尼莫地平抗急性铅染毒大鼠海马神经元损伤的形态学研究

1、尼莫地平抗急性铅染毒大鼠海马神经元损伤的形态学研究黄陈平，林林，宋明芬，方周溪【摘要】目的:相识尼莫地平对急性铅染毒大鼠海马神经元损伤的干预作用。要领:48只2月龄SD大鼠随机平分为4组，即染铅组40g/kgPbA、尼莫地平组(1g/kgNi)、铅-尼莫地平组(40g/kgPbA+1g/kgNi)和比较组等量生理盐水，逐日腹注1次，一连3d。用TUNEL法原位检测海马神经元凋亡环境，并用电镜不雅察海马神经元超微布局变革。效果:各组海马神经元凋亡指数由高到低依次为染铅组、铅-尼莫地平组、比较组和尼莫地平组，染铅能明显增高海马神经元凋亡指数(P0.01)，尼莫地平与铅存在交互作用(P0.01)，在

2、铅染毒的条件下，尼莫地平能显着低落神经元凋亡指数。电镜不雅察表现，染铅组海马神经元有核固缩征象，而铅-尼莫地平组神经元未见显着非常。结论:急性铅染毒能引起海马神经元损伤，促进细胞凋亡；尼莫地平大概具有抗急性铅染毒海马神经元损伤的作用。【关键词】铅；尼莫地平；海马神经元；急性中毒；大鼠Keyrds:lead；Nidipine；hippapalneurn；autepisning；rat铅是常见的环境污染物，是公认的儿童认知成效发育停滞的重要伤害因素之一。小剂量铅就能损害中枢神经体系，尤其在脑海马回，这种损害在神经发育的初期最为敏感1。如今铅对中枢神经体系损害的机制尚不清楚，有研究表现，小剂量Pb2

3、+就可促使体外造就的小脑颗粒细胞产生凋亡，而钙离子通道阻断剂能按捺其作用2。我们通过动物实行，不雅察急性铅染毒诱发神经细胞凋亡的环境及钙离子通道拮抗剂尼莫地平的干预作用，以探究铅对神经体系损害的机制及铅中毒的防治要领。1质料和要领1.1实行动物及分组康健2月龄SD大鼠48只上海斯莱克实行动物有限责任公司提供，干净级，允许证号：SXK沪2022-0003，牝牡各半，始重为170.78.0g，按性别、体重配伍，随机分为4组，每组12只，根据22析因方案摆设实行因素铅和尼莫地平，即染铅组、尼莫地平组、铅-尼莫地平组和比较组。染铅组大鼠按40g/kg腹腔注射醋酸铅配成1%醋酸铅溶液，尼莫地平组按1g/

4、kg腹腔注射尼莫地平0.02%尼莫地平注射液，德国拜耳公司，铅-尼莫地平组按每公斤体重腹腔注射醋酸铅40g和尼莫地平1g，比较组不予以醋酸铅或尼莫地平，但按单元体重予以1%醋酸铅等量的生理盐水腹腔注射。各组大鼠逐日腹腔注射1次，一连3d。末次注射后24h，大鼠用戊巴比妥钠50g/kg腹腔注射麻醉，行自动脉插管，开放右心耳，用含肝素的生理盐水冲洗后，4的4%多聚甲醛PBS溶液灌注结实，开颅取脑，置4%多聚甲醛PBS溶液中继承结实12h。1.2脑海马神经元凋亡原位检测接纳末了脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末了标识表记标帜(TUNEL)法，试剂盒购自北京中杉公司。经脑漏斗部横切获得脑片，通例脱水

