白色念珠菌细胞壁β葡聚糖升白细胞药效学作用的研究

1、白色念珠菌细胞壁-葡聚糖升白细胞药效学作用的研究【摘要】目的研究白色念珠菌andidaAlbians细胞壁差异溶解性的-葡聚糖-gluan对环磷酰胺ylphsphaide，endxan，ytxan，TX所致小鼠外周血白细胞淘汰的上升作用。要领接纳TX所致的小鼠外周血白细胞淘汰模子，研究白色念珠菌细胞壁-葡聚糖对小鼠外周血白细胞数的影响。效果三种溶解性的白色念珠菌细胞壁-葡聚糖均能升高小鼠外周血白细胞、中性粒细胞和单核细胞数。各组小鼠脾脏指数增长，脾脏、骨髓巨核细胞系增生。不溶性的-葡聚糖作用更显着。结论白色念珠菌-葡聚糖尤其是不溶性-葡聚糖对TX所致的白细胞淘汰有上升作用，是一种很有前程的免疫

2、调治剂。【关键词】白色念珠菌；-葡聚糖；生物学活性；提取阐发；免疫药理作用【Abstrat】bjetiveTstudythepharalgialeffetfthebasi-gluan，aidi-gluanandinsluble-gluanextratsfandidaalbiansntheleukytpiesis-prtingintheleukpeniaie.ethdsiefeahgrupexepttheuntreatedntrlgrupereadinisteredylphsphaideintraperitneally100g/(kgd)frthreedaystdevelpleupenia.Th

3、eexperientalgrupereadinisteredthreekindsfandidaalbians-gluanintravenuslyfrsixdaysseparately.TheperipherialleukytesfallieereuntedbefretreatedTX，and1，3，5，7daysaftertreatedTX.ResultsThreekindsfandidaalbians-gluananinreasethenubersfleukytes，neutrphiligranulytesandnytesintheperipheralbld.Thespleenindexin

4、eahgrupanialareinreased，andegakaryytesareinreasedinspleenandarr.nlusinandidaalbians-gluanspeiallyinsluble-gluansisakindfiundulatrhihaninreasethenubersfleukytesintheperipheralbld.【Keyrds】-gluan；andidaalbians；leukyte；iundulatr-葡聚糖-gluan是白色念珠菌细胞壁中含量最高的多糖。作为一类条件致病真菌多糖，白色念珠菌-葡聚糖有着多种生物学活性和免疫药理学作用，在抗炎、抗肿瘤、

5、刺激造血等方面都有很高的药效学作用1，但有关差异性子的白色念珠菌-葡聚糖升白细胞作用的研究甚少。本研究制备三种溶解性的-葡聚糖，不雅察其对环磷酰胺ylphsphaide，endxan，ytxan，TX所致的小鼠外周血白细胞淘汰的上升作用，为进一步确证白色念珠菌-葡聚糖刺激造血体系使白细胞升高的作用机制，和进一步研究白色念珠菌-葡聚糖有用身分或有用因子，为建立药物质量操纵尺度和量效干系提供理论根据。1质料与要领1.1动物与试剂昆明种小白鼠，46周龄，体重202g，昆明医学院动物科云南省实行质量及格证0000481号。沙氏液体造就基Saburaudsdextrseagar：卵白胨10g、葡萄糖40

6、g、溶于1000l蒸馏水，高压灭菌后备用；淀粉酶：分子量9600，酶活力：50/g上海伯奥生物科技；白色念珠菌碱溶性-葡聚糖andidaalbiansbasi-gluan，ABBG、酸溶性-葡聚糖andidaalbiansaidi-gluan，AABG)和不溶性-葡聚糖andidaalbiansinsluble-gluan，AIBG：均按文献要领制备2。1.2仪器LRH-250Z型震荡造就箱广东医疗东西厂；81-2型恒温磁力搅拌器上海司乐仪器厂。1.3白念珠菌的造就和三种白色念珠菌-葡聚糖的制备取少量保存于密封无菌容器中的纯白色念珠菌菌落，接种于沙氏液体造就基，接种后37恒温摇床160次/in

7、震荡造就67天，3000rp离心30in，网络菌体，冷冻保存。提取葡聚糖的流程，见图1。1.4小鼠白细胞淘汰模子的创立除空缺比较组外，各组小鼠腹腔注射TX100g/(kgd)，一连3天，创立小鼠外周血白细胞淘汰模子。1.5确定三组-葡聚糖的给药剂量参照急性毒性实行探究LD50值，各组给药剂量末了如表1。1.6统计学处置惩罚急性毒性学实行效果接纳Bliss法盘算LD50值。药效学实行接纳SPSS11.5统计软件举行数据处置惩罚阐发，全部指标均以均数尺度差xs表现，组间比力接纳方差阐发，以P0.05为差异有明显性。图1从白色念珠菌提取ABBG、AABG、AIBG的流程表示图Table1Dsedes

8、ignfexperient2效果2.1急性毒性学实行通过急性毒性实行得到LD50值别离为：ABBG36.8937g/kg，AABG89.23549g/kg，AIBG767.7753g/kg；95%可信区间别离为ABBG组32.005242.5289g/kg，AABG组76.7182103.8025g/kg，AIBG组663.748888.106g/kg。各实行组小鼠肉眼不雅察，除肝脏增大外未见显着变革，病理HE切片表现肝细胞有差异程度的肿胀和空泡变。2.2外周血白细胞变革实行第5、7、9天ABBG、AABG、AIBG组小鼠外周血白细胞数、中性粒细胞数、单核细胞数均明显增高，此中第7天、第9天，

