实验动物培训课件word版

1、第一讲 实验验动物学学概论华中科技技大学同同济医学学院孔利佳一、实验验动物的的概念二、实验验动物科科学发展展概况三、实验验动物质质量国家家标准四、实验验动物管管理条例例五、实验验动物福福利一、实验验动物学学的基本本概念实验动物物(laaborratoory aniimall)实验用动动物(eexpeerimmenttal aniimall)实验动物物学(llaboorattoryy annimaal sciiencce,LLAS)实验动物物实验动物物（laaborratoory aniimall）是指指经人工工饲育，对对其携带带微生物物实行控控制，遗遗传背景景明确或或者来源源清楚的的用于科科学

2、研究究、教学学、生产产、检定定以及其其他科学学实验的的动物。实验动物物必须具具备三个个特点：1、从遗遗传控制制角度实实验动物物必须是是来源清清楚、人人工培育育、遗传传背景明明确的动动物。2、从微微生物控控制角度度所有实实验动物物携带的的微生物物、寄生生虫都是是在人工工严格控控制之下下的。3、从应应用角度度培育所所有实验验动物的的最终目目的都是是用于科科学实验验。实验动物物的应用用领域广广泛1、医学学生物学学2、制药药工业3、生物物制品4、中医医药5、轻工工业和食食品工业业6、农业业7、宇航航、国防防和军事事科学在生命科科学实验验研究中中实验动动物总是是被作为为前沿哨哨兵和人人类的替替身，用用来

3、验证证一个又又一个的的生命科科学真理理。由于于生命现现象的复复杂性，目目前还没没有其他他方法能能够完全全替代实实验动物物进行实实验研究究。从某种意意义上说说，实验验动物是是经人类类用现代代科技手手段创造造的用于于为人类类科学实实验服务务的，并并具有新新的生物物学特性性的动物物物种。实验用动动物：（Animal for research)泛指一切切用于实实验的动动物。也可称为为广义的的实验动动物。实验动物物学：（laboratory animal science)是研究实验动物和动物试验的科学。它涉及到两方面的问题：1、实验验动物；2、动物物试验。实验动物物（laaborratoory anii

4、mall)是以以实验动动物本身身为研究究对象，专专门研究究它的生生物学特特性，遗遗传育种种，保种种，培育育新的品品种品系系，疾病病控制，营营养需要要等方面面的问题题，以达达到提供供标准化化的实验验动物的的目的。动物试验验：（aanimmal expperiimennt)是是以实验验动物为为材料，采采用各种种方法在在实验动动物身上上做试验验，研究究动物在在实验过过程中的的反应、表现及及发生、发展规规律和有有关技术术问题。也就是是实验动动物的应应用问题题。实验动物物学诞生生于上世世纪500年代，由由于近交交系动物物、免疫疫缺陷性性动物、悉生动动物以及及大量基基因修饰饰等特殊殊动物的的培育成成功，使

5、使其从普普通动物物学中脱脱颖而出出。目前已发发展成为为一门独独立的、综合性性的基础础学科。它融生生物学、动物学学、遗传传学、微微生物学学、医学学、药学学、兽医医学等为为一体并并引用其其他自然然科学的的成功发发展起来来。实验动物物学的基基本内容容：1、实验验动物遗遗传育种种学2、实验验动物微微生物与与寄生虫虫学3、实验验动物环环境生态态学4、实验验动物营营养学5、实验验动物医医学6、比较较医学7、动物物试验方方法及技技术实验动物物学的任任务研究怎样样以优质质的实验验动物和和精确的的实验方方法，使使动物经经实验处处理后，能能获得良良好的反反应重复复性。实验动物物科学作作为生命命科学研研究的重重要手

6、段段和条件件，直接接影响着着许多领领域研究究成果的的确立和和水平高高低，同同时它的的发展和和提高又又会把许许多领域域的研究究引入新新的境地地，推动动生命科科学的发发展。实验动物物标准化化：实验动物物生产条条件标准准化；实验动物物质量标标准化；动物实验验应用条条件标准准化。实验动物物质量的的标准化化包括微微生物寄寄生虫学学质量及及遗传学学质量的的标准化化。实验动物物标准化化的四大大控制1、实验验动物遗遗传质量量控制2、实验验动物微微生物和和寄生虫虫质量控控制3、实验验动物营营养质量量控制4、实验验动物环环境质量量控制实验动物物的标准准化直接接关系到到生命科科学研究究的质量量、生物物制品的的产品质

7、质量、以以及药品品、食品品等的安安全性有有效性的的正确评评价，因因而与人人类健康康紧密相相关。二、发展展概况人类使用用动物做做实验已已有上千千年的历历史。木乃伊的的制作-古古埃及动物脏器器解剖-古古希腊血液循环环现象的的证实，心心脏的作作用英国学学者（11578816657）病原微生生物引起起传染病病和疫苗苗的发明明法国化化学家（18221895）无菌豚鼠鼠的培育育18885年年DBA小小鼠的培培育119099年发现裸小小鼠 19662年人类肿瘤瘤移植裸裸小鼠成成功119699年遗传工程程小鼠的的创立20世世纪末20世纪纪50年代代后，伴伴随着生生命科学学技术的的进步，特特别是实实验科学学的兴

8、起起，极大大地促进进了实验验动物科科学的发发展。19566年联合合国教科科文组织织与医疗疗科学国国际组织织和国际际生命科科学会联联合成立立了国际际实验动动物委员员会（IInteernaatioonall Coounccil on Labboraatorry AAnimmal Sciiencce,IICLAAS)国际实验验动物科科学委员员会（IICLAAS）全球性实实验动物物学术机机构，负负责国际际实验动动物科学学事业发发展的指指导协调调与管理理工作，每每三年召召开一次次国际学学术研讨讨会，交交流信息息，加强强合作，对对促进实实验动物物的标准准化、商商品化、社会化化，推动动实验动动物科学学的发展

