蛋白质总结课件

蛋白质总结氨基酸蛋白质的共价结构和三维结构蛋白质结构与功能的关系蛋白质的分离、纯化和表征重要实验生工081班蛋白质总结氨基酸生工081班蛋白质的结构与相关功能1.肌红蛋白2.红蛋白3.免疫球蛋白4.辅基血红素（可与氧、一氧化碳、氢离子结合）5.蛋白质结构与功能的关系：取决于以一级结构为基础的蛋白质的空间构象

a.一级结构与功能的关系一级结构的变异与分子病（镰刀状细胞贫血病）一级结构与生物进化（细胞色素）b.空间结构与生物功能——蛋白质的变构现象（血红蛋白）6.血红蛋白与肌红蛋白的比较蛋白质的结构与相关功能1.肌红蛋白胶原蛋白（胶原）胶原蛋白类型：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、·····Ⅶ。属结构糖蛋白。每股肽链为左手螺旋，多由Gly-Pro-Y序列重复而成，含三种不常见的氨基酸（5－羟赖氨酸、4－羟脯氨酸和3－羟脯氨酸）肌球蛋白（掌握结构）由两条相同的重链和两对不同的轻链组成。头部有ATP结合位点（具ATP酶活性）和肌动蛋白结合位点。装配成骨骼肌的粗丝。肌动蛋白：球状单体，组成骨骼肌的细丝胶原蛋白（胶原）胶原蛋白类型：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、·····Ⅶ。属结三维结构辅基血红素（与氧结合部位）氨基酸残基数与氧结合构象改变与氧亲和力与氧结合曲线肌红蛋白一条多肽链1个153Fe(II)原子以第六个配价键与氧进行可逆氧合作用铁卟啉位移呈圆顶状平面状大血红蛋白4个多肽亚基4个α2(141)β2(146)Fe(II)原子以第六个配价键与氧进行可逆氧合作用去氧血红蛋白（T态）和氧合血红蛋白（R态）小K三维结构辅基血红素（与氧结合部位）氨基酸残基数与氧结合构象改蛋白质的性质和分离、纯化

1、蛋白质的酸碱性质

等电点与它所含的酸碱氨基酸数目比例有关等离子点蛋白质的一个特征常数2蛋白质的胶体性质维持蛋白质胶体性质稳定的因素（3点）3蛋白质沉淀的方法等电点沉淀法（ 可逆、不变性)

盐析法 （可逆、不变性） 有机溶剂沉淀法（可逆或不可逆） 重金属盐沉淀法 （变性） 生物碱试剂 （变性） 加热沉淀法（变性）强酸碱沉淀（不可逆）4蛋白质的变性与复性（温和条件、变性因素、常用变性剂）蛋白质的性质和分离、纯化1、蛋白质的酸碱性质 5蛋白质的颜色反应5蛋白质的颜色反应6、蛋白质相对分子质量的测定

a.根据化学组成测定最低相对分子质量b.渗透压法测定相对分子质量c.沉降分析法（超速离心法）d.※凝胶过滤法测定相对分子质量（分子筛层析）此法比较简单，不要求复杂的仪器，就能精确地测出Mre.※SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子质量6、蛋白质相对分子质量的测定a.根据化学组成测定最低相对根据分子大小不同的方法 透析和超过滤利用溶解度差别的纯化方法（实践最常用的方法a盐析b有机溶剂分级分离）根据电荷不同的纯化方法（PAGE、醋酸纤维素薄膜电泳、离子交换层析）利用选择性吸附的纯化方法利用对配体的特异生物学亲和层析:一步处理即亲和力的纯化方法可分离所需蛋白质，纯度很高

