循环肿瘤细胞ctc检测

1、循环肿瘤细胞ctc检测循环肿瘤细胞ctc检测第1页循环肿瘤细胞 1869年 Aust Med J，Ashworth最早在转移性癌症患者血液中观察到。年 N Engl J Med，Cristofanilli证实治疗前CTC数目是转移性乳腺癌患者无进展生存期和总生存期独立预测因子。 循环肿瘤细胞指从实体瘤中脱离出来并进入外周血液循环肿瘤细胞。原发肿瘤血管生成浸润侵入血管内侵入血管外(CTC)血管内增殖(CTM)转移转移播散肿瘤细胞（DTC）微转移休眠灶循环肿瘤细胞（CTC）循环肿瘤微栓（CTM）凋亡CTC侵润肿瘤细胞扩增血管生成上皮间质转化（EMT）间质上皮转化（MET）转移到骨髓和其它器官2循环

2、肿瘤细胞ctc检测第2页3循环肿瘤细胞ctc检测第3页获取CTC需要处理技术问题从红细胞和白细胞中富集恶性肿瘤细胞将恶性肿瘤细胞与红细胞、白细胞、正常上皮细胞、造血干细胞等区分开来每10mL血液中可能仅含有几个到几十个循环肿瘤细胞，而10mL血液中含有白细胞约有1亿个，红细胞有500亿个。4循环肿瘤细胞ctc检测第4页三种技术过滤法ISET: Isolation by Size of Epithelial Tumor cells8m孔径过滤膜，漏检体积较小肿瘤细胞敏感性低梯度密度法肿瘤细胞和单核细胞密度小于1.077g/mlCTC纯度低，混入较多白细胞肿瘤细胞会迁移至血浆层，而聚集后轻易下沉聚

3、蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-Hypaque)对细胞有毒性免疫磁珠法肿瘤细胞表面抗原EpCAM与包绕着磁珠特异性单抗相结合CellSearch细胞保留方法长达96小时试验室室间差异小EpCAM假阳性和假阴性Cell Search-免疫磁珠+流式细胞分析+化学发光5循环肿瘤细胞ctc检测第5页CellSearch 是全球第一也是唯一经FDA同意可用于临床循环肿瘤细胞（CTC）产品1983 磁流体6循环肿瘤细胞ctc检测第6页CellSearch免疫磁珠原理7循环肿瘤细胞ctc检测第7页白细胞Anti-CD45CD45NucleusDAPI怎样判别出CTC?藻红蛋白 (PE)变藻蓝蛋白(APC)C

4、TCAnti-EpCAM磁珠Anti-CK-PENucleusDAPICKEpCAM在CellSearch检测中，CTC 被设定为：EpCamCK-8,18 和或19DAPI CD45+-8循环肿瘤细胞ctc检测第8页CellSave 储存管CellSearch CTC检测试剂盒CellSearch: 自动化CTC分离、富集和计数CellTracks AutoPrep系统磁巢MagnestCellTracks Analyzer II96小时稳定年FDA同意CTC质控试剂盒磁力捕捉9循环肿瘤细胞ctc检测第9页CellSearch技术可重复性和高敏感度CellSearch系统是CTC检测当前唯一

5、自动化、标准化平台降低方法学及人工操作引发结果差异试验结果可重复性试验室间结果可比性系统线性系数：R=0.990，线性范围 0-1238系统最低检测程度：7.5ml外周血中1个肿瘤细胞10循环肿瘤细胞ctc检测第10页乳腺癌中CTC研究进展11循环肿瘤细胞ctc检测第11页N Engl J Med. Aug 19;351(8):781-91.Circulating tumor cells, disease progression, and survival in metastatic breast cancer转移性乳腺癌患者治疗前CTC水平是有效预后预测因子。CTC计数小于5患者无进展生存期

6、（PFS）和总生存期（OS）均显著高于CTC计数大于等于5患者。无进展生存期总生存期CTC在乳腺癌中对预后预测IF: 53.48412循环肿瘤细胞ctc检测第12页J Clin Oncol. Mar 1;23(7):1420-30.Circulating tumor cells: a novel prognostic factor for newly diagnosed metastatic breast cancer.CTC在治疗前后都是强烈而独立预后因子。在基线位置检测CTC对于PFS和OS有较高预测意义。CTCs before and after the initiation of th

7、erapy were strong, independent prognostic factors. Detection of CTCs before initiation of first-line therapy in patients with MBC is highly predictive of PFS and OS. 一线化疗前，即基线一线化疗一个疗程后，即34周后IF: 18.97013循环肿瘤细胞ctc检测第13页Clin Cancer Res. Jul 15;12(14 Pt 1):4218-24.Circulating tumor cells at each follow-

8、up time point during therapy of metastatic breast cancer patients predict progression-free and overall survival.CTC在治疗任何时段升高都预示乳腺癌病情进展，预后不良。Detection of elevated CTCs at any time during therapy is an accurate indication of subsequent rapid disease progression and mortality for MBC patients.IF: 7.338

9、14循环肿瘤细胞ctc检测第14页Radiologic Assessment at 12 weeksCTC Assessment at 4.5 weeksCTC Assessment at 10-12 weeks(within two weeks of imaging)CTC Assessment at 8 weeks(within 4 weeks of imaging)Clin Cancer Res. Nov 1;12(21):6403-9.Circulating tumor cells versus imaging-predicting overall survival in metast

