盐霉素高产菌的推理选育

1、盐霉素高产菌的推理选育【关键词】盐霉素；诱变剂；挑选剂；推理选育(1llegefPharaeutialSiene,ZhejiangUniversityfTehnlgy,Hangzhu310032;2ZhejiangShenghuaBikBilgy.,Ltd.,Huzhu313220)KEYRDSSalinyin;utagen;Sreeningreagent;Ratinalsreening1质料与要领1.2造就基歪面造就基(g/L)甘油18，酵母浸粉2.3，氯化钠1.9，硝酸钠1.1，琼脂22；pH天然。摇瓶种子造就基(g/L)蔗糖9.7，玉米浆25，磷酸二氢钾2.0，豆油3.4，轻质碳酸钙1.

2、1，酵母膏粉0.2；pH6.76.8。摇瓶发酵造就基(g/L)葡萄糖5.0，棉籽饼粉5.0，黄豆粉5.0，酒石酸铵5.0，轻质碳酸钙5.0，氯化钾2.0，磷酸二氢钾0.1，硫酸镁1.0，氯化钠0.1，豆油140；pH7.2。种子罐造就基(g/L)蔗糖15.0，棉籽饼粉8.0，黄豆粉7.0，酒石酸铵5.0，轻质碳酸钙5.0，氯化钾2.0，磷酸二氢钾0.1，硫酸镁1.0，氯化钠0.3，豆油210；pH7.2。发酵造就基(g/L)葡萄糖25.0，棉籽饼粉15.0，黄豆粉15.0，酒石酸铵5.0，轻质碳酸钙6.5，氯化钾2.0，磷酸二氢钾0.1，硫酸镁1.0，氯化钠0.3，豆油240；pH7.2。1.

3、3实行要领(1)紫外线(UV)诱变刮取适量白色链霉菌的孢子于生理盐水中，振荡、打散孢子，颠末滤制成单孢子悬液，取68l单孢子悬浮液放入灭菌的9造就皿内，紫外灯下边搅拌边照耀。紫外灯功率15，照耀时间别离为0、10、20、30和40s，照耀间隔为30。(3)挑选要领经紫外或ES诱变处置惩罚后的孢子悬液经稀释后涂布于含必然浓度丁酸的平板中举行分散，再挑取单菌落制作小歪面，摇瓶造就验证效价。(4)效价测定接纳化学法10和高效液相色谱法。在本试验范畴内，经数据阐发，高效液相色谱法(Y)与化学测定法(X)大抵量的干系为：Y=1.1074X-9.005(R2=0.9718)(5)发酵及阐发接纳两级发酵。种

4、子造就条件33，230r/in，造就28h摆布，30吨大罐放大三罐批，接种量10%，在33，230r/in发酵113116h。实行效果取3个重复的均匀值。发酵液阐发接纳高效液相色谱阐发11。2效果与讨论2.1盐霉素产生菌选育系谱2.2紫外线与ES对盐霉素菌株的诱变效应在接纳丁酸作为挑选剂举行推理选育前，起首观察通例诱变即紫外线ES对菌株的效应。试验效果表白，盐霉素菌株经紫外照耀时间20s后存活率在10%以下，照耀40s致死率为97.5%。ES单独处置惩罚盐霉素菌株18s致死率达98%。在同一剂量的环境下，ES对盐霉素产生菌的诱变产生正变率大大高于负变率，但随着ES剂量进步，盐霉素产生菌正变率也

5、呈落落趋势，故本实行中ES利用的剂量为1%。2.3丁酸作为盐霉素挑选剂的推理选育12(3)丁酸作为盐霉素挑选剂的推理选育要选育高产菌株，除诱变剂作用外，还与挑选剂有关。本文按照盐霉素的生物合成途径的特点，选用丁酸作为挑选剂举行试验。丁酸既是盐霉素分子布局构成单位，也是其生物合成途径中的小分子前体物质，同时又可作为盐霉素发酵的有用碳源，可进步盐霉素菌株发酵效价。丁酸作为启动子照旧盐霉素合成不成缺少的组分，试验效果表白，在含有丁酸作为挑选剂的平板上生长的菌株比在不含任何挑选剂的平板上生长的菌株，其发酵效价普及有较大进步，因此选用丁酸作为盐霉素高表2ES+丁酸挑选剂用量试验产菌株的挑选剂是公正的。2

6、.4发酵及其产物阐发3结论颠末实行，我们重要得出以下结论：(3)对高产菌株发酵产物阐发证实组分未产生变革，但产物的表达量有较大幅度的进步，菌株的生物代谢途径与动身菌株雷同。(4)本实行所用挑选剂丁酸为盐霉素生物合成的前体，其符合用量及适当添加时间有待进一步实行。【参考文献】1iyazakiY,Shibuya,SugaaraH,etal.Salinyin,aneplyethertypeantibitiJ.JAntibit,1974,27(11):814821.2iyazakiY,ShibataA,YahagiT,etal.ethdfprduingplyethertypeantibitisasel

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