9、展起了良良好作用用。该委员会会有400余个成成员国，中中国19987年年正式被被接纳为为该委员员会的成成员国。AAALLAC国际实验验动物管管理评估估及认证证协会（AAALAC，Associationfor Assessment and Accreditation of Laboratory AnimalCare International）是世界公认的国际认证机构之一，AAALAC认证是我国新药安全评价和科学研究走向国际的一个重要环节，成为我国生命科学事业与实验动物福利与伦理与国际接轨的重要标志。近年来国国内一些些较大的的动物实实验设施施都陆续续开展了了对外服服务,通过了了美国的的AAAAL

10、ACC认证,具备了了服务国国外高端端客户的的条件.武汉大学学实验动动物中心心20008年通通过美国国的AAAALAAC认证证。国外发展展趋势1、使用用动物的的数量不不断下降降，质量量不断提提高。使用动物物的种类类也发生生明显变变化。2、动物物实验模模型走向向商品化化，人类类疾病的的动物模模型大量量发展。许多国家家的实验验动物生生产厂商商已可出出售多种种经过遗遗传修饰饰的动物物模型。3、动物物替代物物和替代代方法不不断推广广应用。实验动物物的福利利和动物物保护运运动呈现现全球化化趋势，发发达国家家有关实实验动物物的法律律和法规规逐步完完善，普普遍开展展了以替代（rrepllaceemennt）、

11、减少（rreduuctiion）优化（rrefiinemmentt）为核核心的“3R”运运动。目前科学学技术发发展水平平较高的的国家都都相继颁颁发了实实验动物物管理条条例、法法规或规规范，已已实现了了实验动动物生产产的标准准化、商商品化和和社会化化，并且且形成了了完整的的实验动动物教育育、科研研、生产产管理与与应用体体系。实验动物物生产的的标准化化、商品品化及社社会化程程度是一一个国家家科学技技术发展展水平的的重要标标志之一一。自19001年诺诺贝尔生生理学或或医学奖奖设立以以来，到到20009年为为止，1109年年中有771年的的奖项直直接涉及及到255种动物物。包括常规规实验动动物如小小鼠

12、、大大鼠、兔兔、犬、豚鼠、地鼠、猫、猪猪、猴、鸡和蛙蛙；还有有非常规规实验动动物如鸟鸟类、马马、鱼、蛇、果果蝇、蜜蜜蜂、线线虫等。可以说，没没有动物物的巨大大贡献，人人类对于于生命的的理解是是绝对不不可能达达到现在在这一程程度。国内发展展概况我国实验验动物科科学起步步较晚，1949年在全国六大生物制品所和大的科研机构和高等医学院校陆续建立了一定规模的实验动物繁殖场，培训了干部和工作人员，成为我国实验动物事业发展的基础。我国的实实验动物物科学在在19778年第第一次全全国科技技大会以以后才真真正发展展起来。为了适应应我国科科学技术术与国民民经济发发展的需需要，119811年全国国人大提提案国务务

13、院责成成国家科科学技术术部进行行实验动动物情况况调查，科科学技术术部于119822年11月在在云南召召开第一一届全国国实验动动物工作作会议，把把发展实实验动物物科学纳纳入国家家计划，从从而促进进和推动动了我国国实验动动物科学学事业的的发展。19877年中国国实验动动物学会会成立，同同年加入入国际实实验动物物科学委委员会，成成为ICCLASS的成员员国。19888年“实验动动物管理理条例”经国务务院批准准，由国国家科委委以第二二号令发发布施行行。卫生生部颁布布了“医学实实验动物物管理条条例实施施细则”。19944年国家家技术监监督局正正式发布布了“实验动动物微生生物和寄寄生虫监监测”等7个中华华

14、人民共共和国国国家标准准。表明明我国实实验动物物的法规规体系已已经形成成。19977年全国国的实验验动物工工作归口口国家科科学技术术部主管管。各省省、直辖辖市、自自治区的的实验动动物工作作归各自自科技厅厅（局）和和科委主主管。20011年12月七七部委联联合签署署了关于于实行实实验动物物生产和和使用许许可证的的管理办办法，进进一步加加强了对对实验动动物工作作的管理理力度。北京市人人大19996年年率先通通过了对对实验动动物工作作管理的的法规。湖北省第第十届人人民代表表大会常常务委员员会第十十六次会会议于220055年7月29日通通过了湖北省省实验动动物管理理条例，自20005年年10月1日起实

15、实施。云南省220077年也通通过了对对实验动动物工作作的管理理法规，开开始了对对实验动动物工作作的立法法管理。三、实验验动物质质量国家家标准实验动物物的标准准是对以以实验动动物为对对象或应应用材料料这一重重复性事事物或有有关概念念所做出出的统规定；是以实实验动物物这一领领域的科科学技术术，实践践经验的的成果为为基础，经经有关方方面的协协商一致致由国国家主管管机关批批准，以以特定形形式发布布。是实实验动物物科技人人员需要要共同遵遵守的准准则和依依据。20022年由国国家质量量监督检检验检疫疫总局颁颁布实施施第二版版实验动动物质量量国家标标准包括122项强制制性标准准（GBB）和711项非强强制

16、性标标准（GGB/TT）。强制性标标准（GGB122项）哺乳类实实验动物物的遗传传质量控控制微生物学学等级及及检测寄生虫学学等级及及检测环境及设设施配合饲料料通用质质量标准准配合饲料料卫生标标准大小鼠、豚鼠、家兔、地鼠、犬和猴猴配合饲饲料推荐性标标准（GGB/TT71项项）主要是涉涉及实验验动物质质量的各各种检测测方法。哺乳类实实验动物物的遗传传质量控控制(GGB)规定了哺哺乳类实实验动物物的遗传传分类及及命名原原则、繁繁殖交配配方法和和近交系系动物的的遗传质质量标准准。适用于哺哺乳类实实验动物物的遗传传分类、命名、繁殖及及近交系系小鼠、大鼠的的遗传纯纯度检测测。微生物学学等级及及检测GGB规

