生物安全知识课件

1、微生物新手培训教材3生物安全知识作者：麦兜伴你行寄语：愿你此生安好，余生不再打扰。微生物新手培训教材3作者：麦兜伴你行一、生物安全生物安全一般是指由现代生物技术开发和应用对生态环境和人体健康造成的潜在威胁，及对其所采取的一系列有效预防和控制措施。基于生物技术发展有可能带来的不利影响，人们提出了生物安全的概念。而在生物实验室中是指采取的一系列有效预防和控制措施，保护实验室人员安全与减少环境污染。 生物危险标识生物安全标识一、生物安全生物安全一般是指由现代生物技术开发和应用对生态环二、生物安全实验室的分级一级对人体、动植物或环境危害较低，不具有对健康成人、动植物致病的致病因子。二级对人体、动植物或

2、环境具有中等危害或具有潜在危险的致病因子，对健康成人、动物和环境不会造成严重危害。有有效的预防和治疗措施。三级对人体、动植物或环境具有高度危险性，主要通过气溶胶使人传染上严重的甚至是致命疾病，或对动植物和环境具有高度危害的致病因子。通常有预防治疗措施。四级对人体、动植物或环境具有高度危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明，或未知的、危险的致病因子。没有预防治疗措施。二、生物安全实验室的分级一级对人体、动植物或环境危害较低，不问：那么我们的微生物实验室应该属于那个级别呢？答：一般做食品检测的微生物实验室属于二级生物安全实验室。二级生物安全实验室技术指标名词洁净度级别换气次数（次/h）与由室内向

3、外方向上相邻相通房间的压差（Pa）温度相对湿度%噪声dB(A)最低照度lx二级89可回风50%810-5-101827306560300问：那么我们的微生物实验室应该属于那个级别呢？二级生物安全实三、危害程度分级和风险评估（过去需要对实验室进行风险评估，最近几年废除了这个要求）目的：根据生物因子对个体和群体危害程度，确定生物因子的危害等级，充分考虑到生物因子固有的致病特征和其他外部因素，对实验室所操作的生物因子进行风险评估，以便实验室开展生物风险管理，使生物安全管理体系正常运行，充分保障人员和环境的安全。微生物实验室的危险评估也包含物理、化学、电气风险等因素的危险评估。（由于现在不需要经过风险

4、评估，我就粗略简述。）三、危害程度分级和风险评估（过去需要对实验室进行风险评估，序号病原菌名称 危害程度分类实验活动所需生物安全实验室级别 运输包装分类e 备 注学名中文名大量活菌操作a动物感染实验b样本检测c非感染性材料的实验dA/BUN 编号Rhodococcus equi马红球菌第三类BSL-2ABSL-2BSL-2BSL-1BUN 3373 Salmonella paratyphi A,B,C甲、乙、丙型副伤寒沙门菌第三类BSL-2ABSL-2BSL-2BSL-1BUN 3373 Salmonella typhi伤寒沙门菌第三类BSL-2ABSL-2BSL-2BSL-1BUN 3373

5、 Salmonella typhimurium鼠伤寒沙门菌第三类BSL-2ABSL-2BSL-2BSL-1BUN 3373 5Shigella spp志贺菌属第三类BSL-2ABSL-2BSL-2BSL-1BUN 3373 6Staphylococcus aureus金黄色葡萄球菌第三类BSL-2ABSL-2BSL-2BSL-1BUN 3373 7Staphylococcus epidermidis表皮葡萄球菌第三类BSL-2ABSL-2BSL-2BSL-1BUN 3373 8Pathogenic Escherichia coli,致病性大肠埃希菌第三类BSL-2ABSL-2BSL-2BSL-