9、AIBG组白细胞数、单核细胞数较阳性比较组rhG-SF升高，差异有明显性。Table2Nubersfleukytefperipheralbldineahgrupanial(xs)注：Nte：*P0.05，parediththenralntrl；*P0.05，parediththepsitiventrlTable3Nubersfneutrphiligranulytefperipheralbldineahgrupanial(xs)注：Nte：*P0.05，parediththenralntrl；*P0.05，parediththepsitiventrlTable4Nubersfnytefperip

10、heralbldineahgrupanial(xs)注：Nte：*P0.05，parediththepsitiventrl2.3脾脏、胸腺指数变革实行第5、7、9天，各组小鼠胸腺指数比力，差异无明显性(P0.05)。各组小鼠给药后，脾脏指数均增长。Table5Theeffetf-gluannthespleenindexineahgrupanial(xs)注：Nte：*P0.05，parediththepsitiventrl2.4药效学实行病理构造学改变脾脏：白髓、红髓分界不甚明晰，红髓内细胞数增多，与空缺比较组比力，ABBG、AABG、AIBG组脾窦出现较多的巨核细胞；骨髓：实行组小鼠骨髓细胞

11、增生存泼，与空缺比较组比力，ABBG、AABG、AIBG组的巨核细胞数增多，提示巨核细胞系增生存泼。3讨论多能造血干细胞具有多向分化的潜能，成年小鼠体内的多能造血干细胞重要漫衍在脾脏和骨髓3。本研究表现，实行第7天时，各实行组白细胞总数、中性粒细胞数都较rhG-SF高(P0.05)；实行第7天、第9天，AIBG升高外周血白细胞、单核细胞数显着高于ABBG、AABG和rhG-SF(P0.05)，说明-葡聚糖，尤其是AIBG可刺激血液体系白细胞、中性粒细胞、单核细胞数差异程度的升高。实行第7天，ABBG、AABG、AIBG组小鼠脾脏指数均与rhG-SF差异有明显性(P0.05)；第9天，AIBG脾

12、脏指数较rhG-SF、ABBG、AABG组高，统计学表白差异均具有明显性(P0.05)。与成年小鼠体内造血干细胞的漫衍同等，实行创造ABBG、AABG、AIBG组小鼠的构造病理学改变重要表如今骨髓和脾脏。与空缺比较组比力，三组小鼠脾脏、骨髓巨核细胞数增多，AIBG组要更显着。因此，综合外周血细胞数、脾脏指数、构造改变，我们推测-葡聚糖在刺激小鼠外周血白细胞总数升高的历程中大概与刺激FU-S增殖，向粒系、巨核系组细胞分化，进而天生粒细胞、单核细胞。造血器官中基质细胞是造血微情况中紧张的身分，与造血有关的基质细胞涉及到巨噬细胞、成纤维细胞、网状细胞、淋巴细胞、内皮细胞和载脂肪细胞。此中，巨噬细胞被

13、证明是在造血产生历程中有紧张作用的一个微情况因素。巨噬细胞可通过细胞彼此作用和排泄SF、Ep、BPA、PGE和IL-1因子，调治全部四系血细胞的生长和分化4。以往研究证明念珠菌多糖可刺激巨噬细胞开释细胞因子K如IL-6、IL-8、IL-1、TNF等5，6。这些细胞因子可调控造血细胞的增殖运动：IL-1、TNF可刺激内皮细胞产生粒细胞集落刺激因子G-SF及粒-巨噬系集落刺激因子G-SF，G-SF和G-SF是使粒细胞和单核细胞的母细胞增殖分化的特异性诱导剂，并能刺激骨髓向外周血液开释成熟的中性粒细胞，收缩中性粒细胞的成熟期7。同时，SF可作用于粒-单系祖细胞FU-G，诱导其增殖分化。IL-1还能激

14、活干细胞从G0期进入增殖周期，扩大干细胞池；可为早期干细胞对SF起反响做预备，并诱导帮助细胞产生SF及其他K，从而间接调治造血。-葡聚糖是念珠菌紧张的抗原决定簇8，单核细胞、巨噬细胞上都存在-葡聚糖的特异性受体9。白色念珠菌的三种溶解性的-葡聚糖，在布局上都是切合单核细胞、巨噬细胞上-葡聚糖受体对付配体的要求，即能被特异识别-13和-16糖苷键10。巨噬细胞作为一类抗原递呈细胞AP摄取-葡聚糖抗原，随后诱导性的表达高程度H，H与Th细胞上的TR和D4彼此作用。使Th细胞成效加强，IL-2排泄增多，IL-2又能保持T细胞的存活与增殖Th细胞被激活后刺激B细胞分化、增殖11。实行中，小鼠脾脏指数的显着增长、脾脏、骨髓细胞增生，说明白-葡聚糖在升高外周血白细胞的同时，也对激活机体的整个免疫体系活性产生影响。因此，AABG、ABBG、AIBG升高小鼠外周