17、定了实实验动物物微生物物等级及及监测。包括：实验动动物微生生物学的的等级分分类、检检测要求求、检测测程序、检测规规则、结结果判定定和报告告。适用于豚豚鼠、地地鼠、兔兔、犬和和猴；清清洁级及及以上小小鼠、大大鼠。环境及设设施GBB规定了实实验动物物繁育、生产及及实验环环境条件件和设施施的技术术要求及及检测方方法，同同时规定定了实验验动物垫垫料、饮饮水和笼笼具的要要求。适用于一一切实验验动物繁繁育、生生产、实实验场所所的环境境条件及及设施设设计、施施工、工工程验收收及经常常性监督督管理。GB5004477-20008实实验动物物设施建建筑技术术规范微生物学学等级是20002年GB与19994年GB

18、变化化最大的的部分。也是对对实验动动物工作作影响最最大的一一个部分分。实验动物物微生物物等级的的设定（1994GB）小鼠普通通级清洁洁级SPPF级无菌级级大鼠普通通级清洁洁级SPPF级无菌级级地鼠普通通级清洁洁级SPPF级无菌级级豚鼠普通通级清洁洁级SPPF级无菌级级家兔普通通级清洁洁级SPPF级无菌级级犬普通级级SPFF级猴普通级级SPFF级实验动物物微生物物等级的的设定（2002）小鼠清洁洁级SPPF级无菌级级大鼠清洁洁级SPPF级无菌级级地鼠普通通级清洁洁级SPPF级无菌级级豚鼠普通通级清洁洁级SPPF级无菌级级家兔普通通级清洁洁级SPPF级无菌级级犬普通级级SPFF级猴普通级级SPFF

19、级实验动物物质量国国家标准准是实验验动物工工作的重重要组成成部分，是是实验动动物标准准化、规规范化和和科学化化管理的的基础，是是提高实实验动物物质量水水平的基基本保障障。是全全国范围围内实验验动物工工作统一一的技术术要求。是科技人人员需要要共同遵遵守的准准则和依依据。四、实验验动物管管理条例例湖北省省实验动动物管理理条例分为八八章三十十九条。湖北省实实验动物物网上管管理平台台动物福利利（annimaal wwelffaree）指为为了保证证动物在在健康舒舒适的状状态下生生存，而而人为给给动物提提供的相相应物质质条件和和采用的的行为方方式，以以保证动动物处于于生理和和心理愉愉快的感感受状态态。实

20、验动物物福利的的内涵由于实验验动物是是为实验验而生、为实验验而长、为实验验而死，那那么如何何避免因因各种形形式的实实验给动动物带来来不同程程度的疼疼痛和痛痛苦就成成为了实实验动物物福利中中带有根根本性的的问题。1、 “善待待活着的的动物，减减少死亡亡的痛苦苦”。动物应享享有5大自由由：与国外相相比，我我国实验验动物福福利立法法相对落落后。119888年颁布布的实验动动物管理理条例中仅简简单地提提到“从事实实验动物物工作的的人员对对实验动动物必须须爱护，不不得戏弄弄或虐待待。”中华人民民共和国国科学技技术部令令第111号国家科技技计划实实施中科科研不端端行为处处理办法法（试行行）20066年11

21、月7日第三条本办法法所称的的科研不不端行为为，是指指违反科科学共同同体公认认的科研研行为准准则的行行为，包包括：（一）在在有关人人员职称称、简历历以及研研究基础础等方面面提供虚虚假信息息；（二）抄抄袭、剽剽窃他人人科研成成果；（三三）捏造造或篡改改科研数数据；（四四）在涉涉及人体体的研究究中，违违反知情情同意、保护隐隐私等规规定；（五五）违反反实验动动物保护护规范；（六六）其他他科研不不端行为为。随着科技技的进步步、加入入世贸组组织和国国际交流流的增多多，国家家越来越越意识到到实验动动物福利利的重要要性。220066年发布布实施的的关于善善待实验验动物的的指导性性意见，是我我国第一一部专门门用

22、于指指导科技技管理人人员和技技术人员员重视实实验动物物福利的的政策性性文件。关于善待待实验动动物的指指导性意意见科学学技术部部办公厅厅20006年10月8日印发发第一章总总则第二章饲饲养管理理过程中中善待实实验动物物的指导导性意见见第三章应应用过程程中善待待实验动动物的指指导性意意见第四章动动物运输输过程中中善待实实验动物物的指导导性意见见第五章善善待实验验动物的的相关措措施第六章附附则主张动物物福利是是一个严严肃的道道德议题题、科学学议题、法律议议题和政政治议题题。为了维护护实验动动物福利利，规范范实验动动物伦理理审查和和实验动动物从业业人员的的职业行行为，根根据国家家科学技技术委员员会发布

23、布施行的的实验动动物管理理条例和国家家有关法法律、法法规，参参考国际际惯例，国国内许多多单位都都成立了了实验动动物伦理理委员会会，负责责受理实实验动物物伦理审审查的申申请。各类实验验动物的的饲养和和动物实实验都应应获得伦伦理委员员会的批批准方可可开始，并并接受日日常的监监督检查查。对严重违违反实验验动物福福利伦理理审查的的部门和和个人，实实验动物物伦理委委员会将将作出限限期整改改决定，作作为警示示信息记记录到信信用信息息管理系系统，并并公示。不久的将将来动物物保护和和动物福福利将成成为国际际市场准准入的重重要条件件。3R（减减少、替替代、优优化）原原则减少（RReduuctiion）：是指如如

