板蓝根对机体免疫功能及流感病毒FM1的作用

1、板蓝根对机体免疫功能及流感病毒FM1的作用【关键词】板蓝根；,流感病毒；,淋巴细胞；,红细胞免疫黏附；,抗病毒作用摘要：目的研究板蓝根提取物对小鼠机体免疫功能的影响及其抗流感病毒(F1)的作用。方法昆明种小鼠腹腔注射板蓝根提取液，检测红细胞免疫黏附功能等各项免疫指标;昆明种小鼠滴鼻感染流感病毒F1后腹腔注射板蓝根提取液，观察板蓝根提取液的抗病毒作用。结果与正常对照组相比，板蓝根组脾指数增加P0.05；T、B淋巴细胞刺激指数、RB3bR花环阳性率都明显增高，RBI花环阳性率显著降低，有显著性差异P0.01。与阴性对照组相比，板蓝根组肺指数降低P0.05，体重增加值高P0.05)。结论板蓝根提取物

2、具有很强的增强机体免疫功能的作用，其进步红细胞免疫系统功能的作用极其显著；同时板蓝根提取物也有一定的抗流感病毒作用。关键词：板蓝根；流感病毒；淋巴细胞；红细胞免疫黏附；抗病毒作用Abstrat：bjetiveTstudythestrengtheningfuntinfextratfRadixIsatidisniunesysteinKuningieanditsantiviraleffetsninfluenzavirus(F1).ethdsExtratfRadixisatidisasintraperitneallyinjetedtKuningie.Lyphyteprliferatinassayand

3、rsettefratintestereusedteasuretheellulariunefuntinandhuraliunefuntinanderythrytiiuneadhesivefuntinfie.F1virusasdrppednasallyinKuningie,thentheanialserentrlintraperitneallyinjetedextratfRadixisatidis,theantiviraleffetsfRadixisatidiserebserved.Resultsparedithntrlgrup,spleenindexintheRadixIsatidisgrupi

4、nreasedF=4.578,P0.05.paredithntrlgrup,SIfTlyphyteintheRadixIsatidisgrupinreasedsignifiantlyF=15.537,P0.01,SIfBlyphyteinreasedbviuslyF=11.050,P0.01,andtheratefRB3bRasinreasedF=7.865,P0.01,t.paredithntrlgruptheratefRBIintheRadixIsatidisgrupdereasedgreatlyF=20.354,P0.01.paredithnegativegrup,Lungindexin

5、theRadixIsatidisgrupdereasedF=47.020,P0.05.ThedegreefhangeinEightfthatgrupashigherthannegativegrupF=25.877,P0.05.nlusinRadixIsatidishasstrngstrengtheningfuntinniunesysteinKuningie,itsenhaningfuntinnredelliuneadherene(RIA)isextreelysignifiant.rever，italshasantiviraleffetsninfluenzavirus.Keyrds：RadixI

6、satidis;Influenzavirus;Lyphyte;RIA;Antiviraleffets中药板蓝根为十字花科菘蓝属植物菘蓝IsatisindigtiaFrt.的根，性寒味苦，有清热解毒、凉血消肿的成效。随着国际上应用天然药物的热潮，板蓝根的药理活性及其有效成分得到了深化的研究，并引起了国内外学者的广泛关注，但是关于板蓝根制剂对红细胞免疫功能的作用却少有报道。1981年美国的Siegel1，2在前人研究的根底上提出了“红细胞免疫系统(RIS)的新概念。近20多年来国内外学者对红细胞免疫功能进展了大量研究，红细胞的免疫功能逐渐被人们所认识，红细胞免疫已成为近年来免疫学研究中的一个新课题

7、。1器材1.1病毒流感病毒鼠肺适应株F1，由天津医科大学微生物实验室培养提供。1.2鸡胚911日龄鸡胚，购于天津市羽丰种鸡常1.3药品注射用胸腺肽：辽宁天龙药业，批号：国药准字H20003786；盐酸吗啉胍片病毒唑：山西津华药业，批号：国药准字H14023058；板蓝根提取液：安徽产板蓝根,以70%乙醇渗漉法提龋1.4动物昆明种小鼠雄，1416g，北京大学医学部实验动物科学部提供,答应证编号：sxk(京)20020001。1.5试剂刀豆蛋白nA：siga分装，批号：2022；脂多糖LPS：siga分装，批号：L2880；TT：siga分装，批号：2128；RPI1640培养基干粉：Gib分装,