5、、白腊包埋，制成5厚构造切片，脱蜡至水，PBS冲洗，滴加TUNEL反响混淆溶液，在湿盒中37孵育60in，PBS冲洗后，加少许羊血清举行关闭，沥干后加转化剂-辣根过氧化物酶PD，37孵育30in，PBS冲洗，滴加DAB底物溶液，室温孵育10in，冲洗后用苏木素复染，洗片后脱水封片。选择细胞凋亡指数作为评价指标，即在1000倍显微镜NiknElipse50i下，每张玻片随机拍摄脑海马A区14和DG区5个不一连视野，盘算凋亡神经元占总神经元比例。1.3脑海马神经元电镜不雅察各组随机取2只动物，脑海马构造取材后，戊二醛-锇酸双重结实，环氧树脂包埋，超薄切片，用日立H-7500透射电子显微镜举行不雅察

6、。1.4统计学处置惩罚要领计量资料以均数尺度差(s)表现，数据用SPSS14.0软件举行阐发，铅及尼莫地平对凋亡指数的交互效应选用22析因方案方差阐发，各组单独作用比力接纳完全随机方案方差阐发。2效果2.1一样平常环境实行初期，各组大鼠体重无明显差异，均匀为(170.78.0)g。在实行后期，染铅组和铅-尼莫地平组大鼠体重别离为(152.37.6)g和(151.210.5)g较比较组和尼莫地平组别离为(185.512.9)g和(186.610.0)g有显着落落P0.01。2.2海马神经元TUNEL染色不雅察光镜下，海马A区为锥体细胞层，DG区为颗粒细胞层，TUNEL阳性神经元的胞核呈棕色，染色

7、质多浓缩于核膜下呈指环状，有核固缩和核碎裂征象，胞浆中因有核碎片亦可着色。各组海马神经元凋亡指数由高到低依次为染铅组、铅-尼莫地平组、比较组和尼莫地平组，铅-尼莫地平组凋亡指数较单纯染铅组为低(P0.01)，但明显高于比较组和尼莫地平组(P0.01)。析因阐发表现铅与尼莫地平在神经元凋亡指数上存在显着的交互作用(P0.01)，即尼莫地平能明显减轻铅引起的神经元凋亡作用。与比较组比力，单纯尼莫地平组细胞凋亡指数有落落趋势，但尚无统计学意义，表白在正常环境下尼莫地平尚不克不及明显低落神经元的凋亡率。见表1、图1。2.3海马神经元超微布局不雅察比较组和尼莫地平组神经元胞浆有多量粗面内质网，核糖体漫衍

8、匀称，核膜完备，神经突起布局清楚。染铅组神经元细胞器布局根本正常，细胞器漫衍较希罕，粗面内质网有脱颗粒征象，核中染色质在核膜下聚拢，核有固缩征象。铅-尼莫地平组神经元细胞器布局根本正常，粗面内质网增多，细胞核未见非常。见图2。3讨论铅对神经体系的毒作用大概是多方面的，包罗引起神经细胞凋亡、快乐性神经毒作用、脂质过氧化损伤、影响神经递质贮存和开释、滋扰线粒体能量代谢等3，4。如今，尚不克不及用单一的毒理机制来同一说明种种铅毒作用。铅在体内的代谢与钙相似，铅可以或许代替钙，扰乱细胞内正常的钙稳态和信使作用，终极导致细胞的损伤和成效的失调，这是多种铅毒作用机制中较为普及和紧张的环节。Pb2+重要通过

9、钙通道进着迷经细胞内，细胞内Pb2+一连增长以及胞内钙稳态失衡重要表现为钙超载，触发了线粒体膜转运孔的开放，引起线粒体去极化，启动细胞色素-aspases级联反响而导致细胞凋亡的产生5。李丹等6报道大鼠海马神经元凋亡率与染铅剂量间有精良的剂量-反响干系。本研究效果也表现，染铅组海马神经元凋亡率较比较组明显增高，电镜下神经细胞核染色质聚拢，并有固缩征象。这证明了急性染铅毒能引起海马神经元损伤，具有促进细胞凋亡的作用。铅可作用于电压门控性和受体依靠性a2+通道,铅对电压门控性a2+通道影响更显着7。电压门控性a2+通道分为L、N、T、P四种亚型，此中L型是重要的。在钙通道中，Pb2+与a2+有一个