24、果某一一研究方方案中必必须使用用实验动动物，同同时又没没有可行行的替代代方法，则则应把使使用动物物的数量量降低到到实现科科研目的的所需的的最小量量。替代（RRepllaceemennt）：是指使使用低等等级动物物代替高高等级动动物，或或不使用用活的脊脊椎动物物进行实实验，而而采用其其它方法法达到与与动物实实验相同同的目的的。优化（RRefiinemmentt）：是是指通过过改善动动物设施施、饲养养管理和和实验条条件，精精选实验验动物、技术路路线和实实验手段段，优化化实验操操作技术术，尽量量减少实实验过程程对动物物机体的的损伤，减减轻动物物遭受的的痛苦和和应激反反应，使使动物实实验得出出科学的的

25、结果。目前“33R”已已成为国国际实验验动物学学发展的的主要趋趋势。安死术：是指用用公众认认可的、以人道道的方法法处死动动物的技技术。其其含义是是使动物物在没有有惊恐和和痛苦的的状态下下安静地地、无痛痛苦地死死亡。Euthhanaasiaa表达人们们对实验验动物的的怀念和和敬意提醒大家家在动物物实验研研究过程程中关爱爱实验动动物，重重视实验验动物的的生命，提提高科学学研究实实验结果果的质量量，让实实验动物物牺牲的的值得！第二讲实实验动物物遗传质质量控制制第一节实实验动物物的遗传传学分类类一、分类类同源突变变近交系系近交系同同源导入入近交系系相同基因因类型分分离近交交系品系系重组近交交系杂交F1

26、1代远交种不同基因因类型封封闭群突突变种品品种二、实验验动物品品种( strrainn )与与品系( sttockk )概念：指具有相相似的外外貌特征征，独特特的生物物学特性性以及稳稳定的遗遗传性能能，共同同遗传来来源和一一定遗传传结构的的动物群群体。品系与品品种差异异：1、品系系比品种种的群体体特点更更加突出出。2、品系系的性状状及适应应性必须须相同。3、品系系的基因因型相同同。第二节近近交系一、概念念近交系( innbreed sstraain )：指至少经经连续220代以以上全同同胞交配配或亲子子交配培培育而成成，品系系内所有有个体都都可追溯溯到起源源于200代或以以后代数数的一对对共同

27、祖祖先，近近交系数数达988.6%以上的的遗传群群体。命名：C3H（F1330）近交系数数：指群体中中某个个个体通过过遗传携携带两个个同源等等位基因因的概率率。Fn=1-(1-F)n 1000%全同胞F=119.11%同父异母母F=111.00%堂兄妹F=88%亲子交配配F=119.11%近交衰退退( iinbrred innflaatioon )：指在近交交过程中中动物群群体由于于基因分分离和纯纯合而产产生的不不利于个个体和群群体发育育的现象象。近交衰退退包括：1.由于于有害隐隐性基因因的纯合合，出现现遗传缺缺陷或某种疾病病发生率率的提高高。2.影响响繁育如如产子数数下降、母性不不良。3.个

28、体体发育不不良，对对环境的的适应性性差。亚系( subbstrrainn )：指育成的的近交系系在繁育育过程中中，由于于残余杂杂合基因因的分离离、基因因突变的的产生和和抽样误误差导致致部分遗遗传组成成改变而而形成遗遗传差异异的近交交系动物物群体。命名：DBA/2 ；CBAA/J ；C577BL/6J常用小鼠鼠近交系系名称缩缩写B=C557BLL；B6=C577BL/6；C=BAALB/c；CB=CBAA；C3=CC3H； D=DDBA； D22=DBBA/22亚系分化化：1. 全全同胞交交配达440代之之前形成成分支，很很可能由由于残余余杂合基基因分离离导致。2. 一一个分支支与其他他分支分分

29、开繁殖殖超过1100代代，可能能由突变变形成。3. 已已发现一一个分支支与其他他分支存存在遗传传差异。产生这这种差异异的原因因可能是是残留杂杂合、突突变或遗遗传污染染（geenettic conntamminaatioon）支系（ssubllinee）:由于饲养养环境的的改变，或或对动物物进行人人为的技技术处理理，对某某些动物物特征产产生影响响，形成成不同的的支系。如：引种种、精卵或胚胚胎移植植(eggg oor eembrryo traansffer,e)、代乳(ffostter nurrsinng,ff)、人工喂养养(haand-reaarinng,hh)、冷冻保存存(frreezze p

30、presservvatiion,p)。命名：C3fBB6：由由C577BL/6代乳乳的C33H品系系。C57BBL/66peCCBA/H：C57BBL/66的受精精卵经冷冷冻保存存移植到CBAA/H妊妊娠、代代乳获得得。二、近交交系的特特征基因纯合合性( hommozyygossityy )遗传稳定定性( staabillityy )遗传同源源性( isoogenniciity )表型一致致性( uniiforrmitty )个体性( inndivviduualiity )可分辨性性( iidenntifficaatioon )分布的广广泛性资料可查查性三、常用用近交系系品系BALBB/cAA

31、nN遗传背景景：19233年Macc Doowelll近交交26代引引到Snnelll（加/cc）19335年引引到Annderrvonnt（An：美美国国立立肿瘤研研究所AAndeervoont 博士）119511年72代引引到NIIH。单单倍型为为H-22dC57BBL/66J/Olaa遗传背景景：19211年Litttlee获得C557BLL，19337年分分成两个个亚系CC57BBL/66和C577BL/10，19774年从从JAXX引种到到LACC，19883年引引种到OOLACC（英国国牛津实实验动物物场）。单倍型型为H-2b。DBA/2N遗传背景景：19099年Litttlee培