8、批号：1181499；新生牛血清NS：Hylne分装，批号：AJ11171。1.6仪器二氧化碳培养箱，美国FraSientifi公司；酶标光度计，美国BIRAD公司；电子天平，日本AD公司；B600超低速自动平衡离心机，白洋离心机厂；LDZ52平板离心机，北京医用离心机厂；SHP250B生化培养箱，天津天宇机电。2方法2.1F1的培养及其LD50的测定3911日龄鸡胚30枚，采用尿囊腔接种法培养繁殖流感病毒，滴定血凝效价，将血凝效价为1:640的鸡胚尿囊液搜集在一起，作为本次实验使用的F1原液。将F1原液十倍倍比稀释，得到101，102，103，104，105浓度的病毒液。取昆明种小鼠50只，

9、随机分5组，10只/组，乙醚轻度麻醉后，各组分别滴鼻给予以上5种浓度的病毒液50l，观察14d，统计各组死亡数。结果见表3。使用Reeduenh法测得此流感病毒的LD50为103.2。2.2板蓝根提取液增强机体免疫功能的作用2.2.1动物分组及给药方法昆明种小鼠30只，随机分3组，10只/组，给药方法见表1。给药7d后，先禁食、水8h以上，称重后摘眼球放血处死，搜集血液，并无菌解剖取胸腺和脾脏，测定胸腺指数和脾指数，检测脏器比4、细胞免疫功能、体液免疫功能和红细胞免疫功能等多项免疫指标。胸腺脾指数胸腺脾重量小鼠体重100表1动物分组及给药方法略2.2.2细胞免疫功能T细胞增殖试验58常规制备5

10、106/l脾细胞悬液备用。在96孔板上加脾细胞悬液100l/孔，每份设3个复孔，另设3个空白对照孔；再加20g/l浓度的nA50l，空白对照孔加RPI1640培养液50l；用含10NS的RPI1640培养液加至200l，使nA的终浓度为5g/l，置37，52温箱培养66h；各加5g/l的TT10l，混匀后继续培养6h；加DS100l，充分混匀，静置10in，用酶标光度计测波长570n的D光密度值，以SI6刺激指数反映细胞增殖程度结果见表4：SI试验孔D均值/对照孔D均值2.2.3体液免疫功能B细胞增殖实验8，9在96孔板上加脾细胞悬液100l/孔，每份设3个复孔，另设3个空白对照孔；再参加10

11、0l浓度为20g/l的LPS作为刺激剂，LPS终浓度为10g/l，空白对照孔那么加RPI1640培养液100l；然后置于37，52温箱66h；各加5g/l的TT10l，混匀后继续培养6h；加DS100l，充分混匀，静置10in，测波长570n的D值，计算SI结果见表4。转贴于论文联盟.ll.2.2.4红细胞免疫功能红细胞酵母菌花环试验10，11常规制备1.25107/l小鼠红细胞悬液和1108/l补体致敏的酵母菌细胞悬液备用。取两组小试管，每管加红细胞悬液100l，第1组试管加补体致敏的酵母菌悬液100l/管，第2组试管加未致敏的酵母菌悬液100l/管，摇匀，37水浴30in；取出后轻轻摇匀，

12、加0.9%生理盐水200l/管，混匀；再加0.25戊二醛75l/管，摇匀；分别取1/3量程度涂片，吹干，加甲醛固定，瑞氏染色，油镜下计数。红细胞上黏附两个或两个以上酵母菌者为花环阳性，分别计数200个红细胞，计算出花环阳性细胞百分率，第1组为RB3bR花环，第2组为RBI花环结果见表4。2.3板蓝根提取液抗流感病毒的作用1215昆明种小鼠40只，随机分4组，10只/组,分组及给药方法如表2。前3组小鼠乙醚轻度麻醉后，滴鼻感染10倍LD50浓度的F1液50l；正常对照组那么以0.9生理盐水50l滴鼻。各组于感染24h前开场腹腔注射不同药物，给药7d后，禁食、水8h以上，称重后断颈处死，解剖取肺脏

13、，测定小鼠肺指数。表2动物分组及处理方法略2.4统计学处理方法实验数据以s表示，统计学处理方法上3组或4组数据之间采用SPSS11.5软件的neayANVA的方差分析方法进展统计分析。3结果3.1LD50测定结果见表3。表3F1的LD50测定略3.2板蓝根提取液对机体免疫功能的影响由表4可见，与1组相比，2组的脾指数略有增加P0.05,3组的脾指数明显增加P0.01；2组、3组的T、B细胞刺激指数和RB3bR花环阳性率较1组都明显增高P0.01，而RBI花环阳性率都明显降低，存在显著性差异P0.01；并且2组T细胞刺激指数比3组明显增强P0.01，有显著性差异P0.01。胸腺指数3组之间无差异