6、1BUN 2814 9Streptococcus spp链球菌属第三类BSL-2ABSL-2BSL-2BSL-1BUN 3373常用菌株的危害程度分类（具体可以在人间传染的病原微生物名录中找）序号病原菌名称 危害程度分类实验活动所需生物安全实验室级别 问：如果我们没有使用菌株是否能不建设二级生物安全实验室，同也不需要做那么多生物安全方面的培训？答：只要有需要检测到这些项目都必须要按照二级生物安全实验室，（只检测菌落、大肠、霉菌的也归入其中）问：霉菌培养箱为什么要单独一个房间安置？答：这个是为了防止霉菌的孢子扩散污染到其他培养箱，安置霉菌培养箱的房间必须要有紫外灯，定期对环境继续消毒与保持卫生。

7、问：霉菌的孢子比较难消灭，有什么消毒方法比较好用？答：定期使用消毒剂（或者孢子消毒剂）对培养箱和房间进行消毒。同时定期清理有数值的平板（鉴于有些实验室检测数量比较少，会累积一定量再处理，个人不太建议这样。）问：如果我们没有使用菌株是否能不建设二级生物安全实验室，同也四、菌种管理在做实验的时候实验员常常会使用到标准菌株，那么我们下面去了解一下标准菌株是如何管理的。四、菌种管理在做实验的时候实验员常常会使用到标准菌株，那么我标准菌种的申购购买的原始标准菌种来源于美国典型菌种保藏中心（ATCC），英国典型菌种保藏中心（NCTC）,中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC），中国医学微生物菌种保藏管理

8、中心（CMCC）, 中国食品发酵工业研究所（IFFI）。标准菌种的申购购买的原始标准菌种来源于美国典型菌种保藏中心（标准菌种的验收1、应根据采购申请单核对收到原始标准菌种的名称、数量是否一致，安瓿瓶包装状况是否良好，标准菌种是否处于有效期内，标准菌种证书是否齐全。2、实验室不得接收包装有破损、过期的标准菌种。若无菌种证书，应要求采购向供应商索取，不能提供菌种证书和使用说明书的菌种，不得接收和使用。3、应对验收合格的原始标准菌种进行内部编号。4、应对原始标准菌种进行标识，标识内容包括菌种名称、菌种代号、代次、入库日期、贮存条件、有效期，将标签粘贴在菌种安瓿及菌种管上。新购置的原始标准菌种，其代次

9、可根据标准菌种证书提供的信息确认。5、应做好标准菌种的入库登记，包括名称、菌种号、内部编号、数量、入库日期、有效期、登记人等。标准菌种的验收标准菌种的存储、保管及领用1、实验室应指定一名微生物检测人员作为标准菌种的授权的标准菌种管理人员，与药品管理员一起对标准菌种实施双人双锁的管理，标准菌种的入库、领用及使用必须由两位管理员签字确认。2、标准菌种管理人员应根据原始标准菌种证书规定的条件，将原始标准菌种进行存储。经复苏、复壮、传代的标准储备菌种的存储应按照表1的规定执行。3、检测人员领用菌种时应填好领用记录，包括名称、内部编号、代次、领用人。标准菌种的存储、保管及领用1、实验室应指定一名微生物检

10、测人员标准菌种的复苏、传代及使用原始标准菌种的复苏应按照菌种供应商提供的说明进行。菌种的复苏、传代及使用应在生物安全柜（A2型/B2型）中进行。菌种授权管理员应对制备的标准储备菌种进行标识，标识内容包括名称、菌种号、内部编号、代次、入库日期、有效期，并将标签贴在保藏管上。菌种的传代应在有效期内进行，传代后的菌种应验证菌落形态和革兰氏染色结果，经确认后的菌种才可以进行储备。无论原始标准菌种的代次（0或其他）是多少，菌种传代的次数不超过5代。标准储备菌种的制备、工作菌种的使用细则参照实验室菌种制备及使用细则。标准菌种的复苏、传代及使用原始标准菌种的复苏应按照菌种供应商菌种保藏培养基及保藏条件保藏培