7蛋分离纯化白质的根据分子大小不同的方法 透析和超过滤7蛋分离纯化白质的（一）蛋白质的含量测定①凯氏定氮法②双缩尿法③

Folin-酚试剂法④紫外吸收法⑤考马斯亮蓝结合法灵敏度高，重复好⑥胶体金测定法 灵敏度最高（二）蛋白质的纯度测定电泳、沉降、HPLC和溶解度分析等。8蛋白质的含量测定和纯度鉴定（一）蛋白质的含量测定8蛋白质的含量测定和纯度鉴定蛋白质实验部分氨基酸纸层析考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量蛋白质实验部分氨基酸纸层析氨基酸纸层析重点：氨基酸纸上层析法的操作技术难点：纸层析法的基本原理溶剂前层析点原点溶剂前沿亮苯丙缬脯赖氨基酸纸层析重点：氨基酸纸上层析法的操作技术溶剂前层相对迁移率Rf=X/Y

相对迁移率Rf=X/Y考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度重点：考马斯亮蓝法定量测定蛋白质含量的原理和方法考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度重点：考马斯亮蓝法定量实验原理考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰改变为595nm，考马斯亮蓝G250－蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏度。在一定范围内，考马斯亮蓝G250－蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关，因此被广泛地应用。CoomassiebrilliantblueG-250在一定的实验条件下，未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应，并于595nm下比色，可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知样品的蛋白质浓度。实验原理考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量重点掌握：实验原理、整个实验过程的设计与操作，如标准蛋白质的选择、分离胶与浓缩胶浓度的确定与制备、灌胶、样品的处理、上样量及方法的选择。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量重点掌握：电泳过程中有3种物理效应：样品的浓度效应；对被分离分子的筛选效应；电荷效应。迁移率大小：分子大小分子形状净电荷（荷质比）电泳过程中有3种物理效应：测定方法用几种标准蛋白质相对分子质量的对数值对它们的迁移率作图。测出待测样品的迁移率。从标准曲线上查出样品的相对分子质量。测定方法测定方法用几种标准蛋白质相对分子质量的对数值对它们的迁移率作谢谢谢谢蛋白质总结课件蛋白质总结课件爱是什么？

一个精灵坐在碧绿的枝叶间沉思。

风儿若有若无。

一只鸟儿飞过来，停在枝上，望着远处将要成熟的稻田。

精灵取出一束黄澄澄的稻谷问道：“你爱这稻谷吗？”

“爱。”

“为什么？”

“它驱赶我的饥饿。”

鸟儿啄完稻谷，轻轻梳理着光润的羽毛。

“现在你爱这稻谷吗？”精灵又取出一束黄澄澄的稻谷。

鸟儿抬头望着远处的一湾泉水回答：“现在我爱那一湾泉水，我有点渴了。”

精灵摘下一片树叶，里面盛了一汪泉水。

鸟儿喝完泉水，准备振翅飞去。

“请再回答我一个问题，”精灵伸出指尖，鸟儿停在上面。

“你要去做什么更重要的事吗？我这里又稻谷也有泉水。”

“我要去那片开着风信子的山谷，去看那朵风信子。”

“为什么？它能驱赶你的饥饿？”

“不能。”

“它能滋润你的干渴？”

“不能。”爱是什么？

一个精灵坐在碧绿的枝叶间沉思。

风儿若有若无。

一只鸟儿飞过来，停在枝上，望着远处将要成熟的稻田。

精灵取出一束黄澄澄的稻谷问道：“你爱这稻谷吗？”

“爱。”

“为什么？”

“它驱赶我的饥饿。”

鸟儿啄完稻谷，轻轻梳理着光润的羽毛。

“现在你爱这稻谷吗？”精灵又取出一束黄澄澄的稻谷。

鸟儿抬头望着远处的一湾泉水回答：“现在我爱那一湾泉水，我有点渴了。”

精灵摘下一片树叶，里面盛了一汪泉水。

鸟儿喝完泉水，准备振翅飞去。

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“我要去那片开着风信子的山谷，去看那朵风信子。”

“为什么？它能驱赶你的饥饿？”

“不能。”

“它能滋润你的干渴？”