10、高度特异性的竞争位点，铅可以通过与a2+竞争进入细胞内，但胞内a2+浓度并不必然低落。研究提示细胞内微量Pb2+即可激活PK，后者可激活细胞膜、内质网、线粒体的钙通道，使胞外a2+内流，胞内钙库开释，导致胞内a2+浓度增高8。a2+通道存在一个a2+依靠性失活机制，即通过细胞内a2+水昭雪馈调治钙通道活性，防范因过多a2+流入使细胞内a2+超载，而铅对这种反响机制的影响可导致胞内a2+浓度一连增高，进一步引起神经细胞损伤或凋亡9。L型钙通道拮抗剂尼莫地平是新一代二氢吡啶类钙通道拮抗剂，它极易通过血脑屏蔽，重要漫衍在皮层和海马，作用于二氢吡啶受体，引起受体构型产生改变，使a2+通道不变在不运动状

11、态，从而阻断钙内流，有用地调治细胞内钙的程度，使之保持正常的生理成效。它具有改进脑循环，并直接作用于神经元，有易化学习、改进影象的作用，且副作用略微，临床上常作为促智药，如今重要用于痴呆症治疗，但尚无关于用尼莫地平治疗铅中毒智力损伤的报道。Tsig等10报道在体外试验条件下，二氢吡啶类钙通道拮抗剂能淘汰胞外Pb2+经a2+通道进入胞内。濮海同等11在新生鼠非铅毒性脑损伤后细胞凋亡环境及尼莫地平干预作用的研究中，创造尼莫地平干预能明显减轻脑细胞凋亡。在本研究中，单纯用尼莫地平对神经元凋亡的改进作用并不显着，但在急性铅染毒的底子上，尼莫地平具有明显按捺铅诱导的神经细胞凋亡作用。综上所述，急性染铅毒

12、能引起海马神经元损伤，促进细胞凋亡；尼莫地平大概具有抗急性铅染毒海马神经元损伤的作用。【参考文献】1TngS,VnShirndingYE,PrapantlT.Envirnentalleadexpsure:apublihealthprblefglbaldiensinsJ.BullrldHealthrgan,2000,78(9):1068-1077.2bertA,arksN,EvansHL,etal.Lead(Pb2+)prtesapptsisinnebrnraterebellarneurns:pathlgialipliatinsJ.JPharalExpTher,1996,279(1):453-4

13、42.3LidskyTI,ShnEiderJS.Adverseeffetsfhildhdleadpisning:basiehanissandlinialrrelatesJ.Brain,2022,126(1):5-19.4黄陈平,林林,苏依所,等.急性铅染毒对发育期小鼠举动影响及与脂质过氧化程度的干系J.中国举动医学科学,2022,16(3):199-201.5FxDA,apbellL,BlkerYS.Funtinalalteratinsandappttielldeathintheretinafllingdevelp-entalradultleadexpsureJ.Neurtxilgy,1997

14、,18(3):645-664.6李丹,张进,雷荣辉,等.铅对大鼠海马神经细胞凋亡及Bl-2、Bax基因表达的影响J.西安交通大学学报(医学版),2022,25(5):433-435.7SuiL,RuanDY,GeSY,etal.Tpnentsflng-terdepressinareipairedbyhrnileadexpsureinareaA1anddentategyrusfrathippapusinvitrJ.NeurtxilTeratl,2000,22(5):741-749.8ShanneFA,LngGJ,RsenJF,etal.LeadinduedriseinintraellularfreealiuisediatedthrughativatinfprteinkinaseinsteblastibneellsJ.BihiBiphysAta,1997,1360(3):247-254.9FxDA,HeL,PblenzAT,etal.Lead-induedalteratinsinretinalGPphsphdiesterasetriggeraliuverlad,ithndrialdysfuntinandrdphtreeptrapptsisJ.TxilLett,1998,102-103:359-361.10Tsig