32、育，119511年由JAAX引到到NIHH。淡棕棕色。单单倍型为为H-22dC3H/He/Olla遗传背景景：19200年Strrongg用Baggg白化化雌鼠与与DBAA雄鼠交交配后，选选择高乳乳腺肿瘤瘤发病率率动物培培育，119300年引到到Anddervvontt近交355代后，于于19441年引引到Heestoon，19778年引引到OLLAC。野鼠色色。单倍倍型为HH-2kkCBA/J/Olaa遗传背景景：19200年Strrongg用Baggg白化化雌鼠与与DBAA雄鼠交交配后，选选择低乳乳腺肿瘤瘤发病率率动物培培育培育育，19947年年引到AAndeervoont近近交355代后

33、，于于19448年引引到JAAX，19883年引引到OLLAC。野鼠色色。单倍倍型为HH-2kk第三节同同源导入入、同源源突变和和分离近近交系一、同源源性（hhomoologgouss）指基因的的来源相相同，即即控制同同类性状状的基因因。二、同源源突变近近交系和和同源导导入近交交系同源突变变近交系系（cooisoogennic inbbredd sttraiin）：两个近交交系，除除一个指指明位点点等位基基因不同同外，其其他遗传传基因相相同。命名：C57BBL/66J-bg/bg原品系突突变基因因以纯合合状态保保存同源导入入近交系系（coongeenicc innbreed sstraain）

34、：通过杂交交-互交或或回交等等方式将将一个基基因导入入到近交交系中，由由此形成成的一个个新近交交系与原原近交系系只在一一个小染染色体片片段上的的基因不不同。命名：B10.12-H-112b配系C557BLL/100 供系1229 目的的基因符符号三、分离离近交系系分离近交交系( seggreggatiing inbbredd sttraiin )：培育近交交系的同同时，采采取一定定的交配配方法使使个别位位点的基基因处于于杂合状状态，从从而分离离出该基基因位点点上带有有不同等等位基因因的两个个近交亚亚系。命名：DW-ddw/+品系杂合合基因符符号第四节重重组近交交系和系系统杂交交动物一、重组组近

35、交系系( rrecoombiinannt iinbrred strrainn RRI)概念：由两个无无血缘关关系的近近交系杂杂交后得得到F22代，分分组分别别连续220代以以上全同同胞交配配而育成成的一组组近交系系。RI特点点：1、RII的遗传传成分虽虽然限于于两个祖祖系，但但不均等。2、与普普通近交交系一样样，具有有极高的的纯合性性。3、品系系分布模模式的形形成，由由基因自自由组合合与互换换导致。应用：1、分离离分析2、连锁锁分析3、功能能分析二、系统统杂交动动物( hybbridds )概念：由不同品品系或种种群之间间杂交产产生的后后代。杂交一代代动物：由两个无无关的近近交品系系杂交而而繁

36、殖的的第一代代动物，其其遗传组组成均等等地来自自两个近近交品系系，属遗遗传均一一并具有有表现型型相同的的动物。应用：1、干细细胞研究究。2、移植植免疫研研究。3、细胞胞动力学学研究。4、单抗抗研究第五节封封闭群动动物一、群体体的遗传传结构基因频率率( aalleeless frrequuenccy )：在一个二二倍体群群体中某某一基因因对其等等位基因因的相对对比率(p、q)。基因型频频率(ggenootyppe ffreqquenncy )：一个群体体中某一一性状的的各种基基因型间间的比率率(D、H、R)。基因频率率与基因因型频率率的关系系P=D+1/22H q=RR+1/2H 随机交配配(

37、rranddom mattingg )：在一个有有性繁殖殖的生物物群体中中，任何何一个雌雌性或雄雄性的个个体与任任何一个个相反性性别的个个体交配配的概率率都相等等。Harddy-WWeinnberrg定律律：1、在随随机交配配的大群群体中，如如果没有有突变、选择和和迁移，则则群体每每一世代代的基因因频率保保持不变变。2、任何何一个大大群体，无无论其基基因频率率如何，只只要经一一代随机机交配，基基因型频频率达到到平衡。3、平衡衡状态下下D=p22 H=2pqq R=qq2二、封闭闭群动物物（clloseed ccoloony）定义：以非近亲亲交配方方式进行行繁殖生生产，在在不从外外部引入入新的血

38、血缘条件件下，至至少连续续繁殖44代以上上的种群群。特点：1、一定定的杂合合性：不不引入新新的基因因，又不不使群体体内基因因丢失。2、相对对的稳定定性：群群体在一一定范围围内保持持相对稳稳定的遗遗传特征征。3、个体体差异取取决于祖祖代动物物。4、较强强的繁殖殖力、抗抗病力。5、群体体易保存存有模型型价值的的突变基基因。命名：N：NIIH由美国国国立卫生生研究院院保存的的NIHH小鼠。应用：1、类似似人群体体遗传的的异质性性组成，在在药物筛筛选、毒性性试验方方面有不不可替代代的作用用。2、可大大量供应应，用于于预试验验、教学学。3、用于于携带突突变基因因。一、近交交系的遗遗传监测测免疫学方方法1

39、、皮肤肤移植：背部、耳部、尾部，但但雌性对对雄性的YY抗原产产生排斥斥。2、血凝凝试验3、细胞胞毒试验验4、免疫疫双扩散散试验生化电泳泳法1、生化化标记：同工酶酶、同种种异构蛋蛋白。2、支持持物：纸纸电泳、凝胶电电泳、薄薄膜电泳泳。形态学方方法1、毛色色基因检检测法2、下颌颌骨测量量分子生物物学技术术1、限制制性片段段长多态态2、简单单序列长长多态3、DNNA指纹纹二、封闭闭群动物物的遗传传监测群体的形形态学：毛色、体型、体重、下颌骨骨繁殖性能能：离乳乳率、产产仔率血液常数数：白细细胞计数数、红细细胞计数数、血红红蛋白含含量一些质量量性状的的基因与与基因型型频率：生化标标记、免免疫遗传传标记第

