒石酸铜甲、乙溶液各5mL于250mL锥形瓶中，加入5mL试样溶液，加10mL水及2粒玻璃珠，控制在2min内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度从滴定管滴加葡萄糖标准溶液，并保持沸腾状态，待溶液变浅时，以每两秒一滴的速度滴定，直至蓝色刚好褪去为终点。记录消耗葡萄糖标准溶液的体积。4、样品溶液测定依上法吸取酒石酸铜甲、乙溶液和试样溶液各5mL于250mL锥形瓶中，加10mL水及2粒玻璃珠，从滴定管滴加比预测体积少1mL的葡萄糖标准溶液，在2min内加热至沸，趁沸继续以两秒一滴的速度滴至终点，平行操作三次，取平均消耗体积，根据葡萄糖标准溶液的浓度，计算加入样品后消耗葡萄糖的质量（mg）。六、结果计算蔗糖脂肪酸酯中游离蔗糖的含量按下式计算：m〔m〔m2m5/10010000.95100%式中:/r/