14、。表4板蓝根提取液对机体免疫功能的影响略与正常对照组比拟，*P0.05，*P0.013.3板蓝根提取液的抗流感病毒作用由表5可见，与4组相比拟，1组、2组、3组的肺指数显著降低F=47.020,P0.01。与1组相比，2组的肺指数较低F=47.020,P0.05；3组的肺指数明显低于1组,有显著性差异F=47.020,P0.01。与4组相比，1、2、3组的体重增加值显著增高F=25.877,P0.01。与1组相比，2组的体重增加值较高F=25.877,P0.05；3组体重增加值明显高于1组F=25.877,P0.01,有显著性差异。表5板蓝根提取液对肺炎小鼠肺指数和体重增加的影响略与阴性药物对

15、照组，正常对照组比拟,*P0.05；*P0.014讨论?中国药典?1985，1990和1995版均只将十字花科菘蓝属植物菘蓝的枯燥根收载作为正品板蓝根16。板蓝根的提取工艺17有多种，本次实验采用70%乙醇渗漉法18提取板蓝根液，此法能有效地减少提取过程中板蓝根靛蓝、靛玉红、多糖等有效成分的损失，防止加热时板蓝根中靛苷的水解和氧化，从而保证了板蓝根提取液中有效成分的含量。脾脏和胸腺是重要的免疫器官，脾指数和胸腺指数在一定范围内可以直接反映机体的免疫功能的强弱。淋巴细胞中，T、B细胞是主要的免疫活性细胞，nA、LPS分别可以选择性的刺激T、B细胞使之增殖，其增殖的才能上下可直接反映机体免疫功能的

16、强弱。由表4可见，板蓝根提取液可以有效地进步小鼠脾指数，对小鼠T、B细胞增殖反响有明显的增强作用，而且在增强小鼠T细胞增殖才能方面比胸腺肽注射液作用更明显，说明板蓝根提取液可以明显进步小鼠机体的免疫功能。F1感染小鼠后，可以引发小鼠肺部炎性病变，导致小鼠肺组织充血水肿，质地变硬，使肺指数增高。由表5可见，板蓝根提取物可以缓解流感病毒引起的鼠肺炎病症，降低肺组织实变程度，具有一定的抗流感病毒的作用，但其作用没有阳性药物病毒唑显著。红细胞的免疫功能主要是藉助其膜上的蛋白质分子起作用的，红细胞膜上3b受体可与补体致敏的酵母菌黏附形成RB3bR花环，红细胞膜上黏附的I中的3b分子可与未致敏的酵母菌黏附

17、形成RBI花环。RB3bR花环率和RB花环率可作为红细胞免疫黏附功能的指标，假如二项指标都低下，判为原发性红细胞免疫功能低下，为红细胞膜3b受体受到破坏和影响所致；假如RB3b受体花环率降低，而RB-I花环率增高，为继发性红细胞免疫功能低下，是由于循环免疫复合物增加，红细胞黏附I过多引起。研究发现红细胞参与机体免疫调控，并有完好的自我调控系统。因此，红细胞的免疫功能可以看作是机体抗感染免疫的重要因素，是衡量机体免疫功能的重要指标。由表4可见，板蓝根提取液可以显著地进步小鼠红细胞的免疫黏附功能，且其作用同胸腺肽注射液相比拟无差异。中药板蓝根作为清热解毒药具有悠久的历史。通过本实验研究说明，中药板

18、蓝根具有明显增强小鼠免疫功能的作用，并且板蓝根提取液对进步小鼠红细胞免疫功能作用显著，同时中药板蓝根也具有一定的抗流感病毒功能。因中药的抑菌、抗毒作用机制不同于抗生素，不易使细菌和病毒产生耐药性，而日益受到关注。中药板蓝根作为临床上一种重要的抗病毒中药，我们应积极发现其新的药理作用，开拓其新的药用价值，并指导临床合理使用中药协同抗生素治疗机体微生物感染，对减少细菌和病毒耐药性的产生也有着积极的现实意义。参考文献：1SiegelI,LiuTL,GiEiherN.Thered-elliunesysteJ.Lanet,1981,12(2)：556.2SiegelI,LiuTL,GiEIherN.Re

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