40、一节实实验动物物分级实验动物物微生物物分级的的依据1 动物本本身的净净化程度度2、动物物生活环环境的净净化程度度二、国内内与国际际实验动动物微生生物分级级标准第二节普普通动物物（CVV）一、基本本概念二、普通通动物的的管理与与用途三、实验验动物常常见人兽兽共患病病四、动物物间烈性性传染病病低：微生生物分级级中级别别最低低：生活活的环境境要求低低低：微生生物控制制标准低低低：质量量较低低：在实实验研究究中敏感感性低三、实验验动物常常见人兽兽共患病病1、狂犬犬病（狂狂犬病毒毒 taabess viiruss)（1）临临床上分分狂暴型型和麻痹痹型。感感染犬以以极度兴兴奋、狂狂躁不安安、流涎涎、攻击击

41、人兽为为特征。（2）我我国是高高发地区区之一。全球均均有发生生，以亚亚洲和非非洲为主主。（3）所所有的温温血动物物都对RRV易感感。 (4)实验用用犬进行行疫苗接接种。（5）感感染后大大多呈预预后良好好，仅有有极少数数病例死死亡。不显著感感染；无脑膜炎炎症状的的流感样样疾病；无菌性脑脑膜炎；脑膜脑脊脊髓炎；沙门氏菌菌在自然然界分布布广泛，主主要引起起消化系系统的疾疾病。实实验动物物的沙门门氏菌主主要是由由鼠伤寒寒沙门氏氏菌和肠肠炎沙门门氏菌引引起，多多种动物物均能感感染，尤尤以小鼠鼠和豚鼠鼠易感性性最高。消化道感感染，不不能通过过胎盘。对化学学消毒剂剂的抵抗抗力不强强。中间宿主主：猫等等45种

42、哺哺乳动物物、700种鸟类类和5种冷血血动物。终末宿宿主：猫猫1、鼠痘痘（mouuse poxx）（脱脚脚病)小鼠急性性烈性传传染病，急急性突然然死亡。慢性表现现为：脚脚、尾和和鼻部出出现皮疹疹和溃疡疡，严重重者可见见脚、尾尾坏死脱脱落。隐性感染染无临床床症状，实实验激活活鼠痘病病毒而使使鼠痘流流行。2、兔出出血症（rabbit epidermic hemorrhagic fever）（1)是是家兔的的一种急急性烈性性传染病病。(2)具具有传播播快、病病程短，发发病率和和死亡率率高的特特点。分分为急性性和慢性性，但多多呈急性性发病。(3)主主要感染染青壮年年兔，且且病情严严重，多多呈急性性经过

43、。(4)接接种疫苗苗后，33-4天天后即可可产生较较强的免免疫力，免免疫效果果可持续续6个月以以上。在使用普普通级动动物进行行试验时时，要注注意 1、到到具有动动物生产产许可证证的单位位去购买买动物 2、在在具有动动物使用用许可证证的环境境下实验验 3、犬犬、兔可可以接种种一些指指定的疫疫苗4、购回回动物后后要严格格检疫。第三节清清洁级动动物与无无特定病病原体动动物、基本本概念二、潜在在感染的的病毒三、条件件致病菌菌四、对实实验干扰扰大的寄寄生虫五、应用用与饲养养管理1、清洁洁级动物物(Clleann annimaals,CL)（1）是是根据我我国国情情而设立立的等级级动物。（2）除除普通动动

44、物应该该排除的的病原体体外还不不携带对对科学研研究干扰扰大的病病原体（3）来来源于SSPF动动物或剖剖腹产动动物。（4）饲饲养在屏屏障系统统中。（5）目目前我们们国家使使用广泛泛的实验验动物。特点：33个不应应有1、不应应有异常常的死亡亡。2、不应应有明显显的疾病病症状。3、尸体体解剖时时，主要要脏器、组织无无论是眼眼观还是是病理切切片均不不应有无无病变。（1）国国际通用用（2）除除清洁级级动物应应排除的的病原体体外，不不携带主要潜在在感染或或条件致致病和对对研究实实验干扰扰大的寄生生虫及病病原（3）SSPF动动物来源源于无菌菌动物（4）饲饲养在屏屏障系统统中（5）目目前我们们国家使使用广泛泛

45、的实验验动物（二）清清洁级动动物和SSPF动动物的共共同特点点：在屏障系系统里生生活内环境中中没有致致病强的的微生物物及寄生生虫生产、实实验的效效果比普普通动物物好一旦遭到到污染后后，病原原体的传传播强烈烈在我们国国家广泛泛地被应应用可引起起小鼠致致死性肝肝炎、脑脑炎和肠肠炎改变肝肝酶的活活性改变小小鼠机体体的各种种免疫应应答参数数感染的的裸小鼠鼠常呈暴暴发性发发病，迅迅速消瘦瘦，出现现进行性性消耗综综合症（四）、啮齿类类动物细细小病毒毒小鼠细小小病毒(Minnutee viiruss off miice MVMM)和大大鼠细小小病毒(Ratt paarvoovirrus)。是迄今所所知的唯唯

46、一抗癌癌谱广、具有高高度抗癌癌特异性性的微生生物，对对肝癌、胃癌、肉瘤等等多种肿肿瘤均有有明显杀杀伤作用用，故其其感染将将会给肿肿瘤的研研究造成成严重的的干扰。（一）.支气管管败血性性波氏杆杆菌（BB.brrochhiseeptiica）家兔和和豚鼠尤尤为敏感感，侵害害部位是是呼吸器器官（鼻鼻腔炎、支气管管肺炎）。本菌对对环境抵抵抗力较较强，可可在异种种动物间间互相传传染，传传播性强强。在不良良情况下下可使动动物发病病。（二）.巴氏杆杆菌(PPastteurrellla)多杀巴巴斯德菌菌(Pmulltoccidaa) 对兔兔和小鼠鼠有较强强的致病病作用，主主要侵袭袭部位呼呼吸系统统。嗜肺巴巴斯