11、养基适合保藏的菌种存储条件菌种保藏培养基斜面葡萄球菌属、沙门氏菌属、克雷伯氏菌属、耶尔森氏菌属、假单胞菌属、芽孢杆菌、肠杆菌属、埃希氏菌属、志贺氏菌属、李斯特氏菌属、阪崎杆菌属、弯曲菌、梭菌属石蜡封存46可保存6个月乳杆菌属*46可保存3个月弧菌属石蜡封存25可保存6个月沙氏琼脂斜面霉菌*、酵母菌*46可保存2个月备注：标注*的菌种不适宜用液体石蜡封存；菌种保藏培养基及保藏条件保藏培养基适合保藏的菌种存储条件菌种菌种的废弃过期、废弃、失效菌种以及未用完的工作菌种的处理：应在121 高压蒸汽灭菌锅内灭菌30分钟。小技巧：不知道会不会有人担心在使用过程中会污染到菌株，这里有一个小技巧，每次传代都准

12、备两根斜面，一跟用于做实验，一根用于传代。这个可以避免实验过程中带来污染。也可以每次传代准备多根，每次使用都废弃掉。菌种的废弃过期、废弃、失效菌种以及未用完的工作菌种的处理：应五、实验室生物安全管理制度（一）人员准入条件 （二）生物安全日常管理 （三）常见实验室废弃品处理五、实验室生物安全管理制度（一）人员准入条件（一）人员准入条件1、实验室人员、辅助人员和外来人员必须具备相应的专业技能、受过相关的实验室生物安全培训、了解实验室潜在的生物危害和特殊要求，经负责人审批后方可进入相应的实验室工作。（实验室人员需要负责人授权才能进入实验室进行工作）2、未成年人、孕妇和有免疫缺陷的人员不得进入实验室，

13、处于易受感染状态或感染后果严重的额人员也不得进入实验室。（重感冒的人员不建议进入）3、实验室人员必须在身体状况良好、穿戴好防护服（白大衣）的情况下，方能进入实验室的污染区域工作。但当身体出现较大的开放性损伤、处于较重的疾病感染状态或呈重度疲劳状态时不得进入。（受伤的情况不太建议进入微生物实验室）4、外来参观人员需经科室负责人同意并在相关人员陪同下方可进入实验室。（进入实验室的人员还需登记入册）（一）人员准入条件1、实验室人员、辅助人员和外来人员必须具备（二）生物安全日常管理生物安全行为规范1 进入实验室前要摘除首饰，修剪指甲，以免刺破手套。长发应束在脑后，禁止在实验室内穿露脚趾的鞋。不得佩戴有

14、可能被卷入机器或可随人传染性物质的饰物。2在实验室里工作时，要始终穿着实验服，实验室外禁止穿防护服（白大衣）。大白衣应定期清洗、更换，清洗时应使用具有杀菌消毒的洗液或其他相应方法。3、操作感染性物质、腐蚀性或毒性物质时须在通风橱中进行，并佩戴相关的安全防护用品，如安全镜、面罩或护目镜。皮肤受损时应以防水敷料覆盖。（二）生物安全日常管理生物安全行为规范4、当有必要保护眼睛和面部以防实验对象喷溅、或紫外线辐射时，必须要配戴护目镜，面罩（带护目镜的面罩）或其它防护用品。5、实验室工作区不允许吃、喝、化妆和操作隐形眼镜，禁止在实验室工作区内的任何地方贮存人用食品及饮料。6、实验室防护服不应和日常服饰放

15、在同一柜子。个人物品、服装和化妆品不应放在有规定禁放的和可能发生污染的区域。7、不得涉及呼吸道传播疾病样品室，要佩戴符合要求的防护口罩。4、当有必要保护眼睛和面部以防实验对象喷溅、或紫外线辐射时，操作准则1、所有样本、培养物均可能有传染性，操作时均应带手套。在认为手套已被污染时应脱掉手套，马上洗净双手，再换一双新手套。2、当实验过程可能涉及到直接或意外接触到血液、有传染性的材料或被感染的动物时，必须要戴上合适的手套，脱手套后必须洗手。在实际或可能接触了血液、体液或其他污染材料后，即使戴有手套也应立即洗手。3、不得用戴手套的手触摸自己的眼、鼻子或其他暴露的黏膜或皮肤。不得带手套离开实验室或在实验