10、atic breast cancer.IF: 7.33815循环肿瘤细胞ctc检测第15页J Clin Oncol. Jul 10;27(20):3303-11. Circulating tumor cells and 18F fluorodeoxyglucose positron emission tomography/computed tomography for outcome prediction in metastatic breast cancer.在转移性乳腺癌中，CTC检测到达5个或更多对于MBC治疗监控优于FDG-PET/CT检验。 当CTC计数低于5个时，FDG-PET/C

11、T含有一定预后价值。Detection of five or more CTCs during therapeutic monitoring can accurately predict prognosis in MBC beyond metabolic response. FDG-PET/CT deserves a role in patients who have fewer than five CTCs at midtherapy.CTC与FDG-PET/CT对于乳腺癌治疗监控对比：IF: 18.97016循环肿瘤细胞ctc检测第16页Ann Oncol. Jan;21(1):33-9.

12、 Epub Jul 14.Circulating tumor cells and bone metastases as detected by FDG-PET/CT in patients with metastatic breast cancer.无骨转移只有骨转移有多处器官转移3. 在多处累及患者中，CTC计数仍是预后独立判断因子1. CTC计数21，96%有骨转移，且全部为多处骨转移2. CTC计数越高，越与多处骨转移或多器官转移相关IF: 6.45217循环肿瘤细胞ctc检测第17页FISH分析白细胞有两份CEP7（绿色），EGFR（红色）和MET (蓝色) CTC中， EGFR （红

13、色）和MET (蓝色)基因扩增Br J Cancer. May 11;102(10):1495-502.Improving the yield of circulating tumour cells facilitates molecular characterisation and recognition of discordant HER2 amplification in breast cancer.IF: 4.83118循环肿瘤细胞ctc检测第18页HER2+：使用FISH方法，HER2/CEP172.09/10转移灶为HER2-原发灶肿瘤其转移灶为HER2+患者总数CTC中HER2-

14、患者数量CTC中HER2+患者数量不一致比率在原发肿瘤和CTC中，HER2基因扩增19循环肿瘤细胞ctc检测第19页N Engl J MedCTC升高，PFS和OS均降低，CTC是预后独立预测因子J Clin OncolCTC在治疗前后都是预后强烈而独立预测因子Clin Cancer ResCTC在治疗任何时段升高都预示乳腺癌病情进展，预后不良Clin Cancer ResCTC计数对于乳腺癌病情状态判断要比当前影像学方法更早且更含有可重复性 Ann Oncol 治疗中CTC改变提醒疾病对于治疗反应J Clin OncolCTC检测到达5个或更多对于MBC治疗监控优于FDG-PET/CT检验A

15、nn Oncol CTC计数越高，越与多处骨转移或多器官转移相关CTC在乳腺癌中研究结果回顾20循环肿瘤细胞ctc检测第20页回顾CellSearch研究21循环肿瘤细胞ctc检测第21页利用CellSearch技术研究预后文件回顾22循环肿瘤细胞ctc检测第22页利用CellSearch技术比较CTC与影像学预后文件回顾23循环肿瘤细胞ctc检测第23页FDA同意临床应用24循环肿瘤细胞ctc检测第24页切点意义评定预后依据肿瘤类型不一样，CellSearch对CTC计数结果参考切点(CUTOFF)也不一样高于等于切点，预后不良低于切点，预后良好25循环肿瘤细胞ctc检测第25页CTC数量改

16、变是预后改变主要预测26循环肿瘤细胞ctc检测第26页任何时段，高于切点预后不良任何时段，低于切点预后良好CellSearch在基线时检测CTCCellSearch在每个疗程前检测CTCCellSearch在基线时检测CTCCellSearch在每个疗程前检测CTC27循环肿瘤细胞ctc检测第27页结合CTC检测比单独影像学检验预后更准确乳腺癌中：28循环肿瘤细胞ctc检测第28页结合CTC检测比单独PSA检测预后更准确前列腺癌中29循环肿瘤细胞ctc检测第29页病人案例1 - CellSearch CTC预测骨转移早期进展患者女性，53岁，乳癌术后2年，骨转移年7月-12月给予依西美坦治疗治

17、疗1个月，CTC提前预示治疗无效治疗3个月后，临床指征进展年12月- 年5月给予多西他赛解救化疗4周期后， 影像检验提醒个别骨转移呈成骨改变，疼痛减轻6周期后，CTC连续增高，比影像学提前预测病情进展CTC帮助医生停顿无效治疗PDSDSDPET-CT PD56206430循环肿瘤细胞ctc检测第30页病人案例2 CellSearch CTC改变影像学评价，指导治疗获益患者女性，59岁，乳癌术后3年，肝转移，经历多重晚期治疗，疗效欠佳年转入307医院就诊，接收多西紫杉醇联合希罗达化疗2周期常规MRI，肿瘤进展。若按临床通例，应停顿原有治疗，寻求选项不多治疗方案但因为CTC结果，医生和病人选择继续治疗4周期，普通情况显著改进，MRI验证病变较前退缩6周期后，病情全方面改观疗前 CTC=222周期 CTC=04周期6周期1周期 CT