47、德菌菌(Ppneeumootroopicca)在动物物的呼吸吸道、生生殖道带带菌率较较高，但但致病性性不强。（清洁级级大鼠）五、应用用与饲养养管理1应用用（1）清清洁级动动物：是是根据我我国国情情而设立立的等级级动物。（2）SSPF动动物：是是国际标标准级别别的实验验动物。一、概念念二、特征征三、培育育与饲养养管理四、应用用（放在在悉生动动物一起起讲）无菌动物物在自然然界并不不存在，必必须人为为的建成成。消化系统统：肠道道肌层薄薄。盲肠肠肥大。肝脏重重量相对对下降。营养：体体内不能能合成维维生素BB和K。代谢：代代谢周期期长，无无菌动物物血液中中含氮量量少，肠肠管对水水的吸收收率低。寿命：长长

48、。三、无菌菌动物的的培育饲饲养管理理 1 无无菌动物物在自然然界并不不存在，必必须用人人为的方方法培育育而成。 2 饲养在在隔离系系统中； 3 所用一一切经过过消毒灭灭菌处理理 44 要定定期对环环境和动动物进行行检测 55 补补充维生生素K、B无菌动物物在消化化与代谢谢方面中中有以下下特征：肠道肌层层薄，盲盲肠肥大大体内不能能合成维维生素BB和K代谢周期期长二、无菌菌动物和和悉生动动物的应应用能够广泛泛地应用用于生命命科学的的各个领领域各个级别别动物的的先驱。（2）、衰老机机理研究究无菌动物物的寿命命比同种种普通动动物的寿寿命长，对对233年龄无无菌大鼠鼠的研究究证明，其其心、肾肾、肺、脑等

49、部部位没有有检出与与年龄相相关的病病变，而而作为对对照组SSFP大大鼠则有有这种变变化。（3）、免疫学学研究球蛋白来来自与消消化道菌菌的刺激激。给无无菌动物物喂无抗抗原的饲饲料时，动动物血清清完全没没有丙种种球蛋白白和特异异性抗体体存在。无菌动物物血液中中无特异异性抗体体，很适适合做各各种免疫疫现象的的研究。无抗原动动物应用用疾病病的诊断断4. 检检测频率率普通动物物清洁动物物 SPFF动物实验动物物与环境境一、实验验动物的的环境实验动物物的环境境控制是是实验动动物标准准化的主主要内容容之一。实验动物物一般都都较长时时间甚至至终身被被限制在在一个极极其有限限的环境境范围内内生活，这这种环境境就

50、成了了实验动动物赖以以生存的的条件。为了使实实验动物物能够正正常生长长、发育育、繁殖殖和进行行良好的的实验处处理，正正确认识识环境因因素对实实验动物物的影响响就显得得十分重重要。主要内容容1、环境境控制的的重要性性2、环境境影响因因素的分分类3、实验验动物设设施的分分类4、实验验动物的的饲养条条件5、实验验动物的的营养控控制动物性状状的表现现决定于于多种因因素，主主要是遗遗传因素素和环境境因素的的综合结结果。遗传基因因是决定定生物性性状的物物质基础础，但在在个体发发育中，基基因作用用的表现现离不开开环境的的影响。一个性状状的正常常表现不不仅需要要完善的的一组基基因，而而且需要要正常的的环境。动

51、物性状状的表现现决定于于多种因因素，主主要是遗遗传因素素和环境境因素的的综合结结果。基因型发育育环境表现型周围围环境演出型动物实验验是对演演出型的的一种影影响处置置。为了了求得动动物对处处理结果果的可信信性和可可重复性性，就要要求演出出型的稳稳定，积积极控制制影响动物机机体的遗遗传基因因和环境境条件。环境因素素的重要要性实验动物物的环境境因素比比较复杂杂，包括括两个方方面，即即自然因因素（包包括物理理、化学学、生物物学因素素）和人人为因素素。环境因素素的重要要性不论是自自然因素素，还是是人为因因素都不不是孤立立的，而而是互相相联系而而产生影影响的。环境因因素有“有利”和“有害”作用两两个方面面

52、。因此此实验动动物环境境因素控控制的原原则是，充充分利用用和创造造那些有有利的因因素，消消除和防防止那些些有害因因素得以以保证实实验动物物的健康康和达到到实验利利用的目目的。没有环境境控制就就没有实实验动物物！二、环境境因素的的分类实验动物物的环境境是指围围绕实验验动物客客观事物物的总和和，主要要包括外外环境和和内环境境两大部部分。外环境主主要是实实验动物物饲育和和实验场场所外的的周围环环境。内环境主主要是指指实验动动物饲育育和实验验场所内内的环境境。环境对动动物的影影响并非非仅受上上述诸因因素中各各个单一一因素的的作用，而而是受到到多种因因素的复复合作用用。在论述实实验动物物的环境境时，有有

53、必要经经常按复复合环境境(ennvirronmmenttal commpleex)状状态加以以考虑。第二节气气候因素素一、温、湿度：动物实验验时最适适宜的环环境温度度为：221-255，GB目前前18-299 。温度对实实验动物物的影响响环境温度度可影响响动物的的生殖机机能。环境温度度可影响响动物机机体的抵抵抗力。环境温度度可影响响动物的的脏器重重量。环境温度度可影响响动物的的新陈代代谢。环境温度度可影响响动物的的实验反反应性。暴露在高高温或低低温环境境下的动动物，对对其神经经系统、内分泌泌系统以以及各种种酶活性性的亢进进或抑制制等均有有影响。二、湿度度：动物试验验中适宜宜的相对对湿度范范围是