“不能。”爱是什么？

一个精灵坐在碧绿的枝叶间沉思。

风儿若有若无。

爱是什么？

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风儿若有若无。

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“爱。”

“为什么？”

“它驱赶我的饥饿。”

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“现在你爱这稻谷吗？”精灵又取出一束黄澄澄的稻谷。

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“你要去做什么更重要的事吗？我这里又稻谷也有泉水。”

“我要去那片开着风信子的山谷，去看那朵风信子。”

“为什么？它能驱赶你的饥饿？”

“不能。”

“它能滋润你的干渴？”

“不能。”爱是什么？

一个精灵坐在碧绿的枝叶间沉思。

风儿若有若无。

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精灵取出一束黄澄澄的稻谷问道：“你爱这稻谷吗？”

“爱。”

“为什么？”

“它驱赶我的饥饿。”

鸟儿啄完稻谷，轻轻梳理着光润的羽毛。

“现在你爱这稻谷吗？”精灵又取出一束黄澄澄的稻谷。

鸟儿抬头望着远处的一湾泉水回答：“现在我爱那一湾泉水，我有点渴了。”

精灵摘下一片树叶，里面盛了一汪泉水。

鸟儿喝完泉水，准备振翅飞去。

“请再回答我一个问题，”精灵伸出指尖，鸟儿停在上面。

“你要去做什么更重要的事吗？我这里又稻谷也有泉水。”

“我要去那片开着风信子的山谷，去看那朵风信子。”

“为什么？它能驱赶你的饥饿？”

“不能。”

“它能滋润你的干渴？”

“不能。”爱是什么？

一个精灵坐在碧绿的枝叶间沉思。

风儿若有若无。

其实，世上最温暖的语言，“不是我爱你，而是在一起。”

所以懂得才是最美的相遇！只有彼此以诚相待，彼此尊重，相互包容，相互懂得，才能走的更远。相遇是缘，相守是爱。缘是多么的妙不可言，而懂得又是多么的难能可贵。否则就会错过一时，错过一世！择一人深爱，陪一人到老。一路相扶相持，一路心手相牵，一路笑对风雨。在平凡的世界，不求爱的轰轰烈烈；不求誓言多么美丽；唯愿简单的相处，真心地付出，平淡地相守，才不负最美的人生；不负善良的自己。人海茫茫，不求人人都能刻骨铭心，但求对人对己问心无愧，无怨无悔足矣。大千世界，与万千人中遇见，只是相识的开始，只有彼此真心付出，以心交心，以情换情，相知相惜，才能相伴美好的一生，一路同行。然而，生活不仅是诗和远方，更要面对现实。如果曾经的拥有，不能天长地久，那么就要学会华丽地转身，学会忘记。忘记该忘记的人，忘记该忘记的事儿，忘记苦乐年华的悲喜交集。人有悲欢离合，月有阴晴圆缺。对于离开的人，不必折磨自己脆弱的生命，虚度了美好的朝夕；不必让心灵痛苦不堪，弄丢了快乐的自己。擦汗眼泪，告诉自己，日子还得继续，谁都不是谁的唯一，相信最美的风景一直在路上。人生，就是一场修行。你路过我，我忘记你；你有情，他无意。谁都希望在正确的时间遇见对的人，然而事与愿违时，你越渴望的东西，也许越是无情无义地弃你而去。所以美好的愿望，就会像肥皂泡一样破灭，只能在错误的时间遇到错的人。岁月匆匆像一阵风，有多少故事留下感动。愿曾经的相遇，无论是锦上添花，还是追悔莫及；无论是青涩年华的懵懂赏识，还是成长岁月无法躲避的经历……愿曾经的过往，依然如花芬芳四溢，永远无悔岁月赐予的美好相遇。其实，人生之路的每一段相遇，都是一笔财富，尤其亲情、友情和爱情。在漫长的旅途上，他们都会丰富你的生命，使你的生命更充实，更真实；丰盈你的内心，使你的内心更慈悲，更善良。所以生活的美好，缘于一颗善良的心，愿我们都能善待自己和他人。一路走来，愿相亲相爱的人，相濡以沫，同甘共苦，百年好合。愿有情有意的人，不离不弃，相惜相守，共度人生的每一个朝夕……直到老得哪也去不了，依然是彼此手心里的宝，感恩一路有你！其实，世上最温暖的语言，“不是我爱你，而是在一起。”