16、室来回走动。4、严格禁止用嘴操作实验器材，包括吸液、吹酒精灯等。实验材料禁止放入嘴里。禁止舔标签。5、尽量用塑料制品代替玻璃制品，不使用破裂或有缺口的玻璃器具。破损的玻璃不能直接用手直接操作，必须用机械方法清除，如刷子、夹子、镊子等。破裂的玻璃器具和比例碎片应丢弃在有专门标记的、单独的，不易刺破的容器里。操作准则6、所有的实验步骤都应尽可能使气溶胶或气雾的形成控制在最小程度。任何使形成气溶胶的危险性上升的操作都必须在生物安全柜里进行。有害气溶胶不得直接排放。7、应尽可能减少使用利器和尽量使用替代品。包括针头、玻璃、一次性手术刀在内的利器，应在使用后立即放在耐扎容器中。尖利物容器应在内容物达到三

17、分之二前置换。8、所有溅出事件、意外事故和明显或潜在的暴露于感染性材料，都必须向实验室负责人报告。此类事故的书面材料应存档。9、所有弃置的实验室生物样本、培养物和被污染的废弃物应被假定有传染性，在从实验室中取走之前，应以安全方式处理和处置，使其达到生物学安全。10、实验室应保持整洁、干净，当潜在的危险物溅出或一天的工作结束后，所有操作台面、离心机、加样枪、试管架必须擦拭、消毒。11、每日工作完毕，最后一个离开实验室的人员需关好水、电、门、窗。6、所有的实验步骤都应尽可能使气溶胶或气雾的形成控制在最小程(三)常见实验室废弃品处理 实验室废弃品按物理类型而言可分为固体废弃品、液体废弃品及气体废弃品

18、，就危害类型而验分为化学毒性废品和病原性废品，由于废弃物品具有潜在的致病性、伤害性，如不妥善处理会造成很大的人身危害、环境污染和社会危害。根据国家危险废物品名录、医疗废物管理条例、卫生部和国家环境保护总局制定的医疗废物分类目录有关规定的要求，对实验室废弃物进行分类，主要包括感染性废弃物、病理性废弃物、损伤性废弃物、化学性和放射性废弃物等。(三)常见实验室废弃品处理 实验室废弃品按物常见实验室废弃品处理分类特征常见废弃物名称处理程序感染性废弃物携带病原微生物具有引发感染性疾病传播危险的废弃物包括被感染性实验材料等污染的物品与器材，如手套、口罩与白大衣、试管、平皿、吸管等实验器材以及废弃的感染性实

19、验标本、培养液、培养基等。放入盛有适宜消毒液的不易碎裂的容器中浸泡。注意消毒剂的种类、浓度及浸泡时间，浸泡后放入合适的容器内进行高压灭菌或焚烧处理损伤性废弃物能刺伤或割伤人体的锐器等废弃物包括医用枕头、缝合针、手术刀及破碎玻璃等高压灭菌或焚烧处理，盛放锐器的一次性容器不易刺破，不宜将容器装得过满（小于四分之三），如感染性废弃物进行高压灭菌及焚烧处理化学性、放射性废弃物具毒性、腐蚀性、易燃易爆的化学性废弃物及放射性废弃物包括强酸、强碱等有毒有害的化学性废弃物一级放射性废弃物等。强酸强碱等化学性物品须经中和消除腐蚀行后方可废弃，其他物品经稀释对环境与人体无毒后可废弃。含有毒、有害化学物品的实验材料在使用后应置于带明显危险标志的容器