54、440%-700%。空空气的相相对湿度度对动物物的体温温调节有有密切关关系，在在高温情情况下，影影响尤其其明显。高温高高湿导致致机体蒸蒸发散热热受阻，引引起动物物代谢紊紊乱和抵抵抗力下下降，动动物的发发病率和和死亡率率也明显显增加。温度过过高，微微生物易易于繁殖殖和传播播，垫料料、饲料料也容易易发生霉霉变。相对湿度度过低可可导致粉粉尘飞扬扬，引起起动物和和人的呼呼吸道疾疾病。相相对湿度度在400%以下下实验大大鼠可发发生环尾尾病（rringgtaii)。动动物室内内变态反反应原的的含量随随湿度的的下降而而上升。三、气流流与风速速动物试验验室内风风速一般般控制在在0.110.2m/s,换换气次数

55、数在100200次/h。合理组织织气流和和风速可可调节室室内温度度和湿度度，又可可降低室室内粉尘尘和有害害气体污污染，甚甚至可以以控制传传染病的的流行。动物室内内气流速速度过小小,空气流流通不良良,动物缺缺氧,室内有有害气体体浓度升升高,散热困困难,易造成成呼吸道道传染病病的传播播,甚至死死亡。动物室内内气流速速度过大大，使动动物体表表散热量量增加危危及动物物健康，影影响动物物实验结结果。动物设施施内各区区域的静静压状况况（正压压、负压压）决定定了动物物室内空空气流动动的方向向。一般动物物室内要要求保证证正压状状态，确确保病原原微生物物不至侵侵入动物物室内。在感染染或放射射性动物物实验室室，室

56、内内必须处处于负压压状态。GB规定定实验动动物设施施内压力力梯度为为2050PPa。第三节物物理化学学因素一、光照照作为实验验动物环环境的光光照有三三个次级级因素对对实验动动物有影影响：1、照度度2、光线线波长3、明暗暗交替时时间目前GBB动物实实验设施施环境指指标规定定动物试试验室工工作照度度为15503300llx；小小动物照照度为115220lxx；大动动物照度度为10002200llx；昼昼夜明暗暗交替时时间（hh)为12/12或或10/14。噪声噪声是影影响实验验动物健健康的重重要环境境因素。噪声可可引起实实验动物物烦躁不不安、紧紧张、呼呼吸和心心跳加快快、血压压升高、肾上腺腺皮质激

57、激素增高高等一系系列的生生理变化化。GB规定定实验动动物饲养养观察室室的音响响应在660dBB以下。空气洁净净状况1粉尘尘空气中浮浮游的微微粒总称称空气溶溶胶(aaerooso11)，分分别按其其状态，物物理化学学生成过过程以及及大小而而分为粉粉尘(ddustt)、烟烟尘(ffumee)、薄薄雾(mmistt)、浓浓雾(ffog)、烟(ssmokke)。实验动物物饲养室室空气中中颗粒物物的来源源主要有有两个途途径： 11、室外外空气未未经过滤滤处理直直接带入入：2、动物物体表被被毛、皮皮屑、饲饲料和垫垫料等材材料的碎碎屑被气气流携带带或动物物活动扬扬起在空空气中悬悬浮，形形成颗粒粒物污染染。颗

58、粒物对对实验动动物和工工作人员员的健康康有很大大影响，颗颗粒物作作为过敏敏原可引引起实验验动物和和人的呼呼吸系统统疾病和和过敏性性皮炎等等；还可可成为微微生物的的载体，把把各种微微生物粒粒子包括括饲料、垫料中中带入的的粉螨、霉菌孢孢子、各各种细菌菌及其芽芽孢和病病毒带入入饲养室室，而引引起多种种传染病病。2臭气气所谓恶臭臭物质(mallodoor，caccosmmia，stiink matteriial)是指对对人产生生不快的的气味或或可能破破坏生活活环境的的可怕物物质。动动物室内内的主要要有害气气体有氨氨气、甲甲基硫醇醇、硫化化氢、硫硫化甲基基、三甲甲胺、本本乙烯、乙醛和和二硫化化甲基等等八

59、种。空气中氨氨的含量量是衡量量空气质质量的指指标，在在动物实实验室要要求不超超过144mg/m3(相当于于20pppm)。空气气中氨含含量增多多刺激动动物粘膜膜引起动动物流泪泪、咳嗽嗽等，严严重者可可引起粘粘膜发炎炎、肺水水肿和肺肺炎，甚甚至死亡亡。长期处于于高浓度度氨的环环境中，实实验动物物上呼吸吸道可出出现慢性性炎症，使使其失去去使用价价值。生物因素素1、动物物社会因因素和动动物饲养养密度2、微生生物3、其它它动物4、实验验人员动物笼内内饲养动动物密度度的不同同会引起起动物反反应的不不同。因因实验目目的不同同会有差差异。所所以在饲饲养过程程中要注注意防止止动物间间的激烈烈争斗和和咬伤。实验

60、动物物环境设设施条件件的分类类实验动物物设施根根据对饲饲养动物物的微生生物控制制程度和和空气净净化程度度分为隔隔离环境境、屏障障环境和和开放环环境三类类。第五节实实验动物物设施（labboraatorry aanimmal facciliity ,LAAF)是进行实实验动物物饲养、保种维维持、生生产、实实验研究究、试验验等设施施的总称称。包括实验验动物繁繁育、生生产设施施和动物物实验设设施。实验动物物设施是是实验动动物工作作的基本本条件。没有良良好的实实验动物物设施，就就不可能能保证实实验动物物的质量量和动物物实验结结果的准准确和可可靠。一、隔离离环境（隔隔离系统统）隔离环境境(isslatt