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a.一级结构与功能的关系一级结构的变异与分子病（镰刀状细胞贫血病）一级结构与生物进化（细胞色素）b.空间结构与生物功能——蛋白质的变构现象（血红蛋白）6.血红蛋白与肌红蛋白的比较蛋白质的结构与相关功能1.肌红蛋白胶原蛋白（胶原）胶原蛋白类型：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、·····Ⅶ。属结构糖蛋白。每股肽链为左手螺旋，多由Gly-Pro-Y序列重复而成，含三种不常见的氨基酸（5－羟赖氨酸、4－羟脯氨酸和3－羟脯氨酸）肌球蛋白（掌握结构）由两条相同的重链和两对不同的轻链组成。头部有ATP结合位点（具ATP酶活性）和肌动蛋白结合位点。装配成骨骼肌的粗丝。肌动蛋白：球状单体，组成骨骼肌的细丝胶原蛋白（胶原）胶原蛋白类型：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、·····Ⅶ。属结三维结构辅基血红素（与氧结合部位）氨基酸残基数与氧结合构象改变与氧亲和力与氧结合曲线肌红蛋白一条多肽链1个153Fe(II)原子以第六个配价键与氧进行可逆氧合作用铁卟啉位移呈圆顶状平面状大血红蛋白4个多肽亚基4个α2(141)β2(146)Fe(II)原子以第六个配价键与氧进行可逆氧合作用去氧血红蛋白（T态）和氧合血红蛋白（R态）小K三维结构辅基血红素（与氧结合部位）氨基酸残基数与氧结合构象改蛋白质的性质和分离、纯化

1、蛋白质的酸碱性质

等电点与它所含的酸碱氨基酸数目比例有关等离子点蛋白质的一个特征常数2蛋白质的胶体性质维持蛋白质胶体性质稳定的因素（3点）3蛋白质沉淀的方法等电点沉淀法（ 可逆、不变性)

盐析法 （可逆、不变性） 有机溶剂沉淀法（可逆或不可逆） 重金属盐沉淀法 （变性） 生物碱试剂 （变性） 加热沉淀法（变性）强酸碱沉淀（不可逆）4蛋白质的变性与复性（温和条件、变性因素、常用变性剂）蛋白质的性质和分离、纯化1、蛋白质的酸碱性质 5蛋白质的颜色反应5蛋白质的颜色反应6、蛋白质相对分子质量的测定

a.根据化学组成测定最低相对分子质量b.渗透压法测定相对分子质量c.沉降分析法（超速离心法）d.※凝胶过滤法测定相对分子质量（分子筛层析）此法比较简单，不要求复杂的仪器，就能精确地测出Mre.※SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子质量6、蛋白质相对分子质量的测定a.根据化学组成测定最低相对根据分子大小不同的方法 透析和超过滤利用溶解度差别的纯化方法（实践最常用的方法a盐析b有机溶剂分级分离）根据电荷不同的纯化方法（PAGE、醋酸纤维素薄膜电泳、离子交换层析）利用选择性吸附的纯化方法利用对配体的特异生物学亲和层析:一步处理即亲和力的纯化方法可分离所需蛋白质，纯度很高

7蛋分离纯化白质的根据分子大小不同的方法 透析和超过滤7蛋分离纯化白质的（一）蛋白质的含量测定①凯氏定氮法②双缩尿法③

Folin-酚试剂法④紫外吸收法⑤考马斯亮蓝结合法灵敏度高，重复好⑥胶体金测定法 灵敏度最高（二）蛋白质的纯度测定电泳、沉降、HPLC和溶解度分析等。8蛋白质的含量测定和纯度鉴定（一）蛋白质的含量测定8蛋白质的含量测定和纯度鉴定蛋白质实验部分氨基酸纸层析考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量蛋白质实验部分氨基酸纸层析氨基酸纸层析重点：氨基酸纸上层析法的操作技术难点：纸层析法的基本原理溶剂前层析点原点溶剂前沿亮苯丙缬脯赖氨基酸纸层析重点：氨基酸纸上层析法的操作技术溶剂前层相对迁移率Rf=X/Y

相对迁移率Rf=X/Y考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度重点：考马斯亮蓝法定量测定蛋白质含量的原理和方法考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度重点：考马斯亮蓝法定量实验原理考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰改变为595nm，考马斯亮蓝G250－蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏度。在一定范围内，考马斯亮蓝G250－蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关，因此被广泛地应用。CoomassiebrilliantblueG-250在一定的实验条件下，未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应，并于595nm下比色，可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知样品的蛋白质浓度。实验原理考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量重点掌握：实验原理、整个实验过程的设计与操作，如标准蛋白质的选择、分离胶与浓缩胶浓度的确定与制备、灌胶、样品的处理、上样量及方法的选择。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量重点掌握：电泳过程中有3种物理效应：样品的浓度效应；对被分离分子的筛选效应；电荷效应。迁移率大小：分子大小分子形状净电荷（荷质比）电泳过程中有3种物理效应：测定方法用几种标准蛋白质相对分子质量的对数值对它们的迁移率作图。测出待测样品的迁移率。从标准曲线上查出样品的相对分子质量。测定方法测定方法用几种标准蛋白质相对分子质量的对数值对它们的迁移率作谢谢谢谢蛋白质总结课件蛋白质总结课件爱是什么？

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风儿若有若无。

一只鸟儿飞过来，停在枝上，望着远处将要成熟的稻田。

精灵取出一束黄澄澄的稻谷问道：“你爱这稻谷吗？”

“爱。”

“为什么？”

“它驱赶我的饥饿。”

鸟儿啄完稻谷，轻轻梳理着光润的羽毛。

“现在你爱这稻谷吗？”精灵又取出一束黄澄澄的稻谷。

鸟儿抬头望着远处的一湾泉水回答：“现在我爱那一湾泉水，我有点渴了。”

精灵摘下一片树叶，里面盛了一汪泉水。

鸟儿喝完泉水，准备振翅飞去。

“请再回答我一个问题，”精灵伸出指尖，鸟儿停在上面。

“你要去做什么更重要的事吗？我这里又稻谷也有泉水。”

“我要去那片开着风信子的山谷，去看那朵风信子。”

“为什么？它能驱赶你的饥饿？”

“不能。”

“它能滋润你的干渴？”

“不能。”爱是什么？

一个精灵坐在碧绿的枝叶间沉思。

风儿若有若无。

一只鸟儿飞过来，停在枝上，望着远处将要成熟的稻田。

精灵取出一束黄澄澄的稻谷问道：“你爱这稻谷吗？”

“爱。”

“为什么？”

“它驱赶我的饥饿。”

鸟儿啄完稻谷，轻轻梳理着光润的羽毛。

“现在你爱这稻谷吗？”精灵又取出一束黄澄澄的稻谷。

鸟儿抬头望着远处的一湾泉水回答：“现在我爱那一湾泉水，我有点渴了。”

精灵摘下一片树叶，里面盛了一汪泉水。

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“请再回答我一个问题，”精灵伸出指尖，鸟儿停在上面。

“你要去做什么更重要的事吗？我这里又稻谷也有泉水。”

“我要去那片开着风信子的山谷，去看那朵风信子。”

“为什么？它能驱赶你的饥饿？”

“不能。”

“它能滋润你的干渴？”

“不能。”爱是什么？

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“爱。”

“为什么？”

“它驱赶我的饥饿。”

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“为什么？它能驱赶你的饥饿？”